一种肺癌特异性结合多肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种可与肺癌细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用，该肺癌细胞特异性结合多肽是通过噬菌体展示肽库减性筛选，获得肺癌特异性的噬菌体克隆，再经过Ｅｌｉｓａ、免疫组织化学方法鉴定出与肺癌具有较强亲和力的噬菌体克隆，送去测序得到一条１２多肽，其氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。本发明专利技术筛选得到的１２多肽不但具有传统抗体分子优点，而且分子量小、穿透力强、容易到达肿瘤组织、具有良好的肿瘤靶向作用、诊断肿瘤更加灵敏，可用于制备诊断肿瘤的试剂盒，以及治疗肿瘤的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白质多肽
，具体涉及一种可与肺癌细胞特异性结合 的多肽及其制备方法和应用。
技术介绍
肺癌是世界范围内最常见、致死人数最多的恶性肿瘤之一，其发病率增长 速度亦高居各恶性肿瘤之首。由于肺癌起病隐匿，目前仍缺乏有效的筛査和早期诊断方法，i者出现症状时多为晚期，预后较差，总的五年生存率不超过i5%，有症状者《10%。目前，我国肿瘤患者的5年生存率(临床治愈率)大 约在20%-30%左右，其中肺癌仅10%,肝癌3%左右，长期以来，恶性肿瘤的 治疗是一个世界性的难题。但是，在早期诊断的肺癌患者中，手术治疗的预后较中晚期肺癌明显改善， 其生存率可达70%。临床上传统的诊断方法如胸片、支气管镜、痰细胞学检査 等方法，缺乏足够的特异性和敏感性，大多数肺癌患者确诊时已为晚期，因此， 临床上急需一种能够早期诊断肺癌的方法。近年来，在肺癌的辅助诊断方面，肿瘤标志物(tumor marker, TM)的研 究十分活跃。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞所产生或 分泌并释放到血液、细胞、体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质。它具有 高效、高灵敏、方便、标本易获取及创伤小等优点，因此检测、筛选及鉴定肿 瘤标志物一直是肺癌早期诊断研究的重点。肿瘤标志物对肺癌诊断的价值已经受到广泛的重视，目前尚未发现肺癌特异性抗原，用于检测的肺癌标志物均为肿瘤相关物质。目前，比较有代表意义的肺癌肿瘤标志物主要可以分为以下几类①胚胎抗原如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen， CEA);②糖蛋白类抗原主要 有糖类抗原19-9 (carbohydrate antigen 19-9， CA19-9)、糖类抗原15-3 (carb ohydrate antigen 15-3， CA15-3)、鳞状细胞抗原(squamous cell carcinoma a ntigen， SCC-Ag)等；③角蛋白类抗原包括细胞角蛋白19片段抗原(cytok eratin fragment antigen 21-1， CYFRA21-1)、组织多肽特异性抗原(tissue pol ypeptide specific antigen, TPS)等。④酶类抗原主要包括同工酶类,如胃泌 素释力文月太前体(Pro-gastring peptide, ProGRP)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrog enase， LDH)、谷光苷肽转换酶(glutathione stransferase， GST)和基质金属 蛋白酉每(matrix metalloproteinases， MMPs)等。这些标志物有一定的代表性，但缺点是特异性不高，如在胚胎性肿瘤组织 外,在成人胃肠、肺、乳腺等腺癌组织中均有表达癌胚抗原CEA。因此CEA对 恶性肿瘤的诊断，缺乏特异性，只有参考价值。因此，开发新的特异、灵敏的肺癌肿瘤标志物作为诊断肺癌的方法和新靶 点，迫在眉睫。近十几年来，肿瘤的诊断与治疗已经取得了巨大的进步，尤其是各种图像 分析仪和高灵敏度免疫学技术的应用，使得早期诊断、早期治疗由可能变为现 实，但是仍不容乐观。实践证明，抗体芯片技术将为肿瘤的早期诊断、肿瘤标 志物的筛选与鉴定、药物治疗等提供新的平台，尤其在肿瘤标志物的筛选和鉴 定检测中运用最广泛。邓安梅等(邓安梅,仲人前,陈孙孝，周晔,孔宪涛.用蛋白质芯片联合检测肺癌患者血清中的肿瘤标志物.中国免疫学杂志，2002)利用肿瘤标志物抗体芯 片对肺癌患者、正常人及良性肿瘤血清的CEA， NSE， CA242, CA153等肿 瘤标志物进行检测，阳性率分别为80%， 3.3%， 6.6%，另外，采用常规检测 仪器定量与抗体芯片检测作比较，表明抗体芯片的反应强度与血标本中含量具 有较好的相关性。以上均说明用肿瘤标志物抗体芯片可对肺癌的临床诊治提供 有价值的依据。肺癌的发生与发展具有十分复杂的机制，在致癌因素的作用下患者体内可 表达多种粘附分子及其受体或配体，在肿瘤发展的不同时期其释放标志物含量 也不一样，这些指标绝大多数是非特异性的，尚无一种对各组织类型均具有高 敏感性及高特异性的标志物，而只反映了疾病某些侧面的变化，单一标志物检 测对肺癌的价值有限。目前国内外倾向于筛选有价值的肿瘤标志物进行联合检测，弥补了单项标 志物对各病理组织类型肺癌敏感性不同的缺点，提高了肺癌诊断的敏感性和特 异性，有一定的临床鉴别诊断价值。当前，抗沐药物的研究与开发已成为生物技术药物领域的热点。目前处于临床前期、临床i期与临床n期研究与开发的各类生物技术药物中，抗体药物的品种数量位居前列。至今全球已报道的抗体有10多万种，其中基因工程抗 体有1000多种，人源化抗体有200多种。目前，国际上已有500多种抗体用于诊断与治疗，美国食品药品管理局(F DA)至今已批准18个抗体上市，其中有8个是用于肿瘤治疗的耙向抗体。自 1997年以来，美国FDA已先后批准8种用于治疗肿瘤的抗体药物，包括Rituximab (Rituxan， 1997) 、 Trastuzumab (Herceptin, 1998) 、 Gemtuzumab (M ylotarg， 2000) 、 Alemtuzumab (Campath ， 2001) 、 Ibritumomab (Zevalin， 2002) 、 Tositumomab (Bexxer， 2003) 、 Bevacizumab (Avastin, 2004)禾口 C etuximab (Erbitux， 2004)。其中，Edrecolomab (Panorex， 1995)在欧洲获 批准。2005年我国SFDA批准用于肿瘤的抗体药物有两种，即hR-3 (泰欣生) 和Licartin (Anti—-Habl8G / CD147)。在上述的抗体药物中，Rituxan和Cet uximab为嵌合抗体，Herceptin、 Mylotarg、 Campath、 Avastin禾卩hR-3为人汰g 化抗体，Panorex、 Zevalin和Bexxer为鼠源性抗体。Mylotarg是抗体与抗肿瘤 抗生素calicheamicin的偶联物。Zevalin是抗体与放射性核素9QY的偶联物；B exxer和Licartin则是抗体与放射性核素131I的偶联物。目前美国CeMines公司已研制开发了 CellCorrect LAb检测试剂盒，Cell Mines公司声称，更进一步的研究证实作为鉴别肺癌的生物标志物的特定抗体 具有特异性和一致性，能够作为癌症的诊断检测试验。四川绵阳高新区丽欧生物基因有限公司研究开发了不均一核糖核蛋白Bl (HnRNP Bl)肺癌诊断试剂盒。主要用于肺癌高危人群的普查及肺癌的早期 临床诊断。重庆瑞康生物制药有限公司研制的早期肺癌诊断试剂盒，采用抗肺癌表 面抗原和特异性很高的单克隆抗体来诊断早期肺癌，大大提高了准确性。临床 诊断时，只要抽取患者少量痰液进行检査，数十分钟就可以得出数据。这一诊 断方法能减少因操作人员、诊断时间和地点的不同而产生的误差。专利CN1405184提供一种抗小细胞肺癌多肽混合物，该抗小细胞肺癌多6肽混合物是一种抗小细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌特异性结合多肽，其氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。

【技术特征摘要】
1、一种肺癌特异性结合多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO1所示。2、 一种制备权利要求1所述多肽的方法，其特征在于该方法是通过噬菌 体展示肽库减性筛选，获得肺癌特异性的噬菌体克隆，再从中鉴定出与肺癌具 有较强亲...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧林泉，石磊，郭姣，潘雪刁，潘琴，巫玮，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]