The invention relates to a breast cancer related microRNA detection kit, including: for each breast cancer related to the detection of microRNA has at least one level signal amplifying probe, at least a two signal amplifying probe, and at least a three signal amplifying probe and capture probe, the capture probe breast cancer related microRNA P1 SEQ ID NO.1 sequence from SEQ ID NO.8. The present invention selected capture probe and signal amplification to probe hybridization reaction in the reaction conditions of uniform, there is no non-specific binding between the various probes; the designed probe in the detection of specific resistance, high signal-to-noise ratio. At the same time, the use of a variety of probes makes the identification kit and detection method to form a system with good detection effect.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域,涉及医学和生物技术,具体的是涉及一种乳腺癌相关microRNA检测试剂盒。
技术介绍
MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的,随后组装进RNA诱导的沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC),通过碱基互补配对的方式识别靶miRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶miRNA或者阻遏靶miRNA的翻译。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在美国每年新增约18万病例,死亡约4万例,是仅次于肺癌的第2位癌症死亡原因。在我国,乳腺癌的发病也呈上升趋势。近年来的研究提示,miRNA在乳腺癌发生、发展等各方面都起着重要的作用,广泛参与乳腺癌细胞增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为,与乳腺癌患者的临床分期、分子亚型、组织学分级、淋巴结转移、关键受体表达、远处转移等关键的预后指标相关。其中,部分miRNA起到促癌作用,促癌miRNA往往在肿瘤中过表达,负向调节抑癌基因的表达,进而促进肿瘤的侵染和转移。目前要就发现,miR-17-5P、miR-10b、miR-21、miR-373和miR-520c等在乳腺癌侵染和转移中具有促进作用。与上述情况相反的是,部分miRNA起到抑癌的作用,抑癌miRNA往往在肿瘤发生发展过程中低表达甚至不表达 ...
【技术保护点】
一种乳腺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,包括有:针对每种待检测的乳腺癌相关microRNA有至少一条一级信号放大探针、至少一条二级信号放大探针、和至少一条三级信号放大探针,以及捕获探针,所述乳腺癌相关microRNA选自:hsa‑miR‑148b‑3p、hsa‑miR‑409‑3p、hsa‑miR‑16‑5p、hsa‑miR‑25‑3p、hsa‑miR‑222‑3p、hsa‑miR‑324‑3p、hsa‑miR‑206以及hsa‑miR‑105‑5p中的至少一种,其中:所述捕获探针用于连接目标核酸与一级信号放大探针,每条捕获探针从5’端到3’端依次为特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列,针对不同待检测的乳腺癌相关microRNA的P2序列互不相同;所述一级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P4序列、间隔臂序列、P3序列,P3序列与P2序列互补配对;所述二级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P5序列、间隔臂序列、P6序列;所述P4序列含有至少一个与P5序列互补配对的碱基片段,且每个与P5序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列;所述三级信号放大探针从5’端到3’端依次为 ...
【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,包括有:针对每种待检测的乳腺癌相关microRNA有至少一条一级信号放大探针、至少一条二级信号放大探针、和至少一条三级信号放大探针,以及捕获探针,所述乳腺癌相关microRNA选自:hsa-miR-148b-3p、hsa-miR-409-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-324-3p、hsa-miR-206以及hsa-miR-105-5p中的至少一种,其中:所述捕获探针用于连接目标核酸与一级信号放大探针,每条捕获探针从5’端到3’端依次为特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列,针对不同待检测的乳腺癌相关microRNA的P2序列互不相同;所述一级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P4序列、间隔臂序列、P3序列,P3序列与P2序列互补配对;所述二级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P5序列、间隔臂序列、P6序列;所述P4序列含有至少一个与P5序列互补配对的碱基片段,且每个与P5序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列;所述三级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P8序列、间隔臂序列、P7序列,所述P8序列5’端还修饰有荧光基团,针对不同待检测的乳腺癌相关microRNA的荧光基团的颜色互不相同或发射波长互不相同;所述P6序列含有至少一个与P7序列互补配对的碱基片段,且每个与P7序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列;所述P2序列、P3序列、P4序列、P5序列、P6序列、P7序列、P8序列均为不存在发夹结构,各探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与整个检测体系的其它核酸之间均不存在特异性结合的序列。2.根据权利要求1所述的乳腺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述待检测的乳腺癌相关miRNA的捕获探针的特异性P1序列选自以下中的至少一种:针对hsa-miR-148b-3p的SEQIDNO.1,针对hsa-miR-409-3p的SEQIDNO.2,针对hsa-miR-16-5p的SEQIDNO.3,针对hsa-miR-25-3p的SEQIDNO.4,针对hsa-miR-222-3p的SEQIDNO.5,针对hsa-miR-324-3p的SEQIDNO.6,针对hsa-miR-206的SEQIDNO.7,针对hsa-miR-105-5p的SEQIDNO.8。3.根据权利要求2所述的乳腺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P2序列选自:SEQIDNO.9~SEQIDNO.18;所述P5序列选自:SEQIDNO.29~SEQIDNO.38,所述P7序列选自SEQIDNO.49~SEQIDNO.58;所述P4序列中的所述间隔臂序列为3—10个T;所述P6序列的间隔臂序列为2—10个T,所述P8序列为polyT。4.根据权利要求3所述的乳腺癌相关microRNA检测试...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘苏燕,吴诗扬,董艳,
申请(专利权)人:益善生物技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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