基于金‑上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法技术

基于金‑上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，属于材料化学生物领域。包括制备检测探针所用核酸的设计，金‑上转换纳米粒子四面体检测探针的制备，四面体的功能化，胞内microRNA检测方法的建立。本发明专利技术建立的双信号原位检测胞内microRNA的方法，用于胞内microRNA的实时检测，结果显示，CD信号与目标microRNA浓度在0.073 ‑43.65 fmol/10µg RNA范围内有很好的线性关系，检测限可达到0.03 fmol/10µg RNA；上转换发光强度与目标microRNA浓度的线性范围是0.16 ‑ 43.65 fmol/10µg RNA，最低检测限是0.12 fmol/10µg RNA；是一种超灵敏，高特异性的胞内microRNA的原位检测方法。

【技术实现步骤摘要】

基于金-上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，属于材料化学生物领域。
技术介绍
MicroRNA（miRNA）是一类小分子的非编码调控基因（19~22碱基），广泛地存在于植物、动物及病毒基因之中。miRNA在细胞分化、增殖、凋亡及癌变等生物过程中都扮演着重要的角色，miRNA的表达水平与人类的重大疾病，尤其癌症，密切相关。传统的miRNA检测方法局限于胞内miRNA成像以及基于荧光信号的定量检测。但是荧光信号的光不稳定性、短的量子寿命、易光漂白等特性大大限制了基于荧光信号的胞内原位检测方法的应用。由纳米粒子可控自组装的纳米结构有规则的几何形状，稳定的结构，很强的光学活性。基于这些性质，自组装的纳米结构已经被广泛的应用于生物传感。但是基于纳米组装结构的胞内microRNA的检测还没有报导。近年来，手性等离子光学活性已经成为一个热点话题引起了广泛的关注。发展了很多基于手性纳米组装体的超灵敏的传感检测方法来检测核酸片段和血液中的癌症标志物。但是，在生物领域活的癌细胞中的应用仍然有待探索。近年来，手性自组装纳米材料获得了广泛的关注。本专利技术建立了一种基于金-上转本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于金‑上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，其特征在于, 包括制备检测探针所用核酸的设计，金‑上转换纳米粒子四面体检测探针的制备，四面体的功能化，胞内microRNA‑21检测方法的建立；步骤为：（1）所用DNA序列设计；（2）金‑上转换纳米粒子四面体检测探针的制备；（3）四面体的功能化；（4）胞内microRNA‑21检测方法的建立；（5）不同细胞中microRNA‑21的检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于金-上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，其特征在于,包括制备检测探针所用核酸的设计，金-上转换纳米粒子四面体检测探针的制备，四面体的功能化，胞内microRNA-21检测方法的建立；步骤为：（1）所用DNA序列设计；（2）金-上转换纳米粒子四面体检测探针的制备；（3）四面体的功能化；（4）胞内microRNA-21检测方法的建立；（5）不同细胞中microRNA-21的检测。2.根据权利要求1所述基于金-上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，其特征在于所用DNA序列设计：DNA-Py1：5’-SH-TTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACTGTTCTTTCCCTCAACATCAGTCTGATAAGCTACGGTTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACTTGAC-3’，下划线标注的碱基用硫代磷酸修饰；DNA-Py2：5’-SH-TTTCCGTAGCTTATCAGTTAAGCTAGGGTTTCATTAATCAACATCAGTTCGATAAGCTATTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACAACTT-3’，下划线标注的碱基用硫代磷酸修饰；DNA-Py3：5’-SH-TTTACTAAGCGATTACTGATGTTGATTAATGTTTACAACATCAGTCTGATAAGCTAACTGATTTTGAACAGTAGCTTATCAGGACTCGTGGTC-3’，下划线标注的碱基用硫代磷酸修饰；DNA-Py4：5’-SH-TTTAAGTTGTAGCTTATCAGCTGACTACATTTTTGTCAAGTAGCTTATCAGTTACAGCTCGCTTTATCAGTTAGCTTATCAGAGATCGTAGCT-3’，下划线标注的碱基用硫代磷酸修饰；miR-21：5’-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’，control1：5’-AAGCUUAUCUGACUGAUGUUGU-3’，control2：5’-UACCUUAUCAGACUGAUGCUGA-3’，miR-200b：5’-UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA-3’，let-7d：5’-AGAGGUAGUAGGUUGCAUAGUU-3’。3.根据权利要求1所述基于金-上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法，其特征在于金-上转换纳米粒子四面体检测探针的制备：（1）首先制备金纳米粒子和核酸的偶联物：把20nM的金纳米粒子AuNP分别和DNA-Py3，DNA-Py4按摩尔比1︰3.5比例混合在一起，反应1h后加入NaCl溶液至终浓度为50mM，混合均匀，反应过夜，离心去除游离的核酸，即得到AuNP-DNA-Py3，AuNP-DNA-Py4；（2）然后制备上转换纳米粒子和核酸的偶联物：把20nM的上转换纳米粒子UCNP分别和DNA-Py1，DNA-Py2按摩尔比1︰3.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：匡华，李斯，胥传来，徐丽广，马伟，刘丽强，宋珊珊，吴晓玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32