抗人补体D因子的单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了以高亲和力与人D因子特异性结合的抗体及其抗原结合片段，还提供了编码所述抗体及其抗原结合片段的核酸分子，用于表达所述抗体及其抗原结合片段的表达载体和宿主细胞，以及所述抗体及其抗原结合片段的生产方法。此外，本发明专利技术还提供了包含所述抗体及其抗原结合片段的免疫缀合物以及药物组合物，以及所述抗体及其抗原结合片段在用于制备治疗多种疾病(包括与年龄有关的黄斑变性（AMD）、自身免疫性疾病、系统性红斑狼疮、肾小球肾炎、类风湿性关节炎和成人呼吸窘迫综合症) 的药物中的用途。

Monoclonal antibodies against human complement factor D and uses thereof

The present invention provides antibodies with high affinity and specificity of D and antigen binding fragments, also provides encoding said antibodies and antigen binding fragments of nucleic acid molecules, for the expression of the antibody and antigen binding fragment expression vectors and host cells, combined with the method of production and the fragment of antibody and antigen. In addition, the invention also provides comprising the antibodies and antigen binding fragments of immune conjugates and pharmaceutical compositions, and the antibodies and antigen binding fragments thereof for the preparation in the treatment of various diseases (including age-related macular degeneration (AMD) syndrome, autoimmune disease, systemic lupus erythematosus, glomerulonephritis, rheumatoid arthritis and adult respiratory distress drugs in use).

【技术实现步骤摘要】
抗人补体D因子的单克隆抗体及其用途
本专利技术属于治疗性单克隆抗体领域，更具体地，本专利技术涉及一种针对人补体D因子的抗体；还涉及所述抗体在用于制备治疗多种疾病（包括与年龄有关的黄斑变性（AMD）、自身免疫性疾病、系统性红斑狼疮、肾小球肾炎、类风湿性关节炎和成人呼吸窘迫综合症）药物中的用途。
技术介绍
补体系统是人免疫系统的一部分，可增强（补充）抗体和吞噬细胞从生物体清除微生物和受损细胞的能力，促进炎症并攻击病原体的质膜。它是先天免疫系统的一部分，不会为适应环境的改变而调整，并且在个体的一生中不改变，但可通过适应性免疫系统发挥作用。补体系统由血液中一些小型蛋白组成，通常由肝脏合成，以没有活性的前体（前蛋白）在血液中循环。当其受到触发物刺激时，系统中的蛋白酶会切割特定蛋白质以释放细胞因子并引发一系列的串联反应作进一步裂解。这种补体激活作用可以通过传统途径，凝集素途径和替代途径三种不同的途径进行，而每个相应途径由不同的组分和机制激活（P.N.Nesargikar,B.Spiller,R.Chavez.EuropeanJournalofMicrobiology&Immunology.2012;2:103–11）。传统途径和凝集素途径由相同的成分组成。除了负责初始活化的因子，补体的传统途径通常需要抗原抗体复合物的参与，并且由C1复合物的激活触发。凝集素途径依赖于特定的碳水化合物部分激活，例如位于微生物表面上的甘露聚糖，凝集素途径的激活由甘露糖结合凝集素（Mannose-BindingLectin，MBL）或Ficolins介导，而不是由C1复合物介导。Ficolins是由类似胶原蛋白的细长伸展分子和类似纤维蛋白原的球状结构域组成的寡聚凝集素组，通常对N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）具有特异性。MBL与病原体表面上的甘露糖残基结合，从而激活与MBL相关的丝氨酸蛋白酶，MASP-1和MASP-2。Ficolin与MBL同源，并通过MASP以相似的方式发挥其功能，但与其结合的残基不是甘露聚糖而是其他碳水化合物。最后，替代途径系通过C3的水解而活化，事实上C3的水解是自发性的，在低水平下持续活化。所有三个途径均导致蛋白酶C3转化酶的同源变体的形成，其切割C3形成C3a和C3b。C3b又是裂解C5的C5转化酶的一部分，其最终导致膜攻击复合物（MembraneAttackComplexes，MAC）或可溶性末端补体复合物(solubleTerminalComplementComplex,sTCC)的形成。这些活化过程最终导致白细胞趋药性，巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞等的活化，增高血管通透性，细胞溶解和组织损伤的炎症活性。补体串联需受严谨的调节以防止免疫介导疾病的发生以及宿主细胞在非感染状态下受到脱靶损伤。补体激活和抑制之间的平衡由一系列调节蛋白介导。补体途径的关键抑制剂包括补体D因子（ComplementFactorD，CFD)及H因子（CFH）等等，其功能在于通过平衡附着于正常宿主细胞的活化补体蛋白来确保补体系统靶向外源而不是宿主细胞。补体系统因子的串联作用若因免疫系统的失调而过度活化，或失去控制地活化将导致病理性的炎症和自身免疫性疾病的发生。因此，若能将过度活化或无法控制的活化补体加以适当抑制，在临床上将可以为患有病理性炎症和自身免疫性疾病的患者提供治疗效果。人补体D因子(或人D因子，humanCFD)是激活补体替代途径所必需的高度特异性丝氨酸蛋白酶。它切割与C3b结合的B因子，产生C3b/Bb酶，成为替代途径C3/C5转化酶的活性元件。D因子在人体中的血浆浓度非常低（1.8μg/ml），并且已有证据显示它是激活补体替代途径中具有限速作用的酶（P.H.LesavreandH.J.Müller-Eberhard.J.Exp.Med.,1978;148:1498-1510;J.E.Volanakisetal.,NewEng.J.Med.,1985;312:395-401）。因此，D因子在激活补体替代途径中是相当合适的疾病抑制靶标。在动物模型和离体研究中，已经证明若将补体的活化下调可以有效治疗下列几种病症，包括系统性红斑狼疮和肾小球肾炎（Y.Wangetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.;1996,93:8563-8568）、类风湿性关节炎（Y.Wangetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,1995;92:8955-8959）、心肺血管繞道手术和血液透析（C.S.Rinder,J.Clin.Invest.,1995;96:1564-1572）、器官移植中的超滤排斥（T.J.Kroshusetal.,Transplantation,1995;60:1194-1202）、心肌梗死（J.W.Homeisteretal.,J.Immunol.,1993;150:1055-1064;H.F.Weismanetal.,Science,1990;249:146-151）、缺血再灌注造成的组织损伤（E.A.Amsterdametal.,Am.J.Physiol.,1995;268:H448-H457）和成人呼吸窘迫综合征（R.Rabinovicietal.,J.Immunol.,1992;149:1744-1750）。此外，其他炎性病症和自身免疫疾病也与补体激活密切相关（V.M.Holers,“Complement”,In:ClinicalImmunology:PrinciplesandPractice,R.R.RichEd.,MosbyPress,1996,pp.383-391;B.P.Morgan.Eur.J.Clin.Invest.,1994:24:219-228），包括热损伤、严重哮喘、过敏性休克、肠炎、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、多发性硬化、重症肌无力、牛皮癣、皮肌炎、膜性增生性肾小球肾炎和干燥综合征（Sjogren'ssyndrome）。因此，藉由针对补体系统抑制靶标，如D因子，发展出特异性的抑制剂，例如抗人D因子抗体，能对补体的活化功能下调，则此类抑制剂将具有治疗上述疾病的潜在功效。在这些潜在的疾病靶标中值得一提的是与年龄有关的黄斑变性（Age-relatedMacularDegeneration，AMD）（M.LaCour,J.F.Kiilgaard,M.H.Nissen.DrugsAging2002;19:101-133.）。AMD的问题一般认为是发生在视网膜外部和视网膜色素上皮，遗传倾向、年龄、缺血和环境因素可能在病变发展中扮演主要角色。最近的一些研究报导了AMD和补体串联中的关键蛋白之间的关联。HendrikP.N.Scholl及其同事发现，在患有AMD的患者中，C3d，CFB和CFD显著增加（H.P.Scholl,P.CharbelIssa,M.Walier,S.Janze,B.Pollok-Kopp,F.Bornckeetal.PLoSOne2008;3:e2593.）。这些激活产物存在于循环血液中显示了与AMD有关的炎症不局限于视网膜，而有可能遍及全身。许多正在开发的AMD疗法是以补体串联的特定成分作为靶向。补体疗法还具有潜力能在疾病的早期阶段发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗人补体D因子的抗体，其包含：重链可变区，其包含CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3序列；和轻链可变区，其包含CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3序列，其中：(i) 重链可变区包含SEQ ID NO：7所示的CDR‑H1序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQ ID NO：8所示的CDR‑H2序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQ ID NO：9所示的CDR‑H3序列及其保守修饰的氨基酸序列；和(ii) 轻链可变区包含SEQ ID NO：12所示的CDR‑L1序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQ ID NO：13所示的CDR‑L2序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQ ID NO：14所示的CDR‑L3序列及其保守修饰的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗人补体D因子的抗体，其包含：重链可变区，其包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列；和轻链可变区，其包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列，其中：(i)重链可变区包含SEQIDNO：7所示的CDR-H1序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQIDNO：8所示的CDR-H2序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQIDNO：9所示的CDR-H3序列及其保守修饰的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区包含SEQIDNO：12所示的CDR-L1序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQIDNO：13所示的CDR-L2序列及其保守修饰的氨基酸序列，和SEQIDNO：14所示的CDR-L3序列及其保守修饰的氨基酸序列。2.如权利要求1所述抗体，其特征在于，所述抗体为鼠源的或嵌合的，其重链可变区包含鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或其变体的重链FR区；和其轻链可变区包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链FR区。3.如权利要求2所述抗体，其特征在于，其重链可变区包含SEQIDNO：5所示的氨基酸序列；和其轻链可变区包含SEQIDNO：10所示的氨基酸序列。4.如权利要求1所述抗体，其特征在于，所述抗体为人源化的。5.如权利要求4所述抗体，其特征在于，其重链可变区具有选自SEQIDNOs:16、20、24和28所示的氨基酸序列；和其轻链可变区具有选自SEQIDNOs:18、22、26和30所示的氨基酸序列。6.如权利要求3或5所述的抗体，其特征在于，所述抗体可变区的序列包含一个或更多个氨基酸的替...

【专利技术属性】
技术研发人员：高永娟，孙乃超，周若芸，李强，刘瑞贤，金宜慧，
申请(专利权)人：旭华上海生物研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31