一种用于检测系统性红斑狼疮(SLE)的试剂盒技术方案

本发明专利技术公开了一种用于检测系统性红斑狼疮（SLE)的试剂盒，含有能特异性检测系统性红斑狼疮（SLE)的适配子，该适配子能特异性结合SERPINA6。本发明专利技术的试剂盒能够用于定量检测SERPINA6蛋白的表达量，从而能够用于精确检测系统性红斑狼疮疾病。

A kit for the detection of systemic lupus erythematosus (SLE)

The present invention discloses a kit for detecting systemic lupus erythematosus (SLE), which contains an aptamer capable of specifically detecting systemic lupus erythematosus (SLE), which can specifically bind SERPINA6. The kit of the invention can be used for quantitative detection of the expression amount of SERPINA6 protein and can be used for the accurate detection of systemic lupus erythematosus diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测系统性红斑狼疮(SLE)的试剂盒
本专利技术涉及一种用于检测系统性红斑狼疮(SLE)的试剂盒。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)是自体免疫病因学(autoimmuneetiology)的炎症性紊乱，主要发生在年轻女性中。SLE能影响许多的身体器官系统，包括肾、皮肤、关节、神经系统、浆膜、血细胞和脉管。虽然不清楚SLE的具体诱因，但许多因素与疾病的发展有关，包括基因、种族、激素和环境因素。多种类型抗核抗体的存在是患SLE的重要血清学特点，所以目前SLE的快速诊断主要是依据血清自身抗体检查，再结合以临床表现观察。其中抗核抗体(ANA)对SLE的敏感性为95％，特异性大约为65％，是目前最佳的SLE病情筛选指标，如多次呈阴性，则患SLE的可能性不大；抗双链DNA抗体(dsDNA)对SLE的特异性高达95％，敏感性约为70％，对确诊SLE和判断狼疮活动具有较大的参考价值；抗Sm抗体对SLE的特异性高达99％，但敏感性仅为25％，在SLE不活动时也可呈阳性，故多作为回顾性诊断的重要根据；此外抗单链DNA抗体(ss-DNA)也可作为SLE诊断指标之一。目前临床血检中对以上所述四种指标的检测，主要是采用放射免疫测定法(RIA)，虽然其具有较好的灵敏度、特异性和稳定性，但检测过程较为烦琐，操作不便，而且每次也只能分析一种指标，历时较长，所提供的诊断信息量有限而不全面，诸多的不足为临床诊断和治疗带来了不便。CN104655852A中公开了一种特异性检测血清抗体中高甘露糖型N糖链水平的试剂在制备用于系统性红斑狼疮的诊断和/或预后评估的诊断工具中的应用。所述血清抗体中高甘露糖型N糖链水平的增高与系统性红斑狼疮的发生密切相关，可用于系统性红斑狼疮的早期诊断和/或预后评估，进而用于指导系统性红斑狼疮的治疗。但是该方法在小鼠层面上进行的实验，在人体中是否能够具有相应的鉴定效果无法预期。CN105229470A公开了用于诊断、预后和治疗系统性红斑狼疮(SLE)的方法和试剂，其涉及根据红细胞C4d(EC4d)标志物、B细胞C4d(BC4d)标志物、抗核抗体(ANA)。该方法中涉及了众多的标志物检测种类较多，而且检测不便。目前，临床治疗复杂的自身免疫性疾病(如SLE)的最艰巨的挑战之一是患者的疾病的准确和早期鉴别。此外，没有鉴别出使临床医师或其他人能够准确地确定SLE的病理生理表现、临床活动、对治疗的响应或预后的可靠性诊断标记。
技术实现思路
一种非诊断目的的系统性红斑狼疮阶段性蛋白表达差异图谱模型的构建方法，包括如下步骤:分别采集系统性红斑狼疮患者组、健康对照组的外周血单个核细胞标本；分别对各所述外周血单个核细胞标本进行细胞总蛋白抽提和蛋白浓度测定；将所述细胞总蛋白经蛋白酶消化后，用相对和绝对定量的等量异位标签标记，得到相对和绝对定量的等量异位标签多重标记的多肽；将所述多肽经强阳离子交换和反相液相色谱分离，再进行串联质谱鉴定和相对定量分析，得到所述系统性红斑狼疮阶段性蛋白表达差异图谱模型，通过表型鉴定，最终分析得到了SERPINA6和C4BPA这两个蛋白，以该蛋白作为生物标志物对其表达量进行检测可以用于指导SLE患者中的早期诊断。本专利技术另外提供了SERPINA6和C4BPA这两个蛋白用于制备SLE患者诊断的标志物。另外，本专利技术对SERPINA6在系统性红斑狼疮病人血液中的表达进行了定量检测。另外一方面，本专利技术提供了一种特异性的识别SERPINA6的适配子，其序列如SEQIDNO：1-12所示。另外一方面，本专利技术提供一种试剂盒，用于特异性的诊断系统性红斑狼疮，其包含如SEQIDNO：1-12所示的序列。另外一方面，所述的适配子偶联有磁珠以及筛选标记。有益效果:本专利技术通过差异蛋白筛选，实验结果表明SERPINA6在系统性红斑狼疮出现明显上调表达，可作为系统性红斑狼疮疾病临床诊断标志物。并且本专利技术通过特异性的筛选获得了SERPINA6蛋白特异性结合的适配子，能够用于定量检测SERPINA6蛋白的表达量，从而能够用于精确检测系统性红斑狼疮疾病。附图说明图1是患者血液和健康对照组血液中SERPINA6的浓度的统计分析图。图2是ROC曲线显示蛋白诊断系统性红斑狼疮的特异性和灵敏度。具体实施方式下面结合附图对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。实施例1分别采集系统性红斑狼疮患者20例、健康对照组20例的外周血单个核细胞标本；分别对各所述外周血单个核细胞标本进行细胞总蛋白抽提和蛋白浓度测定；将所述细胞总蛋白经蛋白酶消化后，用相对和绝对定量的等量异位标签标记，得到相对和绝对定量的等量异位标签多重标记的多肽；将所述多肽经强阳离子交换和反相液相色谱分离，再进行串联质谱鉴定和相对定量分析，得到所述系统性红斑狼疮阶段性蛋白表达差异图谱模型，通过表型鉴定，最终分析得到了SERPINA6和C4BPA这两个蛋白，差异表达显著，可以作为生物标志物对其表达量进行检测可以用于指导SLE患者中的早期诊断。另外测量患者血清中SERPINA6浓度明显高于对照组血清(P＜0.05)，参见图1。另外，根据图2ROC曲线设定了SERPINA6的cut-off值为100.3ng/ml，AUC达到了0.9801，其敏感性和特异性均大于93％，阳性率为95.4％。统计分析结果显示，血液中SERPINA6浓度与系统性红斑狼疮密切相关，综合上述实验研究，可以得出结论，SERPINA6在系统性红斑狼疮患者中高分泌，可以作为SERPINA6和正常人群区分的一个特别好的标志物。实施例2适配子的获得采用SELEX技术，筛选得到了特异性结合SERPINA6蛋白的适配子，其序列如下文库为TACGTAGAATGACTCGTGAG(N)35CAGTACGATGGATGCAGTGASER6-1：TACGTAGAATGACTCGTGAGATAATCACCTTCCCTCACATTACAAATACATTCATCAGTACGATGGATGCAGTGASER6-2：TACGTAGAATGACTCGTGAGTATTCCAAACAAAAACCTCTCCACATACCTTTTTACAGTACGATGGATGCAGTGASER6-3：TACGTAGAATGACTCGTGAGCTAAAAAATTTCCTCCCACCCCCAATTCAACTTAACAGTACGATGGATGCAGTGASER6-4：TACGTAGAATGACTCGTGAGCTTATAAAAATCCAACCCCTACACTACATCACACTCAGTACGATGGATGCAGTGASER6-5：TACGTAGAATGACTCGTGAGTATATCAAATACCCAACTCCTCCCAATCTACATCCCAGTACGATGGATGCAGTGASER6-6：TACGTAGAATGACTCGTGAGCATCCCTACTCAATTAATACTAATACCATAATACTCAGTACGATGGATGCAGTGASER6-7：TACGTAGAATGACTCGTGAGTCCTATATACTACCTCTACAAATTCCACTTCATACCAGTACGATGGATGCAGTGASER6-8：TACGTAGAATGACTCGTGAGTTCCCATATACATCC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测系统性红斑狼疮（SLE)的试剂盒，其特征在于：含有能特异性检测系统性红斑狼疮（SLE)的适配子。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测系统性红斑狼疮（SLE)的试剂盒，其特征在于：含有能特异性检测系统性红斑狼疮（SLE)的适配子。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述适配子能特异性结合SERPINA6。3.如权利要求2所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：申冬昌，
申请(专利权)人：申冬昌，
类型：发明
国别省市：四川,51