本发明专利技术公开了一种用于儿童药物性耳聋易感基因检测分析试剂盒。本试剂盒由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的ＤＮＡ样本为检测对象，经过样本ＤＮＡ抽提后，针对线粒体ＤＮＡ Ｍｉｔｏ基因突变进行检测，使用试剂盒在荧光定量ＰＣＲ仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。本发明专利技术提供的儿童药物性耳聋易感基因检测方法简便易行，能快速检测出儿童药物性耳聋易感基因的情况，从而判断其是否有导致药物性耳聋的基因突变存在，从而有助于临床用药的参考，有效减少药物性耳聋的发生率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种疾病易感检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童药物性耳聋易感基因 检测试剂盒。
技术介绍
药物性耳聋被破坏的不是外耳和中耳的声音传导系统(不是传导性聋)，而是感知声音最 重要又最脆弱的部位耳蜗毛细胞遭致药毒损害。毛细胞是听觉神经的末梢感受器，正常情况 下毛细胞把声能转化成生物电冲动传给听觉神经输入大脑中枢，人才能听到外界的各种声音。 耳毒性药物专门伤害毛细胞，让人感受不到外界的声音。这种聋属于感音祌经性聋，难 以治愈。婴幼儿聋不易识别。药物性耳聋不疼不痒，外耳道既不红肿也不流脓，孩子不哭不闹，反而变得安静。它具 有很大的隐蔽性，孩子都变哑了，家长还不知是耳聋引起的。儿童药源性耳聋常为双侧性、 永久性损害。特别是幼儿，由于不会诉说或表达不准确，待家长发现时，语言发育已经受损 害，不仅致聋而且致哑，贻误了治疗时机。调查显示在我国众多的耳聋患者中，因药物毒 性作用致聋者约占一半左右。小心致聋的药物。目前医学上发现的能引起耳聋的药物有60多种。过去知道的主要有链霉素、卡那霉素、 庆大霉素等，近年来发现还有一些药物也具有耳毒性，抗生素类还有丁胺卡那、新霉素、小 诺霉素、红霉素、氯霉素、四环素、多粘菌素、万古霉素、利福平；其他类药物有保泰松、 阿斯匹林、消炎痛、灭滴灵、心得安、苯巴比妥、乙胺碘呋酮等。造成耳聋不仅与药量有关。上海医大曾对4年间用过庆大霉素的175例6个月至8岁的儿童进行电测听检查，发现 都有不同程度的听力损害，严重耳聋121例，2岁以前的损害尤其严重。损害程度与用药总量、给药途径和疗程长短有密切关系。椎管内给药的危害性最大，其次为静脉给药、肌肉给 药和皮肤损伤后表面给药，口服相对安全。两种或多种耳毒性药物联合应用时，发生损害的 几率增高。母亲受害可遗传后代。临床观察发现，有些药物能从母亲的乳汁中分泌出来，损伤婴儿听祌经，引起耳聋。还 有的药物可通过胎盘进入胎儿体内，引起先天性耳聋。近年更进一步发现，有药物性耳聋家族史的人，对耳毒性药物特别敏感，病人有家族聚集性特点。例如一位病人，仅注射0.5克链霉素，很快听力急速下降，出现耳聋，经追访探明，他家祖孙三代竟有7人因注射该药而 致聋。研究探明，药物性耳聋系由细胞线粒体的遗传基因发生变异引起的，即家族的变异基 因可能通过母亲遗传给她的子孙，使之具有潜在的过敏性，此称母系遗传。家族史可看 作是药毒性耳聋的危险因素之一。由此可见，在对婴幼儿，尤其是有家族遗传史的婴幼儿，特别有必要在用药，尤其是用 一些抗生素之前，获知其是否有药物性耳聋的易感基因的信息。但目前还没有相应的检测方 法应用。
技术实现思路
本专利技术提供一种儿童药物性耳聋易感基因分析检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童药物性耳聋易感基因进行检测，从而判断其是否有导致药物性耳聋的基因突变存在，从而有助于临床用药的参考，减少药物性耳聋的发生率。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童遗传自母亲的线粒体DNA Mito DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及儿童药物性耳聋易感基因突变位点的扩增引物。以及与儿童药物性耳聋相关的线粒体DNAMito基因(MT-DNA)突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下上游引物FA 5-ACCCCTACGCATTTATATAGAGGTGA-3 26bp， 上游引物FG 5-CCCCTACGCATTTATATAGAGGTGG-3 25bp， 下游引物R 5-AAGTGTAAGTTGGGTGCTTTGTGTT-3 25bp。所述的阳性对照品有2个，分别包含如下的序列 SEQ1:AACTAAAACC CCTACGCATT TATATAGAGG AGACAAGTCG TAACATGGTAAGTGTACTGG AAAGTGCACT TGGACGAACC AGAGTGTAGC TTAACACAAAGCACCCAACT TACACTTAGG AGATTTCAAC TTAACTTGAC CGCTCTGAGCTAAACCTAGC CCCAAACCCA CTCCACCTTA CTACCAGACA AC; SEQ2:AACTAAAACC CCTACGCATT TATATAGAGG AGGCAAGTCG TAACATGGTAAGTGTACTGG AAAGTGCACT TGGACGAACC AGAGTGTAGC TTAACACAAAGCACCCAACT TACACTTAGG AGATTTCAAC TTAACTTGAC CGCTCTGAGCTAAACCTAGC CCCAAACCCA CTCCACCTTA CTACCAGACA AC。所述的阴性对照品包含的序列为SEQ3:TTCGTTATTG AATCTTGTTT TGGTTCTCTT GTGTGGAATG CATTGTTCTTGCTTCTCTGG AACTTGGGAT ATGATGACAA AAATACGATA TCTCTAAGGCTAATTGCTGT GCGGATGAAA TATATTTGCA CGTCAGTCTG ATCCCATTATGTATATAACA TTAGGAGTTG GTGCATGCTC。本专利技术的使用简便易行，只需取儿童的DNA样本，比如口腔样本进行测试。操作简便， 有助于快速诊断儿童药物性耳聋的遗传因素。为临床用药提供参考，减少药物性耳聋的发生 率。附图说明图l，图2，图3，为荧光定量PCR仪上的扩增曲线图。各图上方的DeltaRnvsCycle, 是指ARn随循环变化的对数扩增图谱；ARn (DeltaRn)是指在给定的一组PCR条件下所 生成荧光信号的对数值。该图的横坐标表示循环数(CycleNumber),纵坐标表示荧光值(Delta Rn)。横线表示荧光域值，曲线与荧光域值线的交叉点所对应的循环数即为Ct值。图l、图2、图3中横线3表示荧光域值；曲线1表示为扩增MT-DNA的引物对FA + R， 扩增样本所生成的扩增曲线；曲线2为扩增MT-DNA的引物对FG + R，这对引物扩增样本 所生成的扩增曲线。图1表示MT-DNA基因AA纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉 点表示达到域值的Ct循环数值为CI ，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环 数值为C2。图2表示MT-DNA基因GG纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉 点表示达到域值的Ct循环数值为C3，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环 数值为C4。图3表示MT-DNA基因AG杂合型样本的产物扩增曲线图曲线2与荧光域值线的交叉 点表示达到域值的Ct循环数值为C5，曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环 数值为C6。具体实施例下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采 用方法如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建 议的步骤和条件。 实施例l:试剂盒本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种儿童药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于：由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混ＰＣＲ反应液含有ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ Ｉ，以及与儿童药物性耳聋相关的线粒体ＤＮＡ Ｍｉｔｏ基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下： 上游引物ＦＡ ５－ＡＣＣＣＣＴＡＣＧＣＡＴＴＴＡＴＡＴＡＧＡＧＧＴＧＡ－３ ２６ｂｐ， 上游引物ＦＧ ５－ＣＣＣＣＴＡＣＧＣＡＴＴＴＡＴＡＴＡＧＡＧＧＴＧＧ－３２５ｂｐ， 下游引物Ｒ ５－ＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＧＧＧＴＧＣＴＴＴＧＴＧＴＴ－３ ２５ｂｐ。
【技术特征摘要】
1.一种儿童药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及与儿童药物性耳聋相关的线粒体DNA Mito基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下上游引物FA5-ACCCCTACGCATTTATATAGAGGTGA-3 26bp，上游引物FG5-CCCCTACGCATTTATATAGAGGTGG-325bp，下游引物R 5-AAGTGTAAGTTGGGTGCTTTGTGTT-325bp。2.如权利要求l所述的儿童药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有2个，分别包含如下的序列 SEQ1:AACTAAAACC AGTGTACTGG GCACCCAACT TAAACCTAGC SEQ2:AACTAAAACC AGTGTACTGG GCACCCAACT TAAACCTAGCCCTACGCATT AAAGTGCACT TACACTTAGG CCCAAACCCACCTACGCATT AAAGTGCACTTACACTTAGG CCCAAACC...
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，黎飒，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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