一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的ＤＮＡ的方法技术

一种基于不同修饰的胶体金聚集和银染信号扩增的ＤＮＡ测定方法，属于分析生物化学技术领域。该发明专利技术主要内容是使两种修饰不同生物分子的胶体金发生结合，将ＤＮＡ信号放大。首先将生物素标记的单链ＤＮＡ通过共价交联固定到基片表面上，再加入链霉亲和素修饰的胶体金，使之结合到生物素标记的单链ＤＮＡ上，然后加入生物素修饰的胶体金，使两种修饰不同生物分子的胶体金发生结合，重复这一过程，将ＤＮＡ信号放大，最后，利用银染方法进一步放大信号。通过使用该方法，发现在一定的物质的量范围内，点样处生成的灰度值与物质的量的对数值具有较好的线性关系。该方法是一种灵敏度高，特异性好的可视化检测ＤＮＡ的方法，在诸多领域有应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

—种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集检测生物素标记的DNA的方法，属 于分析生物化学

技术介绍
纳米材料在生物分析中的应用成为一个快速发展的领域，胶体金以其独特的光 学、电学性质以及生物亲和效应，在催化、传感器和DNA分析检测等方面表现出很多潜在的 应用价值，受到了化学、物理及生命科学等相关领域的广泛关注。1996年，Mirkin等首次 报道了胶体金在DNA的交联作用下的聚集现象，用来对生物大分子进行检测分析，之后，相 关方面的研究逐渐增多。但大多数利用胶体金检测DNA的方法是利用生物分子修饰的胶体 金与固定在固相表面的生物分子相互作用的单层结合，或是不同DNA修饰的胶体金在液相 发生空间上聚集。本方法先将biotin修饰的ssDNA固定到醛基基片上，然后，将链霉亲和 素修饰的胶体金以及连接上5' biotin修饰的DNA的胶体金依次加入到反应体系中，并重 复这一过程，利用biotin与链霉亲和素的相互作用，使两种修饰不同生物分子的胶体金发 生结合，发生聚集，将DNA信号放大，实现在基片表面的空间上对DNA信号进行放大，最后， 利用银染方法进一步放大信号。实验结果表明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集的检测生物素标记的ＤＮＡ的方法，其特征是步骤为：（１）胶体金的制备；（２）ＤＮＡ修饰的胶体金的制备；（３）链霉亲和素修饰的胶体金的制备；（４）不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验；（５）扫描及数据分析。　　（１）胶体金的制备：利用Ｆｒｅｎｓ法制备１３ｎｍ的胶体金；　　所用的玻璃仪器使用铬酸洗液浸泡后，双蒸水清洗，烘干备用；制备时向５００ｍＬ烧杯中加入一定量的氯化金溶液，再加入超纯水至２５０ｍＬ，加热。将溶液加热至沸腾后，立即加入一定量的柠檬酸三钠溶液，继续加热，搅拌，沸腾１５分钟后，停止加热。这一过程中可观察到溶液的颜色由黄色变为深紫色，进而变为透...

【技术特征摘要】
一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集的检测生物素标记的DNA的方法，其特征是步骤为(1)胶体金的制备；(2)DNA修饰的胶体金的制备；(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备；(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验；(5)扫描及数据分析。(1)胶体金的制备利用Frens法制备13nm的胶体金；所用的玻璃仪器使用铬酸洗液浸泡后，双蒸水清洗，烘干备用；制备时向500mL烧杯中加入一定量的氯化金溶液，再加入超纯水至250mL，加热。将溶液加热至沸腾后，立即加入一定量的柠檬酸三钠溶液，继续加热，搅拌，沸腾15分钟后，停止加热。这一过程中可观察到溶液的颜色由黄色变为深紫色，进而变为透明的深红色。冷却至室温后，将胶体金用微孔滤膜进行过滤，4℃保存。(2)biotin标记的DNA修饰的胶体金的制备利用巯基与胶体金的相互作用，将biotin标记的DNA修饰到胶体金表面；向1mL的AuNP中加入一定量的5’巯基修饰的ssDNA，避光摇一段时间，然后向溶液中加入微量的磷酸缓冲液和一定量的NaCl溶液使其Na+浓度递增，当Na+浓度升至0.1M，停止反应，再加入小牛血清白蛋白封闭，1h后离心。离心结束后，弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBST中。然后向溶液中加入一定量的5’biotin修饰的ssDNA，长时间避光摇后离心，弃上清，沉淀溶解于PBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉祥，沈海滢，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]