作为生物标记物的miRNA-124制造技术

至少一种miRNA作为特别是病毒感染或所述病毒感染的治疗性处理功效的生物标记物的用途，所述至少一种miRNA是miR-124。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及特别是与病毒感染结合的生物标记物领域。更具体而言，本专利技术涉及用作病毒感染的诊断标记物的新型生物标记物。更具体而言考虑的病毒感染是需要RNA剪接的病毒感染，且特别是逆转录病毒感染例如HIV和AID相关状况。本专利技术还涉及关于所述感染且特别是HIV和AIDS相关状况的治疗的随访标记物。在高等真核生物中，信使RNA不以其功能形式直接转录，而是作为前信使RNA转录，所述前信使RNA必须经历许多加工事件，以便可由细胞翻译机制阅读。剪接是允许消除不需要的序列(内含子)，并连接有意义的序列(外显子)的过程。高度协调的剪接事件在称为剪接体的大复合物中发生。该功能大复合物(megacomplex)是蛋白质和RNA的精心装配，其需要鉴定外显子-内含子边界。外显子规律地可变剪接，意指它们或包括在最终成熟mRNA转录物中或从最终成熟mRNA转录物中排除。近期的广泛测序研究观察到：超过90％的基因经历可变剪接。可变剪接的mRNA的产生被反式作用蛋白质系统调节，所述反式作用蛋白质与前mRNA自身上的顺式作用位点结合。此类蛋白质包括促进特定剪接位点的使用的剪接激活物，和降低特定位点的使用的剪接阻遏物，分别结合在剪接增强子位点上(内含子剪接增强子，ISE和外显子剪接增强子，ESE)和剪接沉默子位点上(内含子剪接沉默子，ISS和外显子剪接沉默子，ISS)。特别是来自逆转录病毒科的病毒是全世界疾病的主因之一。可以在逆转录病毒科中区分出三个亚科：肿瘤病毒、慢病毒和泡沫病毒。因为肿瘤病毒可以与癌症和恶性感染相关，所以它们被这样命名。可以提及例如致白血病病毒(例如禽白血病病毒(ALV)、鼠白血病病毒(MULV)也称为莫洛尼病毒、猫白血病病毒(FELV)、人白血病病毒例如HTLV1和HTLV2、猿猴白血病病毒或STLV、牛白血病病毒或BLV、灵长类动物D型肿瘤病毒、其为乳腺肿瘤的诱导剂的B型肿瘤病毒、或引起快速癌症的肿瘤病毒(例如劳斯肉瘤病毒或RSV)。泡沫病毒对于给定细胞类型或给定物种表现相当低的特异性，并且它们有时与免疫抑制现象相关；这是例如对于猿猴泡沫病毒(或SFV)的情况。因为慢病毒例如HIV负责缓慢进展的病理状况，所以它们被这样命名，所述病理状况非常频繁地涉及免疫抑制现象，包括AIDS。已知病毒且特别是逆转录病毒例如HIV依赖RNA剪接和剪接调节，以便在受感染个体的细胞和组织内传播和散布。近来，已利用HIV是需要RNA剪接以表达关键病毒蛋白质的逆转录病毒的这一事实来开发基于剪接抑制的新型策略，以对抗病毒感染且特别是AIDS(WO2010/143169)。事实上，HIV-1基因组表达9kb的初级转录物，其不仅充当子代病毒的基因组RNA，还生成40种不同的mRNA。HIV-1使用四个多重可变5’剪接位点和八个多重可变3’剪接位点，以生成剪接的mRNA种类。这些剪接的mRNA可以分成两类：多重剪接的(2kb)和单一剪接的(4kb)RNA。HIV-1可变剪接的调节主要由于亚最佳剪接位点的存在而发生，所述亚最佳剪接位点减少通过剪接信号的细胞剪接机制的识别。在病毒剪接位点处的剪接进一步通过ESE、ESS和ISS的存在得到调节。在这个背景下，已开发了喹啉衍生物，特别是8-氯-N-[4-(三氟甲氧基)苯基]喹啉-2-胺，其已显示在nM浓度范围下抑制HIV-1和HIV-2T细胞向性实验室株的外周血单核细胞(PBMC)以及不同亚型的临床分离物中的复制(WO2010/143169)。微小RNA(miRNA)，最广泛的非编码组，是一类约22nt非编码RNA，其通过与靶mRNA转录物的非编码区(UTR)结合来抑制基因表达(Lai等人，NatureGenetics，第30卷，no.4，第363–364页，2002；Bartel等人，Cell，第136卷，no.2，第215–233页，2009)。miRNA基因代表约1-2％的已知真核生物基因组。预测提出每种miRNA可以靶向超过200种转录物，并且单一mRNA可以通过多重miRNA得到调节(LINDOW，DNACellBiol.，第26卷(5)，第339-351页，2007)。miRNA由内源发夹形转录物生成且通过与靶mRNA的碱基配对而起作用，这导致mRNA切割或翻译阻遏，取决于碱基配对的程度。两个加工事件导致成熟的miRNA形成：首先，将初生miRNA转录物(pri-miRNA)加工成70个核苷酸的前体(pre-miRNA)，其从核中输出且在细胞质中被切割，以生成短的(长约22个核苷酸)成熟miRNA(LEE，EMBOJ.，第21卷，第4663-4670页，2002)。miRNA可以位于基因间或基因内。当基因间时，它们的表达与其他miRNA作为簇进行协调(Altuvia等人，NucleicAcidsResearch，第33卷，no.8，第2697–2706页，2005，Ozsolak等人，GenesandDevelopment，第22卷，no.22，第3172–3183页，2008)。当基因内时，即置于蛋白质编码基因内(几乎唯一地在内含子内)，它们通常从与它们的宿主基因相同的链(Liu等人，CellResearch，第18卷，no.10，第985–996页，2008，Kim等人，EMBOJournal，第26卷，no.3，第775–783页，2007)且以相关联水平(Baskerville等人，RNA，第11卷，no.3，第241–247页，2005)表达。miRNA近期已涉及病毒感染中的宿主和病原体的复杂串扰，并且被认为在病毒发病机理中起主要作用(NAIR，TrendsinMicrobiol.，第14卷，第169-175页，2006)。事实上，病毒是使用细胞机制用于其存活和复制的专性细胞内寄生物，因此这种依赖性使得它们对宿主基因调节机制敏感。细胞miRNA可以参与抗病毒防御机制，但在一些情况下，还可以是病毒正调节物。另一方面，病毒自身也可以产生miRNA以调节细胞过程或病毒基因。涉及HIV-1感染的miRNA可以根据其生物发生起源定义为HIV-1编码的或宿主编码的；它们还可以根据其功能定义为感染的阻遏物或激活物。它们可以进一步根据它们是直接靶向HIV-1转录物还是间接影响HIV-1进行分类，通过靶向涉及病毒生命周期的宿主因子，或靶向HIV-1RNA基因组和HIV-1感染必需的宿主因子两者。几个数据证明HIV-1感染由于miRNA生物发生干扰而总体影响miRNA途径，以及通过miRNA表达概况修饰而个别影响miRNA途径(Houzet等人，BiochimBiophysActa.2011Nov-Dec；1809(11-12):686–693))。此外，宿主miRNA已描述为调节HIV-1。给定药物或疫苗成功开发的一个关键因素是有效和快速评价其功效的可能性。事实上，给定药物或疫苗在其治疗窗内进行施用是重要的，以便避免不需要的来自太高剂量的效应，或避免由于太低剂量的功效缺乏。另外，必须确保将适当药物或疫苗施用于适当患者，并且该患者事实上响应药物或疫苗。因此，仅仅将给定患者和给定药物或疫苗联系在本文档来自技高网...

【技术保护点】
至少一种miRNA作为病毒感染或所述病毒感染的治疗性处理功效的生物标记物的体外或离体用途，所述至少一种miRNA是miR‑124。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.01.17 EP 13305053.41.至少一种miRNA作为病毒感染或所述病毒感染的治疗性处理功
效的生物标记物的体外或离体用途，所述至少一种miRNA是miR-124。
2.根据权利要求1的用途，其中在经分离的生物样品中测量的所
述miR-124的表达水平与对照参考值相比较，并且其中相对于所述对照
参考值，所述测量水平的调节指示病毒感染或所述病毒感染的治疗性处
理功效。
3.至少一种miRNA作为用于评价候选化合物改变蛋白质或细胞的
生理活性的生物效应，特别是药理学潜力的生物标记物的体外或离体用
途，所述至少一种miRNA是miR-124。
4.至少一种miRNA作为用于筛选药物候选物或疫苗候选物的生物
标记物的体外或离体用途，所述至少一种miRNA是miR-124，所述药物
候选物或疫苗候选物特别是喹啉衍生物，推测有效预防和/或治疗病毒感
染。
5.根据前述权利要求3或4的用途，其中在所述候选物的存在下，
在经分离的生物样品中测量的所述miR-124的表达水平与对照参考值相
比较，并且其中相对于所述对照参考值，所述测量水平的调节指示所述
候选物的生物效应，并且特别是所述药物候选物或疫苗候选物在预防和/
或治疗病毒感染中的功效。
6.根据权利要求2或5的用途，其中所述生物样品选自生物组织样
品、全血样品、拭子样品、血浆样品、血清样品、唾液样品、阴道流体
样品、精液样品、咽流体样品、支气管流体样品、粪便流体样品、脑脊
髓流体样品、泪腺流体样品和组织培养物上清液样品。
7.根据权利要求3-6的用途，其中所述药物候选物或疫苗候选物是
式(I)的喹啉衍生物或其药学可接受的盐之一：
其中
-n是1或2并且R独立地代表氢原子、卤素原子或选自下述的基
团：(C1-C3)烷基；-NR1R2基团，其中R1和R2独立地是氢原子或(C1-C3)
烷基；(C1-C3)氟烷氧基；-NO2基团；苯氧基；和(C1-C4)烷氧基，
-R’是氢原子、卤素原子或选自(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基
的基团，
-R\是氢原子或(C1-C4)烷基。
8.根据权利要求3-6的用途，其中所述药物候选物或疫苗候选物是
式(II)的喹啉衍生物或其药学可接受的盐之一：
其中：
-n是1或2并且R独立地代表氢原子、卤素原子或选自下述的基
团：(C1-C3)烷基；–CN基团；羟基；–COOR1基团；(C1-C3)氟烷基；
–NO2基团；–NR1R2基团，其中R1和R2是氢原子或(C1-C3)烷基；和(C1-C4)
烷氧基，
-R’是氢原子、卤素原子或选自(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基
的基团，
-R\是氢原子或(C1-C4)烷基。
9.至少一种miRNA作为喹啉衍生物或其药学可接受的盐之一对病
毒感染的活性的生物标记物的体外或离体用途，所述至少一种miRNA是
miR-124。
10.根据权利要求9的用途，其中所述喹啉衍生物具有如权利要求
7中限定的式(I)或其药学可接受的盐之一，并且特别地其中n是1，R

\t是(C1-C3)氟烷氧基，并且R'和R\各自是氢原子，例如8-氯-N-[4-(三
氟甲氧基)苯基]喹啉-2-胺。
11.根据权利要求9的用途，其中所述喹啉衍生物具有如权利要求
8中限定的式(II)或其药学可接受的盐之一，并且特别地其中n是1，
R是(C1-C3)氟烷氧基，并且R’和R”各自是氢原子，例如8-...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·塔泽，D·谢雷，A·加塞尔，N·卡姆普斯，R·纳日曼，F·马于托贝茨尔，
申请(专利权)人：ABIVAX公司，国家科研中心，蒙彼利埃大学，居里研究所，
类型：发明
国别省市：法国;FR