用于检测卵巢癌的方法技术

本说明书涉及卵巢癌诊断领域。本说明书引入了可以用于检测卵巢癌存在并且提供疾病的预后的新型生物标记物。

Method for detecting ovarian cancer

This manual covers the field of ovarian cancer diagnosis. This booklet introduces novel biomarkers that can be used to detect the presence of ovarian cancer and provide prognostic information for the disease.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测卵巢癌的方法
本说明书涉及卵巢癌的诊断和预后生物标记物(diagnosticandprognosticbiomarker)的领域。特别地，其提供了用于评估受试者是否处于发展卵巢癌的风险或正在遭受卵巢癌的新型体外筛查方法。另外，可以将本生物标记物用于评价存活预后(survivalprognosis)、治疗效力和卵巢癌的肿瘤切除的成功率的方法。通过测量生物标记物在血清或血浆中的浓度可以将本专利技术的生物标记物用于确定所述生物标记物在肿瘤中的浓度。
技术介绍
卵巢癌是低发病率但是存活率不良的异质性疾病(heterogeneousdisease)。根据2012年世界卫生组织(WHO)的统计数值，评估世界范围内存在239000个新的卵巢癌病例，代表女性所有癌症的4％。根据该统计数值，在2012年，152000例死亡是由卵巢癌引起的。卵巢癌是女性癌症死亡中第八大常见的原因，以及较大比例的新的卵巢癌发生在人口发展水平高或非常高的国家。发病率在北欧和东欧、北美洲和大洋洲最高，而在非洲和亚洲大部分趋向于相对低。然而，在20世纪90年代和21世纪，例如中国的发病率急剧升高。(世界卫生组织世界癌症报告2014)。最常见的卵巢癌是卵巢恶性肿瘤，其包括五种主要亚型，并且其中高级浆液性恶性肿瘤(serouscarcinoma)是最常见的一种(占病例的约70％)。早期诊断对于患者的存活率是关键性的，因为，例如I期患者的5年存活率是约90％，而对于IV期患者，其仅是约20％。然而，卵巢癌的诊断是困难的，以及仅当进行到最后阶段时该疾病趋向于引起患者的症状，并且另外，症状经常与其他疾病的那些类似。因此，新的诊断工具(其可以在早期检测卵巢癌)对于成功治疗卵巢癌患者是重要的。之前检测卵巢癌的方法依赖于蛋白质生物标记物分析和成像方法。目前用于卵巢癌的主要诊断方法包括骨盆检查、CA-125血液测试和经阴道超声。CA-125和HE4是USFDA批准的用于监测疾病复发或进展，而非筛查的唯一两种生物标记物。由若干蛋白质生物标记物组成的多变量指数测定(multivariateindexassay)OVA1自2009年被FDA批准用于骨盆腔肿块的分类(Nguyenetal.,Women'sHealth,2013,9(2),171-187)。已经报告了CA-125是用于卵巢癌的总存活率的和无进展存活率(progressionfreesurvival)的预后因素，而且研究表明存在矛盾的结果。CA-125水平在患有晚期上皮卵巢癌的约90％患者中升高，但是仅在患有I期疾病的50％患者中升高(Gupta&Lis,JournalofOvarianCancer,2009,2:13)。因此，黄金标准CA-125对于检测晚期疾病的患者是相对良好的，但是CA-125在其他患者中缺乏灵敏度并且其在存活率预测中的作用存在一定的争议。与蛋白质相比，尝试将包括代谢物和脂质的小分子用作诊断工具，因为它们直接反映新陈代谢的变化，已知该变化早在肿瘤开始和进展的早期就已经出现。特定路径的基因表达或蛋白水平的小的变化可以导致小分子代谢物和脂质浓度的大的改变，因为可以将它们的水平视为是生物路径的活性的放大输出。尽管有一些尝试寻找用于卵巢癌的小分子生物标记物，但是之前的公开没有提供已经进入临床实践的来自血清的简单的和可靠的小分子卵巢癌生物标记物。WO2009151967描述了多种用于卵巢癌诊断的新陈代谢生物标记物候选和机器学习分类运算法则。WO2012038525A1描述了多种作为各种卵巢癌的生物标记物的磷脂。WO2013016700描述了使用质谱分析(MS)或核磁共振(NMR)的数据来产生用于上皮卵巢癌的预测模型的分类运算法则的用途。在描述卵巢癌的潜在的生物标记物候选物的其他公开中也应用了NMR技术，如WO2011041892和US2005170441。然而，之前的研究中的限制通常是大量生物标记物的描述，不能使用来自癌症患者的其他信息将其缩小，如血清和肿瘤组织之间的生物标记物水平的相互关系的预知或探究。此外，没有公开的文献表明可以怎样组合单种代谢物或代谢物连同蛋白质标记物的组合的信息来给出卵巢癌患者的更精确的诊断和预后方法。因此，关注的一系列小分子对于更好的卵巢癌诊断将是极度有用的。定义3,4-DHBA-3,4-二羟基丁酸3-HBA-3-羟基丁酸AUC-曲线下的面积CA-125-癌症抗原125，恶性肿瘤抗原125，糖抗原125GC-气相色谱法GCxGC-二维气相色谱法HE4-人附睾蛋白质4LC-液相色谱法lysoPC-溶血卵磷脂MS-质谱分析NMR-核磁共振PC-卵磷脂PE-磷脂酰乙醇胺ROC-接受者操作特征(receiveroperatingcharacteristic)SM-鞘磷脂(sphingomyelin)TAG-三酰甘油酯TOF-飞行时间(time-of-flight)WHO-世界卫生组织附图说明图1公开了对照组(没有恶性肿瘤)以及在手术期间具有或不具有完全的肿瘤减少的卵巢癌患者的血清中，目前识别的小分子生物标记物的浓度。总体上，小分子生物标记物示出了渐进的趋势，因为浓度在对照组中最低以及在手术期间的肿瘤切除不完全的患者中最高。该趋势尤其适用于二羟基丁酸和三羟基丁酸。鞘磷脂(SM)则表现出相反的趋势，其中浓度在没有恶性肿瘤的受试者中最高以及在没有完全的肿瘤减少的卵巢癌患者中最低。CA-125和3-羟基丁酸在对照和恶性肿瘤患者之间示出了明显的差异，但是在两种情况下(在具有或不具有肿瘤减少的患者中)没有显著的差异，这间接地暗示这些分子没有表现出与存在于患者中的肿瘤块的量的明显的关联。在表2示中出了，在恶性肿瘤(相对于对照)中以及，在完全的肿瘤减少(相对于不完全的肿瘤减少比较)中的这些分子的每种的t测试值和log2倍数变化。图2公开了当与对照组相比时卵巢癌患者的血清中的三酰甘油酯(TAG)的变化。在图中，每个圆点代表一种TAG分子，其示出了t测试中组之间的统计上显著的结果，以及x轴表示每种TAG的脂肪酰基侧链中的碳的总数。在卵巢癌患者的血清中，TAG的分布存在明显的变化。除一种脂质之外，与不具有恶性肿瘤的受试者相比，在脂肪酰基侧链中具有53个或更少碳的所有TAG在卵巢癌患者中降低。相反，除两种脂质之外，当与对照组相比时，在脂肪酰基侧链中具有54个或更多碳的所有TAG在卵巢癌患者中升高。图3公开了当预测具有恶性的卵巢肿瘤的患者时的接受者操作特征(ROC)曲线。交叉验证模型使得将数据组随机分到训练(2/3样品)和验证(1/3样品)组1000次，并在验证组(validation)中测试训练组(trainingset)中的构造模型。线代表平均值，以及箱图代表所有运行的可变性。表3呈现了曲线(AUC)下的平均面积值和它们的95％置信区间。图和AUC值表明当模型包含CA-125连同3-羟基丁酸和3,4-二羟基丁酸(其中具有或或不具有合并至模型的SM(d18:1/24:0))时，实现了最大的值和最精确的预测。CA-125连同图中所示的三种SM产生的模型稍好于仅合并CA-125的模型。结论是当与仅来自CA-125的信息相比时，将来自小分子生物标记物的信息合并至CA-125浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于评估受试者是否处于发展卵巢癌的风险、或者正在遭受卵巢癌的体外筛查的方法，包括：由来自所述受试者的样品确定至少一种小分子生物标记物的浓度，其中，当与对照样品比较时，所述样品的浓度的升高或降低表示所述受试者遭受卵巢癌，或者具有发展卵巢癌的增加的风险；(1)其中，与所述对照比较，浓度升高的所述至少一种小分子生物标记物选自由二羟基丁酸和三羟基丁酸组成的组；和/或(2)其中，与所述对照比较，浓度降低的所述至少一种小分子生物标记物选自由鞘磷脂组成的组。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.02 FI 201458551.一种用于评估受试者是否处于发展卵巢癌的风险、或者正在遭受卵巢癌的体外筛查的方法，包括：由来自所述受试者的样品确定至少一种小分子生物标记物的浓度，其中，当与对照样品比较时，所述样品的浓度的升高或降低表示所述受试者遭受卵巢癌，或者具有发展卵巢癌的增加的风险；(1)其中，与所述对照比较，浓度升高的所述至少一种小分子生物标记物选自由二羟基丁酸和三羟基丁酸组成的组；和/或(2)其中，与所述对照比较，浓度降低的所述至少一种小分子生物标记物选自由鞘磷脂组成的组。2.根据权利要求1所述的方法，包括由所述样品确定至少一种另外的小分子生物标记物，其中，当与对照样品比较时，所述生物标记物的浓度的升高或降低表示所述受试者遭受卵巢癌，或者具有发展卵巢癌的增加的风险；(a)其中，与所述对照比较，浓度升高的所述至少一种另外的小分子生物标记物选自由羟基酸和己二酸组成的组；和/或(b)其中，与所述对照比较，浓度升高的所述至少一种另外的小分子生物标记物选自由羟基丁酸和酮体组成的组。3.根据权利要求2所述的方法，其中，确定(1)、(2)、(a)和(b)项。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，包括确定血液中的CA-125的水平，其中，当权利要求1-3中任一项所述的筛查的方法表明发展或遭受卵巢癌的风险增加时，升高的CA-125水平表示所述受试者具有发展或遭受卵巢癌的增加的风险。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述小分子生物标记物是3-羟基丁酸，以及所述方法用于评估早期或晚期卵巢癌。6.一种评估受试者对于卵巢癌是否具有降低的存活预后的方法，包括测量来自所述受试者的样品中的至少一种小分子生物标记物的水平，其中，相对于对照样品中的对应的小分子生物标记物的水平，所述至少一种小分子生物标记物的水平的升高表示所述受试者对于卵巢癌具有不良的存活预后，并且其中，所述至少一种小分子生物标记物选自由以下各项组成的组：二羟基丁酸、三羟基丁酸、羟基酸、己二酸、羟基丁酸和酮体；和/或相对于对照样品中的所述对应的小分子生物标记物的水平，所述至少一种小分子生物标记物的水平的降低表示所述受试者具有针对卵巢癌的不良的存活预后，并且其中，所述至少一种小分子生物标记物选自由鞘磷脂组成的组。7.一种用于评估受试者中的卵巢癌肿瘤切除的成功率的体外方法，包括测量来自所述受试者的血液样品中的至少一种小分子生物标记物的水平，其中，相对于对照样品中的对应的小分子生物标记物的水平，所述至少一种小分子生物标记物的水平的升高表示肿瘤切除是成功的，以及(1)其中，与所述对照比较，浓度降低的所述至少一种小分子生物标记物选自由二羟基丁酸和三羟基丁酸组成的组；和/或(2)其中，与所述对照比较，浓度升高的所述至少一种小分子生物标记物选自由鞘磷脂组成的组。8.根据权利要求7所述的方法，包括由所述样品确定至少一种另外的小分子生物标记物，其中，当与对照样品比较时，所述生物标记物的浓度的升高或降低表示所述肿瘤切除是成功的；(a)其中，与所述对照比较，浓度降低的所述至少一种另外的小分子生物标记物选自由羟基酸和己二酸组成的组；和/或(b)其中，与所述对照比较，浓度降低的所述至少一种另外的小分子生物标记物选自由羟基丁酸和酮体组成的组。9.根据权利要求8所述的方法，包括进行所有步骤(1)、(2)、(a)和(b)的确定。10.一种评估受试者中的卵巢癌疗法的效力的体外方法，包括由来自所述受试者的样品确定至少一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：米卡·希尔沃，
申请(专利权)人：佐拉生物科学公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI