神经酰胺及其在诊断CVD中的应用制造技术

本发明专利技术具体地提供了通过确定生物样品中至少一种A组神经酰胺和至少一种B组神经酰胺的浓度并将那些浓度与对照相比较来预测CV并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡的方法及其应用。发现至少一种A组神经酰胺浓度降低和至少一种B组神经酰胺浓度升高表明受试者发展一种或多种CV并发症的风险升高。还提供了以下领域：新鉴别的神经酰胺分子亚类、其标记形式以及包含它们的试剂盒和组合物，用于在预测和/或诊断CV并发症中使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的引证本申请主张2014年6月16日提交的美国临时专利申请No.62/012,543和2015年4月2日提交的美国专利申请No.14/677,595的优先权和权益，以上申请的全部内容作为参考并入本文。
本申请一般地涉及神经酰胺生物标志物及其在鉴别发展心血管(CV)并发症，如AMI(急性心肌梗塞)、ACS(急性冠状动脉综合征)、中风或CV死亡的风险提高的受试者中的应用。
技术介绍
目前的CV标志物，LDL-C、HDL-C和总胆固醇不能从具有更稳定疾病的患者中鉴别出具有高CV并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡风险的冠状动脉病(CAD)患者或受试者。术语心肌梗塞在病理上表示由于长时间缺血所造成的心肌细胞死亡，这可以是由灌注需求增加或血流减少所引起的。如果它是突然且严重的，则该事件被称为“急性的”。除心脏生物标志物(肌酐激酶MB[CK-MB]、肌钙蛋白和肌红蛋白)的变化以及心电图(ECG)发现之外，通过对病史和体检的高度临床怀疑确定AMI的诊断。成像技术，如二维超声波心动描记法也用于证实心肌功能障碍。然而，目前的CV标志物、LDL-C、HDL-C和总胆固醇仅当心脏组织损害已发生时才能识别。它们不能预测CVD并发症发生的可能性。急性冠状动脉综合征(ACS)是用于通过流向心脏的血液突然减少所导致的任何病况的术语。急性冠状动脉综合征的第一病征可以是被称为心动停止的心脏突然停止。通常在急诊室或医院中，通过提供受损心脏组织迹象或心脏电学活动问题的相同心脏生物标志物或心电图(ECG)将急性冠状动脉综合征诊断为AMI。中风是由于血液对脑供给障碍，从而从脑组织夺取氧气和营养所造成的脑功能丧失。在几分钟内，脑细胞开始死亡。中风可以由动脉阻塞(缺血性中风)或者血管渗漏或破裂(出血性中风)造成。一些人可能经受通过他们脑部的暂时血流破坏(短暂性缺血性发作或TIA)。通常通过脑成像和实施身体测试来诊断中风。心源性猝死(SCD)是由心脏功能丧失所导致的突然、意外死亡，它还被称为心脏骤停(SCA)。心脏骤停不是心脏病发作(心肌梗塞)。当一条或多条冠状动脉存在阻塞，从而妨碍心脏接受足够的富氧血液时，发生心脏病发作。相反，当心脏电学系统机能失调并突然变得非常不规律时，发生心脏骤停。心跳快速至危险程度。可能发生心室纤维性颤动，并且血液不会输送至身体。在前几分钟内，最大的顾虑是流至脑部的血流将显著降低，从而人将失去意识。除非立即开始急救措施，否则将发生死亡。心脏骤停在没有警示的情况下发生，并且医学测试很少诊断出它将发生。相反，通常通过排除导致人突然病倒的其它原因，在SCA发生之后诊断出SCA。在急性期诊断出AMI、ACS、中风和心源性猝死，但是预测标志物不可用。这些事件背后的风险因素为(例如)年龄、低脂血症、高血压、抽烟、糖尿病、CAD或上述心脏病发作。然而，没有可以预测事件存在的诊断测试，并且心血管疾病是全世界导致死亡的主要原因。此外，CVD比任何其它疾病类型对社会的花费更大。使用用于诊断CVD的相同试验来预测事件。目前，最创新的方法是使用LDL-C、HDL-C、Lp(a)、Lp-PLA2(PLAC试验)或者CRP。然而，所列的基于脂质的标志物(LDL-C、HDL-C、Lp(a)、Lp-PLA2(PLAC试验))无一提供有助于医师分类的临床有用的预测信息。在研究背景中，CRP是有希望的，然而已证明它是非特异性的(CRP是可以对多种不同刺激起反应的急性期反应物，从而导致高度可变的测试结果)并因此难以在临床使用中解释CRP值。对于可以预测CV并发症，如AMI(急性心肌梗塞)、ACS(急性冠状动脉综合征)、中风和CV死亡的诊断测试的需要仍未满足。与目前任何其它基于脂质的生物标志物相比，基于神经酰胺的风险分组(分级，stratification)提供了优良的p-值。此外，通过特异性脂质降低治疗(如他汀类)可以影响血浆神经酰胺水平，并因此神经酰胺标志物提供了精确且可起作用的风险分组。已鉴别了包括某些神经酰胺在内的一大组脂质分子以及由两个脂质分子计算获得的比值用于预测经历他汀类治疗或未经历他汀类治疗的CAD患者中的CV结局(ZoraBiosciences专利申请WO2013068373和WO2013068374)或者用于鉴别高风险CAD患者或者预测受试者是否具有发展CV并发症的风险(ZoraBiosciences专利申请US13/695,766和US13/805,319)。然而，仍需要预测患者发展CV并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡的风险的改进方法。
技术实现思路
本专利技术申请公开了基于它们的结构选择神经酰胺组合以及使用它们预测CVD/CAD-相关并发症，包括AMI、ACS、中风和CV死亡的独特规则。因此，这些神经酰胺标志物提供了鉴别和治疗高风险冠状动脉病患者的方式。具体地，测试了这些灵敏且特异性的神经酰胺标志物以显示与目前临床所使用的预测CVD/CAD结局的标志物相比优良的诊断和预测价值。根据最近建立的规则，使用神经酰胺生物标志物的组合将有利于早期干预、发展和遭受较少症状以及降低与CVD有关的发病率/死亡率。因此，本文所述和所主张的神经酰胺标志物的组合允许对具有发展主要CV并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡的风险的患者单独调整治疗、药物干预和随访。根据该新近鉴别的规则，基于它们的结构以及当组合时，它们与发展CV并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡的风险提高的关系(基于浓度的升高或降低)，已将某些神经酰胺分为不同的组。因此，在某些实施方式中，所述方法涉及确定获自受试者的生物样品中至少一种式(I)所示的神经酰胺(A组神经酰胺)和至少一种式(II)所示的神经酰胺(B组神经酰胺)的浓度。当与至少一种式(II)所示的神经酰胺的浓度升高组合时，至少一种式(I)所示的神经酰胺的浓度降低与受试者发展CVD并发症，如AMI、ACS、中风和CV死亡的风险升高有关。式(I)所示的神经酰胺具有以下结构：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-25个碳原子的饱和烷基链。式(II)所示的神经酰胺具有以下结构：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23或25个碳原子的双不饱和烷基链。在一个实施方式中，确定受试者是否具有发展一种或多种CV并发症的风险的方法包括以下步骤：a)确定获自所述受试者的生物样品中至少一种A组神经酰胺的浓度，b)确定获自所述受试者的生物样品中至少一种B组神经酰胺的浓度，c)将所述至少一种A组神经酰胺的浓度和所述至少一种B组神经酰胺的浓度与对照样品相比较；和d)与对照样品相比，如果所述样品含有降低浓度的至少一种A组神经酰胺和升高浓度的至少一种B组神经酰胺，则确定所述受试者发展一种或多种CV并发症的风险升高。在某些实施方式中，所述方法还包括在确定至少一种式I和II所示的神经酰胺的浓度之前，用至少一种氘标记的式I所示的神经酰胺和至少一种氘标记的式II所示的神经酰胺对所述生物样品加标(spi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于确定人受试者是否具有发展一种或多种心血管(CV)并发症的风险的方法，其中所述方法包括(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式I所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21‑25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式(II)所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的直链单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21‑23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23或25个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式I所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式II所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述生物样品含有降低浓度的所述至少一种式I所示的神经酰胺和提高浓度的所述至少一种式II所示的神经酰胺，则确定所述受试者具有发展一种或多种CV并发症的升高风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.16 US 62/012,543;2015.04.02 US 14/677,5951.一种用于确定人受试者是否具有发展一种或多种心血管(CV)并发症的风险的方法，其中所述方法包括(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式I所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式(II)所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的直链单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23或25个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式I所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式II所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述生物样品含有降低浓度的所述至少一种式I所示的神经酰胺和提高浓度的所述至少一种式II所示的神经酰胺，则确定所述受试者具有发展一种或多种CV并发症的升高风险。2.一种用于确定人受试者是否具有发展一种或多种CV并发症的风险的方法，其中所述方法包括(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式III所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-23或25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定来自所述人受试者的生物样品中至少一种式IV所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链而R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23个碳原子的双不饱和烷基链；或者其中R1为具有15个碳原子的双不饱和烷基链而R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式III所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式IV所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述生物样品含有降低浓度的所述至少一种式III所示的神经酰胺和提高浓度的所述至少一种式IV所示的神经酰胺，则确定所述人受试者具有发展一种或多种CV并发症的升高风险。3.一种用于评价人受试者中CVD和/或一种或多种其并发症的治疗有效性的方法，其中所述方法包括：(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式I所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定来自所述人受试者的生物样品中至少一种式II所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23或25个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式I所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式II所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述样品含有升高浓度的所述至少一种式I所示的神经酰胺和降低浓度的所述至少一种式II所示的神经酰胺，则确定所述治疗是有效的。4.一种用于评价人受试者中CVD和/或一种或多种其并发症的治疗有效性的方法，其中所述方法包括：(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式III所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-23或25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定来自所述人受试者的生物样品中至少一种式IV所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链而R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23个碳原子的双不饱和烷基链；或者其中R1为具有15个碳原子的双不饱和烷基链而R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式III所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式IV所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述样品含有升高浓度的所述至少一种式III所示的神经酰胺和降低浓度的所述至少一种式IV所示的神经酰胺，则确定所述治疗是有效的。5.一种在人受试者中选择CVD和/或一种或多种其并发症的适合治疗的方法，其中所述方法包括：(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式I所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有21-25个碳原子的饱和烷基链，并且其中所述生物样品为血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的脂蛋白部分；(b)确定来自所述人受试者的生物样品中至少一种式II所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有13个碳原子的单不饱和烷基链或者具有15个碳原子的饱和、单不饱和或双不饱和烷基链，并且其中R2为具有15或17个碳原子的饱和烷基链、具有21-23个碳原子的单不饱和烷基链或具有23或25个碳原子的双不饱和烷基链；(c)将所述至少一种式I所示的神经酰胺的浓度和所述至少一种式II所示的神经酰胺的浓度与对照样品相比；和(d)与所述对照样品相比，如果所述样品含有降低浓度的所述至少一种式I所示的神经酰胺和提高浓度的所述至少一种式II所示的神经酰胺，则确定所述人受试者需要治疗或需要改变或补充已施用的治疗。6.一种在人受试者中选择CVD和/或一种或多种其并发症的适合治疗的方法，其中所述方法包括：(a)确定获自所述人受试者的生物样品中至少一种式III所示的神经酰胺的浓度：其中R1为具有1...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷约·拉克索宁，
申请(专利权)人：佐拉生物科学公司，
类型：发明
国别省市：芬兰;FI