非高密度脂蛋白来源的CVD标志物制造技术

本发明专利技术特别涉及包含确定脂质/脂质浓度比的方法和应用，从而诊断、预测、预防和/或治疗动脉粥样硬化或心血管疾病(CVD)及其并发症，包括例如急性心肌梗塞。所述方法包括分析来自患者的非高密度脂蛋白样品的脂质浓度和由此获得的脂质/脂质浓度比，并将它们与对照进行比较。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含确定脂质/脂质浓度比的方法和应用，从而诊断、预测、预防和/或治疗动脉粥样硬化或心血管疾病(CVD)及其并发症，包括例如急性心肌梗塞或心血管死亡。所述方法包括分析生物样品的脂质浓度和脂质/脂质浓度比，并将它们与对照进行比较。特别是，本专利技术涉及鉴定新脂质生物标志物，该新脂质生物标志物与包括血浆/血清总胆固醇、甘油三酯、LDL-C、HDL-C或其比率的标准脂质测试相比是更优越的CVD标志物。所述新生物标志物是从分子脂质物种或三酰基甘油脂质类别总和以及神经酰胺和神经酰胺衍生物(葡萄糖基/半乳糖基神经酰胺、GM3神经节苷脂)、胆固醇脂或溶血磷脂的浓度获得的比值。
技术介绍
在全世界范围内，心血管疾病(CVD)是死亡率和发病率的最主要的原因之一，且患病率一直在升高。CVD用来对影响人体的心脏、心脏瓣膜、血液和脉管系统的多种病况进行分类。这些病况之一是冠状动脉疾病(CAD)。CAD发展的中心方面是血管壁中脂质物质的累积，其可导致动脉粥样硬化斑块，其是含有多种脂质的复杂分子形成物。主要脂质来源是低密度脂蛋白(LDL)颗粒，其容易穿过动脉壁并被捕获在动脉壁中，它们在此受到修饰(例如，氧化或聚集)从而增强其保留。通常被认为具有抗粥样动脉硬化能力的高密度脂蛋白(HDL)颗粒能够在称为反向胆固醇输送的过程中从血管壁上除去源自LDL的脂质。另外，HDL颗粒具有有利的抗炎性、抗凋亡性和抗氧化性。通常认可的是，血液中的高总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度预示了CVD风险。血浆或血清总胆固醇、LDL-C或HDL-C浓度已经被用作CVD/CAD风险预测的金标准生物标志物。基于大规模人群研究，标准胆固醇测定显然与CAD风险和CAD终点例如急性心肌梗塞(AMI)或心血管死亡相关。降低胆固醇浓度、尤其是LDL-C浓度(主要通过他汀(statin)治疗)因此已成为主要治疗策略，该策略已经在群体水平上成功降低了发病数量。然而，出于若干原因，LDL-C可能不是用于诊断/治疗目的最佳标的。首先，已经发现有一半的急性心肌梗塞(AMI)患者的LDL-胆固醇水平在推荐的正常范围内。其次，重要的是注意到虽然降低了LDL-C，经他汀治疗的患者仍有相当的剩余(～65％)风险发展CVD/CAD。因此，需要LDL-C以外的其他诊断/治疗靶标。部分剩余风险是由于低HDL-C水平。载脂蛋白A1(HDL颗粒的主要表面蛋白)水平和HDL-C水平(这些颗粒中的胆固醇量)彼此相互关联，并且各自被视为负面风险因素。根据标准脂质测试容易计算出总胆固醇/HDL胆固醇的比值，该比值因此是另一个充分建立的CVD风险评估标志物。提高HDL-C水平(例如，利用烟酸、贝特类物质或CETP抑制剂)已成为与降低LDL-C联合的另一治疗途径。除了总胆固醇、LDL-C和HDL-C，还使用数种非脂质风险因素(包括年龄、血压、糖尿病、吸烟和身体质量指数)进行风险评估以评价/计算个体发生心血管事件的风险。最好的已知风险评分(Framingham评分)评价了个体发生心血管事件的10年风险，其根据包括总胆固醇和HDL-C、年龄、性别、血压、吸烟状况和降脂药的使用在内的因素计算得出。然而，虽然这些风险评分可在群体水平上使用，它们并不能非常准确地揭示个体发生心血管事件的风险。他汀类药物是供有较高风险患心血管并发症的人使用的一类降胆固醇药。他汀类药物被广泛使用。例如，仅在美国就有近2千万接受他汀类药物治疗的患者。而且，据计算，仅在美国就有约5千万患者会获益于他汀类药物治疗。然而，虽然进行了他汀类药物治疗，但CVD患者仍有相当高的风险发展严重的CVD并发症。在早期有目的地开始对CVD相关的严重并发症(例如AMI和死亡)采取预防措施将非常有益，并且能够有较大机会降低CVD患者的死亡率和发病率。准确鉴定出有风险发展CVD和CVD并发症的个体是非常重要的。传统的风险评估未能识别出大比例的高风险患者，而是将很大比例的个体归类为中度风险，从而使患者管理不可靠。因此，非常需要将对高风险CVD的风险评估进一步精细化的其他策略。LDL和HDL均是高度异质的颗粒类别；并且二者均可以根据尺寸、密度、电荷以及其分子组成的不同而进一步划分成多个子类。以下性质被认为直接影响脂蛋白的致动脉粥样硬化或抗动脉粥样硬化潜能：渗透和被捕获在动脉壁中的能力，或发挥抗氧化和抗炎性质并从动脉壁上除去胆固醇的能力。然而，颗粒子类和促/抗动脉粥样硬化潜能的联系不是非常清楚。例如，已提出较小的LDL颗粒比较大的LDL颗粒更致动脉粥样硬化，但还存在矛盾的证据。除了LDL和HDL，人体血浆或血清中含有其他富含甘油三酯的颗粒。这些包括极低密度脂蛋白(VLDL)和中间密度脂蛋白(IDL)。含有LDL、VLDL和IDL颗粒的全血浆/血清统称为非HDL部分。非HDL部分简单地是不含HDL组分的全血浆/血清组分。非HDL组分的脂蛋白具有共同来源，并且被认为在功能和组成上相关。VLDL在肝脏中合成，在血管中被脂肪酶和脂质交换蛋白加工，从而产生中间产物IDL，其进一步加工为LDL。LDL是非HDL组分的主要成分，其次是VLDL(其质量为LDL的大约三分之一)，而IDL作为少数物种存在。在实践中，LDL-C往往不能直接测量，而是利用公式(例如，Friedewald公式)通过从总胆固醇含量中减去HDL-C和甘油三酯含量(除以2.2)来计算。不同的脂蛋白子类可以在其脂质成分方面显著不同。因而，在标准胆固醇试验中具有相同结果的两个人可能在脂蛋白颗粒的量和大小方面明显不同(图1)。因此已经提出，以颗粒数量替代胆固醇含量能更好地反映发展CVD的风险。载脂蛋白B(ApoB)是LDL、VLDL和IDL颗粒(非HDL组分)的主表面蛋白，表现为每个颗粒上的一个ApoB分子。ApoB水平因此直接反映样品中存在的促动脉粥样硬化脂蛋白颗粒的量，而当颗粒尺寸(与胆固醇含量)变化时，对给定的LDL-C浓度而言颗粒的量和心血管风险可能有很大不同。样品的分布、尺寸和颗粒数容易通过核磁共振(NMR)谱获得。一些研究(但不是全部)已经发现，LDL颗粒(LDL-P)或ApoB的量与CVD风险的关联比LDL-C更紧密。然而，最近的研究已经表明，LDL-P的确定或小和大颗粒的分布均不能改善通过计算总/HDL胆固醇比而获得的CVD风险评估(Parish等,2012).LDL-C、HDL-C以及决定颗粒数的其他参数的主要缺点在于它们不必然反映颗粒的品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种获得用于确定受试者是否有风险发展或是否患有动脉粥样硬化或心血管疾病(CVD)和/或其一种或多种并发症的数据的方法，所述方法包括：(a)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/TAG浓度比；(b)确定来自所述受试者的非HDL样品中的CE/TAG浓度比；(c)确定来自所述受试者的非HDL样品中的LPE/TAG浓度比；或(d)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/CE浓度比。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.08 US 61/775,4451.一种获得用于确定受试者是否有风险发展或是否患有动脉粥样硬化或心血管
疾病(CVD)和/或其一种或多种并发症的数据的方法，所述方法包括：
(a)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/TAG浓度比；
(b)确定来自所述受试者的非HDL样品中的CE/TAG浓度比；
(c)确定来自所述受试者的非HDL样品中的LPE/TAG浓度比；或
(d)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/CE浓度比。
2.一种确定受试者是否有风险发展或是否患有动脉粥样硬化或心血管疾病
(CVD)和/或其一种或多种并发症的方法，所述方法包括：
(a)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/TAG浓度比，其中，与对
照相比所述样品中浓度比下降表明所述受试者患有或有增加的风险发展动脉粥样硬
化或CVD和/或其一种或多种并发症；
(b)确定来自所述受试者的非HDL样品中的CE/TAG浓度比，其中，与对照相比
所述样品中浓度比下降表明所述受试者患有或有增加的风险发展动脉粥样硬化或
CVD和/或其一种或多种并发症；
(c)确定来自所述受试者的非HDL样品中的LPE/TAG浓度比，其中，与对照相
比所述样品中浓度比下降表明所述受试者患有或有增加的风险发展动脉粥样硬化或
CVD和/或其一种或多种并发症；或
(d)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/CE浓度比，其中，与对照
相比所述样品中浓度比下降表明所述受试者患有或有增加的风险发展动脉粥样硬化
或CVD和/或其一种或多种并发症。
3.一种评估对受试者的动脉粥样硬化或CVD和/或其一种或多种并发症的治疗
的有效性的方法，所述方法包括：
(a)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/TAG浓度比，其中，与对
照相比所述样品中浓度比下降表明所述治疗有效；
(b)确定来自所述受试者的非HDL样品中的CE/TAG浓度比，其中，与对照相比
所述样品中浓度比下降表明所述治疗有效；
(c)确定来自所述受试者的非HDL样品中的LPE/TAG浓度比，其中，与对照相

\t比所述样品中浓度比下降表明所述治疗有效；或
(d)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/CE浓度比，其中，与对照
相比所述样品中浓度比下降表明所述治疗有效。
4.一种为受试者的动脉粥样硬化或CVD和/或其一种或多种并发症选择合适的
治疗的方法，所述方法包括：
(a)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/TAG浓度比，其中，与对
照相比所述样品中浓度比下降表明所述受试者需要治疗或需要对已经施用的治疗进
行改变或补充；
(b)确定来自所述受试者的非HDL样品中的CE/TAG浓度比，其中，与对照相比
所述样品中浓度比下降表明所述受试者需要治疗或需要对已经施用的治疗进行改变
或补充；
(c)确定来自所述受试者的非HDL样品中的LPE/TAG浓度比，其中，与对照相
比所述样品中浓度比下降表明所述受试者需要治疗或需要对已经施用的治疗进行改
变或补充；或
(d)确定来自所述受试者的非HDL样品中的神经酰胺/CE浓度比，其中，与对照
相比所述样品中浓度比下降表明所述受试者需要治疗或需要对已经施用的治疗进行
改变或补充。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述方法是计算机执行的方法。
6.如权利要求5所述的方法，所述方法还包括：
(e)通过至少一个处理器获得反映出所述非HDL样品中的所述神经酰胺/TAG浓
度比、所述非HDL样品中的所述CE/TAG浓度比、所述非HDL样品中的所述LPE/TAG
浓度比、或所述非HDL样品中的所述神经酰胺/CE浓度的信息；
(f)通过至少一个处理器确定所述非HDL样品中的所述神经酰胺/TAG浓度比、
所述非HDL样品中的所述CE/TAG浓度比、所述非HDL样品中的所述LPE/TAG浓
度比、或所述非HDL样品中的所述神经酰胺/CE浓度；和
(g)以用户可读形式输出所述非HDL样品中的所述神经酰胺/TAG浓度比、所述
非HDL样品中的所述CE/TAG浓度比、所述非HDL样品中的所述LPE/TAG浓度比、
或所述非HDL样品中的所述神经酰胺/CE浓度。
7.如权利要求6所述的方法，所述方法还包括：
(h)通过至少一个处理器确定对照与所述非HDL样品中的所述神经酰胺/TAG浓
度比、所述非HDL样品中的所述CE/TAG浓度比、所述非HDL样品中的所述LPE/TAG
浓度比、或所述非HDL样品中的所述神经酰胺/CE浓度之间的百分比差异；和
(i)以用户可读形式输出在确定步骤(h)中获得的所述百分比差异。
8.如权利要求7所述的方法，所述方法还包括：基于在输出步骤中获得的所述
百分比差异，确定受试者是否有风险发展或是否患有动脉粥样硬化或心血管疾病
(CVD)和/或其一种或多种并发症。
9.如权利要求3所述的方法，所述方法还包括：在确定步骤之后，基于在所述
确定步骤中获得的所述神经酰胺/TAG浓度比、CE/TAG浓度比、LPE/TAG浓度比、
或神经酰胺/CE浓度比，改变、补充或保持对所述受试者已经施用的治疗。
10.如权利要求4所述的方法，所述方法还包括：在确定步骤之后，基于在所述
确定步骤中获得的所述神经酰胺/TAG浓度比、CE/TAG浓度比、LPE/TAG浓度比、
或神经酰胺/CE浓度比来治疗所述受试者。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中
(a)所述神经酰胺/TAG浓度比选自表1中提到的任意神经酰胺/TAG浓度比；
(b)所述CE/TAG浓度比选自表2中提到的任意CE/TAG浓度比；
(c)所述LPE/TAG浓度比选自表3中提到的任意LPE/TAG浓度比；或
(d)所述神经酰胺/CE浓度比选自表4中提到的任意神经酰胺/CE浓度比。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，利用测定来完成对脂质/脂
质浓度比的确定。
13.如权利要求3、4、9或10所述的方法，其中，所述治疗是调脂性治疗。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，
(a)所述神经酰胺/TAG浓度比选自：
Glc/GalCer(d18:1/22:0)/TAG 50:1总(16:0/16:0/18:1)；
Cer(d18:1/22:0)/TAG 50:1总(16:0/16:0/18:1)；或
GM3-d18:1/24:0/TAG 54:2总(18:0/18:1/18:1)；
(b)所述CE/TAG浓度比选自：
CE 22:6/TAG 50:1总(16:0/16:0/18:1)；
CE 16:0/TAG 50:1总(16:0/16:0/18:1)；或
CE 22:6/TAG 50:2总(14:0/18:1/18:1)(16:0/16:0/18:2)(16:0/16:1/18:1)；
(c)所述LPE/TAG浓度比选自：
LPE 18:0/TAG 50:1总(16:0/16:0/18:1)；
LPE 18:0/TAG 50:2总(14:0/18:1/18:1)(16:0/16:0/18:2)(16:0/16:1/18:1)；或
LPE 16:0/TAG 50:2总(14:0/18:1/18:1)(16:0/16:0/18:2)(16:0/16:1/18:1)；
或
(d)所述神经酰胺/CE浓度比选自：
Cer(d18:1/18:0)/CE 22:0；
Cer(d18:1/20:0)/CE 22:0；或
Cer(d18:1/22:0)/CE 22:0。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法包括确定至少2、至少3、至
少4、至少5、至少6、至少7、或至少8种本文提到的脂质/脂质浓度比或其组合。
16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，
(a)所述CVD的特征为冠状动脉疾病、外周动脉疾病、卒中和/或CVD死亡；和
/或
(b)所述CVD是动脉粥样硬化引起的；和/或
(c)所述受试者具有动脉粥样硬化；或
(d)所述受试者不具有动脉粥样硬化。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中
(a)所述方法还包括：确定来自所述受试者的样品中的总胆固醇、低密度脂蛋白
胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白B(ApoB)和/或载脂蛋白
C-III(ApoC-III)的血清水平；和/或
(b)所述受试者不具有血清水平升高的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、
载脂蛋白C-III(ApoC-III)或载脂蛋白B(ApoB)中的一种或多种，或血清水平降低的
HDL-胆固醇(HDL-C)。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述受试者
(a)正接受或已经接受过他汀、另一种降脂药、和/或脂质/脂质浓度比调节剂的治
疗；或
(b)还未接受过他汀疗法、另一种降脂药疗法、和/或脂质/脂质浓度比调节剂疗法。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述非HDL样品是LDL样品、
极低密度脂蛋白(VLDL)样品、或中间密度脂蛋白(IDL)样品，或其组合。
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述非HDL样品是LDL样品。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，脂质/脂质浓度比利用以下方法
确定：质谱法，核磁共振谱法，荧光光谱法或双偏振干涉测量法，诸如HPLC、UHPLC
或UPLC等高效分离方法，诸如ELISA等免疫测定，和/或用能够特异性地结合分析
物的结合性部分进行的测定。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法用于：
(a)确定患者发展CVD的风险；
(b)确定患者的CVD早期预警信号；
(c)确定或预测动脉粥样硬化在患者中的存在；和/或
(d)预测和/或诊断CVD和/或CVD并发症，包括预测和/或诊断心肌梗塞(MI)、
心绞痛、短暂缺血发作(TIA)和卒中，或预测死亡。
23.一种能够调节权利要求1至4、11或14中任一项所述的脂质/脂质浓度比的
药物，所述药物用于治疗或预防动脉粥样硬化或CVD和/或其一种或多种并发症，其
中，施用所述药物使得来自所述受试者的样品中的所述脂质/脂质浓度比在与对照相
比时没有显著不同，并且其中，所述药物是他汀、另一种降脂药或脂质/脂质浓度比
调节剂。
24.一种治疗或预防有需要的受试者的动脉粥样硬化或CVD和/或其一种或多种
并发症的方法，所述方法包括施用治疗有效剂量的能够调节权利要求1至4、11或
14中任一项所述的脂质/脂质浓度比的药物，其中，施用所述药物使得所述脂质/脂质
浓度比在与对照相比时没有显著不同，并且其中，所述药物是他汀、另一种降脂药或
脂质/脂质浓度比调节剂。
25.一种治疗或预防有需要的受试者的动脉粥样硬化或CVD和/或其一种或多种
并发症的方法，所述方法包括对所述受试者施用治疗有效剂量的能够调节权利要求1
至4、11或14中任一项所述的脂质/脂质浓度比的药物，其中，施用所述药物使得所
述脂质/脂质浓度比在与对照相比时没有显著不同，并且其中，所述药物是：他汀；
选自除他汀以外的HMG-CoA还原酶抑制剂、尼克酸(烟酸)、胆固醇吸收抑制剂、胆
固醇酯转移蛋白(CETP)、胆汁酸多价螯合剂、贝特类物质、植物固醇和PCSK9抑制

\t剂的另一种降脂药；或选自小分子、抗体、反义RNA、小干扰RNA(siRNA)或者天
然的或经修饰的脂质的脂质/脂质浓度比调节剂。
26.一种治疗或预防...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·拉克松恩，
申请(专利权)人：佐拉生物科学公司，
类型：发明
国别省市：芬兰;FI