分枝杆菌抗原组合物制造技术

提供了包含Rv1196相关抗原的分枝杆菌抗原免疫原性组合物及其在药物中的用途，其中所述组合物的导电性是13 mS/cm或更低，或者所述组合物的盐浓度是130 mM或更低。

Mycobacterial antigen composition

Immunogenic compositions of mycobacterial antigens containing Rv1196 related antigens are provided and its use in medicine, the conductivity of the composition is 13 mS/cm or lower, or the salt concentration of the composition is 130 mM or less.

【技术实现步骤摘要】
分枝杆菌抗原组合物本申请是申请日为2011年12月14日的中国专利申请201180060489.6“分枝杆菌抗原组合物”的分案申请。
本专利技术涉及包含Rv1196相关抗原且具有低离子强度的免疫原性组合物。本专利技术也涉及进一步包含一种或多种免疫刺激剂的这类免疫原性组合物。还提供了用于制备这类免疫原性组合物的方法和相关的试剂盒。
技术介绍
结核病(TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)和其他分枝杆菌种的感染引起的慢性传染性疾病。它是世界上发展中国家的一种主要疾病，并成为发达区域日益严重的问题。超过20亿人被认为感染了TB杆菌，每年新增约940万TB病例和170万死亡病例。其中10%感染TB杆菌的人会发展活动性TB，每位患有活动性TB的人平均每年感染10-15个其他人。尽管在全球的每年发病率已经达到顶峰，但是由于人口增长，死亡数和病例数依然在上升(WorldHealthOrganisationTuberculosisFacts2010)。分枝杆菌蛋白Rv1196(描述为，例如，Dillon等人InfectionandImmunity199967(6):2941-2950中的名称Mtb39a)或其片段或衍生物是具有用于治疗或预防结核病的潜在益处的蛋白抗原。Rv1196是高度保守的，在H37Rv、C、Haarlem、CDC1551、94-M4241A、98-R604INH-RIF-EM、KZN605、KZN1435、KZN4207、KZNR506菌株间具有100％序列同一性，F11菌株具有单一点突变Q30K。Rv1196是融合蛋白抗原Mtb72f和M72(描述于，例如，国际专利申请WO2006/117240)的组分。为了确保能维持免疫原性，蛋白抗原的配制极端重要。有时使用免疫刺激剂以改善针对任何给定抗原而产生的免疫应答。然而，在免疫原性组合物中包含佐剂会增加成分制备的复杂性以及组合物的分布和配制的复杂性。配制者必须考虑每种佐剂成分以及抗原性成分的制备。具体而言，应当考虑抗原性成分与佐剂成分的相容性。这尤其是在预期将冻干抗原或抗原制剂与佐剂制剂重构的情况下。在这种情况下，重要的是，佐剂制剂的缓冲液对于抗原而言是合适的并且抗原的免疫原性或溶解度不会受到佐剂的影响。
技术实现思路
本专利技术人已经首次鉴定Rv1196相关抗原对盐的存在特别敏感。不受理论的限制，据信Rv1196相关抗原受被称为“盐析”的现象的不利影响，该现象可以被定义为通过蛋白与盐如氯化钠的相互作用而从其溶液中沉淀。本专利技术人已经发现，当氯化钠浓度低至150mM时，这些抗原就会聚集和沉淀。因此，包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物的稳定性令人惊讶地可以通过降低氯化钠浓度而改善。因此，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是13mS/cm或更低。额外提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是130mM或更低。本专利技术还提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的氯化钠浓度是130mM或更低。附图简述图1.QS21裂解活性曲线图2.在不同ASA制剂中，每种3D-MPL同类物(congener)的百分比图3.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的浊度测定图4.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的DLS图5.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的DLS图6.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的浊度测定图7.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原稳定性图8a-8d.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的SEC-HPLC分析图9.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原性图10.NaCl标准溶液的导电率图11.使用本专利技术的免疫原性组合物在小鼠中诱导CD4T细胞应答图12.使用本专利技术的免疫原性组合物在小鼠中诱导CD8T细胞应答图13.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的浊度测定图14.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的DLS图15.储存后具有不同的NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原性。序列标识符简述SEQIDNo:1来自结核分枝杆菌H37Rv的Rv1196蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:2编码来自结核分枝杆菌H37Rv的Rv1196蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:3来自结核分枝杆菌F11的Rv1196蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:4编码来自结核分枝杆菌F11的Rv1196蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:5M72蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:6编码M72蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:7具有2个N-末端His残基的M72蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:8编码具有2个N-末端His残基的M72蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:9Mtb72f蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:10编码Mtb72f蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:11具有六个N-末端His残基的Mtb72f蛋白的氨基酸序列SEQIDNo:12编码具有六个N-末端His残基的Mtb72f蛋白的核苷酸序列SEQIDNo:13CpG寡核苷酸1的核苷酸序列(CpG1826)SEQIDNo:14CpG寡核苷酸2的核苷酸序列(CpG1758)SEQIDNo:15CpG寡核苷酸3的核苷酸序列SEQIDNo:16CpG寡核苷酸4的核苷酸序列(CpG2006)SEQIDNo:17CpG寡核苷酸5的核苷酸序列(CpG1686)。具体实施方式在第一个方面，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是13mS/cm或更低。具体而言，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物的导电率是12mS/cm或更低，例如10mS/cm或更低、8mS/cm或更低、6mS/cm或更低、5mS/cm或更低、4mS/cm或更低或3mS/cm或更低。在特定的实施方案中，免疫原性组合物的导电率是2.5mS/cm或更低，如2.25mS/cm或更低或2.0mS/cm或更低。在进一步特定的实施方案中，免疫原性组合物的导电率是1.5至2.5mS/cm。在第二个方面，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是130mM或更低。具体而言，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是100mM或更低，例如90mM或更低、80mM或更低、70mM或更低、60mM或更低、50mM或更低、或40mM或更低。在特定的实施方案中，所述组合物中的盐浓度是35mM或更低，如30mM或更低或25mM或更低。在进一步特定实施方案中，所述组合物中的盐浓度是20至40mM，如25至35mM。在第三个方面，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中氯化钠浓度是130mM或更低。具体而言，本专利技术提供包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中氯化钠浓度是100mM或更低，例如90mM或更低、80mM或更低、70mM或更低、60mM或更低、50mM或更低、40mM或更低、30mM或更本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中：(i) 所述组合物的导电率是13 mS/cm或更低；和/或(ii) 所述组合物中盐的浓度是130 mM或更低；和/或(iii) 所述组合物中氯化钠的浓度是130 mM或更低。

【技术特征摘要】
2010.12.14 US 61/4227231.包含Rv1196相关抗原的免疫原性组合物，其中：(i)所述组合物的导电率是13mS/cm或更低；和/或(ii)所述组合物中盐的浓度是130mM或更低；和/或(iii)所述组合物中氯化钠的浓度是130mM或更低。2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是10mS/cm或更低。3.根据权利要求2所述的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是3mS/cm或更低。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物中盐的浓度是100mM或更低。5.根据权利要求4所述的免疫原性组合物，其中所述组合物中盐的浓度是40mM或更低。6.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物中氯化钠的浓度是100mM或更低。7.根据权利要求6所述的免疫原性组合物，其中所述组合物中氯化钠的浓度是40mM或更低。8.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物中CaCl2的浓度是30mM或更低。9.根据权利要求1至8中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物中MgSO4的浓度是60mM或更低。10.根据权利要求1至9中任一项所述的免疫原性组合物，NH4+、Mg2+和Ca2+离子的总浓度是40mM或更低。11.根据权利要求1至10中任一项所述的免疫原性组合物，进一步包含非离子涨度剂。12.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述非离子涨度剂是多元醇。13.根据权利要求12所述的免疫原性组合物，其中所述多元醇是山梨醇。14.根据权利要求13所述的免疫原性组合物，其中所述山梨醇的浓度是约4至约6%(w/v)。15.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述蔗糖的浓度是约4至约6%(w/v)。16.根据权利要求1至15中任一项所述的免疫原性组合物，进一步包含一种或多种免疫刺激剂。17.根据权利要求16所述的免疫原性组合物，其中所述免疫刺激剂是皂苷和/或TLR4激动剂。18.根据权利要求17所述的免疫原性组合物，其中所述一种或多种免疫刺激剂是脂质体形式。19.根据权利要求17或18所述的免疫原性组合物，其中所述皂苷是QS21。20.根据权利要求17至19中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述TLR4激动剂是3-脱-O-酰化单磷酰脂质A。21.根据权利要求1至20中任一项所述的免疫原性组合物，其中重量摩尔渗透压浓度是250至750mOsm/kg。22.根据权利要求1至21中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物作为50ul至1ml的单位剂量提供。23.根据权利要求22所述的免疫原性组合物，其中所述单位剂量是100ul至750ul。24.根据权利要求22或23所述的免疫原性组合物，其中单位剂量含有1至100ug的Rv1196相关抗原。25.根据权利要求24所述的免疫原性组合物，其中单位剂量含有5至50ug的Rv1196相关抗原。26.根据权利要求1至25中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物的pH在7.0至9.0的范围内。27.根据权利要求1至26中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述Rv1196相关抗原包含与SEQIDNo:1具有至少70%...

【专利技术属性】
技术研发人员：SAG戈达特，A拉南，DI莱莫伊内，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE