一种测定肌红蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定肌红蛋白的试剂盒。本试剂盒由R1、R2双试剂组成，试剂R1的组分为：Tris缓冲液15~145 mmol/L、氯化钠50~200 mmol/L、聚乙二醇‑8000  5~20 g/L、叠氮钠0.4~1.2 g/L、牛血清白蛋白12~32 g/L、溶剂为纯化水；试剂R1的组分为：Tris缓冲液50~150 mmol/L、牛血清白蛋白4~26 g/L、甘油5~15 g/L、叠氮钠0.6~1.2 g/L、乳胶包被抗人肌红蛋白抗体1~4 g/L、溶剂为纯化水。样品中肌红蛋白（MYO）可与试剂R2中相应的特异性抗‑MYO抗体结合形成抗原‑抗体复合物，产生一定浊度。该浊度高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比。在一定波长下测定浊度并通过多点定标曲线可进行肌红蛋白的定量测定。本发明专利技术具有准确度高、操作方便等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学及生物化学
，具体来说是一种测定肌红蛋白的试剂盒。
技术介绍
肌红蛋白（Myoglobin,Mb）是一种氧结合血红素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌组织约占肌肉总量的0.1%~0.2%。在急性心肌损伤时，Mb最先被释放入血液中，在症状出现约2-3小时后，血中Mb可超出正常上限，9-12小时达到峰值，24-36小时后恢复正常。对于怀疑ACS的病人建议连续采样测定，因为症状出现和蛋白标志物释放到血液之间有一段延迟。Mb阴性有助于排除心梗。测定血清肌红蛋白肌红蛋白可作为急性心肌梗死(AMI) 诊断的早期最灵敏的指标 。但特异性差 ,骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病 ,都可导致其升高。Myo 阳性虽不能确诊 AMI ,但可用于早期排除 AMI 诊断的重要指标 ,如 Myo 阴性 ,则基本排除心肌梗死 ,还可用于再梗死的诊断 ,结合临床 ,如 Myo 重新升高 ,应考虑为再梗死或者梗死延展。目前肌红蛋白的检测方法主要有放射免疫法、酶联免疫吸附法、化学发光等。放射免疫法有放射性物质，会造成放射性污染；酶联免疫吸附法操作复杂、耗时长，对操作人员有较高的专业要求；化学发光成本较高，且检测所需仪器较为昂贵。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中肌红蛋白检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，提供一种测定肌红蛋白的试剂盒。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：一种测定肌红蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 15~145 mmol/L氯化钠 50~200 mmol/L聚乙二醇-8000 5~20 g/L叠氮钠 0.4~1.2 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水。试剂R2：Tris缓冲液 50~150 mmol/L牛血清白蛋白 4~26 g/L甘油 5~15 g/L叠氮钠 0.6~1.2 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体 1~4 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 80 mmol/L氯化钠 125 mmol/L聚乙二醇-8000 13 g/L叠氮钠 0.8 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水。试剂R2：Tris缓冲液 100 mmol/L牛血清白蛋白 15 g/L甘油 10 g/L叠氮钠 0.8 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体 3 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，所述的乳胶包被抗人肌红蛋白抗体为含有能与人肌红蛋白特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。作为优选，所述的乳胶包被抗人肌红蛋白抗体的粒径在40~500nm之间。作为优选，试剂盒的制备方法和使用方法包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：Tris缓冲液 15~145 mmol/L氯化钠 50~200 mmol/L聚乙二醇-8000 5~20 g/L叠氮钠 0.4~1.2 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水。（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：Tris缓冲液 50~150 mmol/L牛血清白蛋白 4~26 g/L甘油 5~15 g/L叠氮钠 0.6~1.2 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体 1~4 g/L其溶剂为纯化水。（c）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应作为进一步的优选，试剂R1与试剂R2的体积比为 3：1，待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：20到1：60之间。（d）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；（e）根据吸光度变化值计算出样本中的人肌红蛋白的值。作为优选，所述的乳胶包被抗人肌红蛋白抗体制备步骤如下：（a）将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到3 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内15000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；（b）将步骤（a）的产物在离心机内15000rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为6.0 g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的抗人肌红蛋白抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为3.0 g/L；（c）将步骤（b）的产物在离心机内15000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜；离心去上清，用步骤（b）制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为3g/l，超声分散即可制得乳胶包被抗人肌红蛋白抗体。本专利技术所采用的胶乳增强免疫比浊法的反应原理是利用抗原抗体反应，样品中肌红蛋白（MYO）可与试剂中相应的特异性抗-MYO抗体结合形成抗原-抗体复合物，产生一定浊度。该浊度高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比。在一定波长下测定浊度并通过多点定标曲线可进行肌红蛋白的定量测定。样本中肌红蛋白（MYO）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）式中：ΔAT 以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值ΔAS 以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值CS 校准液中α1-MG的浓度与现有技术相比，本专利技术具有以下有益优点：对肌红蛋白的检测灵敏度更高，检测准确性更好，另外检测也比较方便。附图说明：图1为本试剂盒与化学发光法的检测结果对比。具体实施方式以下结合具体实施例进一步说明，但本专利技术并不仅限于这些实施例。实施例1本专利技术的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中试剂R1：Tris缓冲液 80 mmol/L氯化钠 125 mmol/L聚乙二醇-8000 13 g/L叠氮钠 0.8 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水。试剂R2：Tris缓冲液 10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定肌红蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其特征在于：所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液          15~145 mmol/L氯化钠              50~200 mmol/L聚乙二醇‑8000       5~20 g/L叠氮钠              0.4~1.2 g/L牛血清白蛋白        12~32 g/L其溶剂为纯化水；试剂R2：Tris缓冲液                 50~150 mmol/L牛血清白蛋白               4~26 g/L甘油                       5~15 g/L叠氮钠                     0.6~1.2 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体   1~4 g/L其溶剂为纯化水。

【技术特征摘要】
1.一种测定肌红蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其特征在于：所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 15~145 mmol/L氯化钠 50~200 mmol/L聚乙二醇-8000 5~20 g/L叠氮钠 0.4~1.2 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水；试剂R2：Tris缓冲液 50~150 mmol/L牛血清白蛋白 4~26 g/L甘油 5~15 g/L叠氮钠 0.6~1.2 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体 1~4 g/L其溶剂为纯化水。2.如权利要求1所述的一种测定肌红蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 80 mmol/L氯化钠 125 mmol/L聚乙二醇-8000 13 g/L叠氮钠 0.8 g/L牛血清白蛋白 12~32 g/L其溶剂为纯化水；试剂R2：Tris缓冲液 100 mmol/L牛血清白蛋白 15 g/L甘油 10 g/L叠氮钠 0.8 g/L乳胶包被抗人肌红蛋白抗体 3 g/L其溶剂为纯化水。3.如权利要求1所述的一种测定人肌红蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人肌红蛋白抗体为含有能与人肌红蛋白特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。4.如权利要求1所述的一种测定人肌红蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人肌红蛋白抗体的粒径在40~500nm之间。5.如权利要求1所述的一种测定人肌红蛋白的试剂盒，其特征在于：试剂盒的制备方法和使用方法包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：Tris缓冲液 15~145 mmol/L氯化钠 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓辉，庄庆华，吴铮，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34