一种儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒制造技术

一种用于儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，可以及早发现儿童先天性耳聋易感性。本试剂盒由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的ＤＮＡ样本为检测对象，经过样本ＤＮＡ抽提后，使用试剂盒在荧光定量ＰＣＲ仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。本发明专利技术的使用可在儿童的任何年龄阶段进行，以做到早发现，早治疗；只需取其ＤＮＡ样本，比如口腔样本，操作简便。能为儿童先天性耳聋的临床诊断提供有价值的参考信息，提早采取预防和治疗措施，有利于使儿童患者得到更好的治疗效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童先天性耳聋基因分析检测的试 剂盒。
技术介绍
先天性耳聋是指因父母的遗传因素或母亲在妊娠过程、分娩过程中的异常造成的耳聋。 分为传导性、感音神经性和混合性三类，并大多为感音神经性耳聋。有时还可以伴有其它部 位畸形，如眼、牙齿、毛发、颈部、四肢等畸形。由于先天性耳聋分为遗传性耳聋和非遗传 性耳聋；并且又分为传导性、感音神经性和混合性三类。因此只有早日将其确诊并区别开来， 才能获得更好更有效的治疗效果。先天性耳聋现有的治疗方法是无论年龄大小， 一旦发现则需要马上治疗。以现在医疗水 平，越早发现先天性耳聋，越有好的治疗效果。因此，人们希望有一种简便而客观的方法可以进行儿童先天性耳聋基因检测，做到早发 现、早诊断，提早采取预防和治疗措施。
技术实现思路
为了可以简便而客观地对儿童先天性耳聋进行测试，本专利技术提供一种儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童先天性耳聋的基因进行检测，从而简便快捷地测试其先天性耳聋。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。上述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及扩增与儿童先天性耳聋GJB2基因相关突变的引物；扩增GJB2基因上第235位缺失型的引物序列如下上游引物FlDel: 5-C CAC ATC CGG CTA TGG GTC T-3 20bp， 上游引物F1CI: 5-CAC ATC CGG CTA TGG GTC C-3 19bp， 下游引物R1: 5-TCT CCC CCT TGA TGA ACT TCC T-3 22bp; 扩增GJB2基因上16个碱基缺失型的引物序列如下 上游引物F2I: 5-GCC AGG CTG CAA GAA CGT G-3 19bp， 下游引物R2I: 5-ACGTGCATGGCCACTAGGAG-3 20bp， 上游引物F2Del: 5陽CTGCAAAGGAGGTGTGGGG-3 19bp， 下游引物R2Deh 5-GGGGAAGTAGTGATCGTAGCTGG-3 23bp。上述的儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有2个， 分别包含如下的序列SEQ1:TCTCCCCCTTTGCATGGCCACCATAGCCGGTGCAGCCTGGCACACCTCCTSEQ2:TCTCCCCCTTTGCATGGCCACATAGCCGGAGTGTTGCAGACCTTTGCAG。GATGAACTTC CTAGGAGCGC ATGTGGGAGA CTGCAGGGTG TTGCAG;CTCTTCTTCT TGGCGTGGAC TGGGGAAGTA TTGCAGACAACATGTCTCCG ACGAAGATCA GTGATCGTAG AGTCGGCCTGGTAGGCCACG GCTGCAGGGC CACACGTTCT CTCATCTCCCGTAGGCCACG GTTGCAGGCC TGGCTGCAGG CCCCACACCTGATGAACTTC CTAGGAGCGC TGTGGGAGATCTCTTCTTCTTGGCGTGGACGGGGAAGTAGCATGTCTCCGACGAAGATCATGATCGTAGCCAAAGTCGGCCTGCTCATCT上述的儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，其特征在于所述的阴性对照品包含的序 列为TTCGTTATTG AATCTTGTTT TGGTTCTCTT GTGTGGAATG CATTGTTCTT GCTTCTCTGG AACTTGGGAT ATGATGACAA AAATACGATA TCTCTAAGGC TAATTGCTGT GCGGATGAAA TATATTTGCA CGTCAGTCTG ATCCCATTAT GTATATAACA TTAGGAGTTG GTGCATGCTC。本专利技术的使用可在儿童的任何年龄阶段进行，以做到早发现，早治疗；只需取其DNA样 本，比如口腔样本，操作简便。能为儿童先天性耳聋的临床诊断提供有价值的参考信息，提 早采取预防和治疗措施，有利于使儿童患者得到更好的治疗效果。附图说明图1，图2，图3,图4，图5，图6为荧光定量PCR仪上的扩增曲线图。各图上方的Delta RnvsCycle，是指ARn随循环变化的对数扩增图谱；ARn(DeltaRn)是指在给定的一组PCR 条件下所生成荧光信号的对数值。该图的横坐标表示循环数(CycleNumber),纵坐标表示荧 光值(DdtaRn)。横线表示荧光域值，曲线与荧光域值线的交叉点所对应的循环数即为Ct值。图l、图2、图3中横线3表示荧光域值；曲线1表示为扩增GJB2基因上第235位缺失 型的引物对FlDel +R1，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线2为扩增GJB2基因上第235位 缺失型的引物对F1CI +R1，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图1表示GJB2基因上第235位没有缺失的野生纯合型样本产物扩增曲线图曲线1与 荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cl，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C2。图2表示GJB2基因上第235位缺失的突变纯合型样本产物扩增曲线图曲线2与荧光 域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C3，曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到 域值的Ct循环数值为C4。图3表示GJB2基因上第235位缺失型的杂合型样本产物扩增曲线图曲线1与荧光域 值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C5，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域 值的Ct循环数值为C6。图4、图5、图6中横线4表示荧光域值；曲线5表示为扩增GJB2基因上16位缺失型 的引物对F2Del + R2Del，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线6表示为扩增GJB2基因上没有 16位缺失的引物对F21 +R2I,这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图4表示GJB2基因上16位缺失纯合型产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点 表示达到域值的Ct循环数值为C7，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数 值为C8。图5表示GJB2基因上16位缺失杂合型产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点 表示达到域值的Ct循环数值为C9，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数 值为CIO。图6表示GJB2基因上没有16位缺失纯合型产物扩增曲线图曲线6与荧光域值线的交 叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cll，曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct 循环数值为C12。具体实施例下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采 用方法如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建 议的步骤和条件。实施例l:试剂盒的制备。包括(1)探针的准备；(2) DNA抽提试剂；(3)预混反应液；(4)标准 阳性对照；(5)标准阴性对照。 (1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，其特征在于：由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混ＰＣＲ反应液含有ＳＹＢＲ　ｇｒｅｅｎ　Ｉ，以及扩增与儿童先天性耳聋ＧＪＢ２基因相关突变的引物；　　　　扩增ＧＪＢ２基因上第２３５位缺失型的引物序列如下：　　　　上游引物Ｆ１Ｄｅｌ：５－Ｃ　ＣＡＣ　ＡＴＣ　ＣＧＧ　ＣＴＡ　ＴＧＧ　ＧＴＣ　Ｔ－３　２０ｂｐ，　　　　上游引物Ｆ１ＣＩ：　５－ＣＡＣ　ＡＴＣ　ＣＧＧ　ＣＴＡ　ＴＧＧ　ＧＴＣ　Ｃ－３　１９ｂｐ，　　　　下游引物Ｒ１：　５－ＴＣＴ　ＣＣＣ　ＣＣＴ　ＴＧＡ　ＴＧＡ　ＡＣＴ　ＴＣＣ　Ｔ－３　２２ｂｐ；　　　　扩增ＧＪＢ２基因上１６个碱基缺失型的引物序列如下：　　　　上游引物Ｆ２Ｉ：５－ＧＣＣ　ＡＧＧ　ＣＴＧ　ＣＡＡ　ＧＡＡ　ＣＧＴＧ－３　１９ｂｐ，　　　　下游引物Ｒ２Ｉ：５－ＡＣＧ　ＴＧＣ　ＡＴＧ　ＧＣＣ　ＡＣＴ　ＡＧＧ　ＡＧ－３　２０ｂｐ，　　　　上游引物Ｆ２Ｄｅｌ：５－ＣＴＧ　ＣＡＡ　ＡＧＧ　ＡＧＧ　ＴＧＴ　ＧＧＧ　Ｇ－３　１９ｂｐ，　　　　下游引物Ｒ２Ｄｅｌ：５－ＧＧＧ　ＧＡＡ　ＧＴＡ　ＧＴＧ　ＡＴＣ　ＧＴＡ　ＧＣＴ　ＧＧ－３　２３ｂｐ。...

【技术特征摘要】
1.一种儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及扩增与儿童先天性耳聋GJB2基因相关突变的引物；扩增GJB2基因上第235位缺失型的引物序列如下上游引物F1Del5-C CAC ATC CGG CTA TGG GTC T-3 20bp，上游引物F1CI 5-CAC ATC CGG CTA TGG GTC C-3 19bp，下游引物R1 5-TCT CCC CCT TGA TGA ACT TCC T-3 22bp；扩增GJB2基因上16个碱基缺失型的引物序列如下上游引物F2I5-GCC AGG CTG CAA GAA CGT G-3 19bp，下游引物R2I5-ACG TGC ATG GCC ACT AGG AG-320bp，上游引物F2Del5-CTG CAA AGG AGG TGT GGG G-3 19bp，下游引物R2Del5-GGG GAA GTA GTG ATC GTA GCT GG-3 23bp。2.如权利要求1所述的儿童先天性耳聋基因分析检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有2个，分别包含如下的序列 SEQ1:TCTCCCCCTT GATGAACTTC CTCTTCTTCT CATGTCTCCG GTAGGCCACG TGCATGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，黎飒，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]