一种癌抗原１２５（ＣＡ１２５）酶联免疫吸附检测试剂盒，能够直接从人血清中快速地检测出ＣＡ１２５的浓度。其主要技术特征是选择ＣＡ１２５外显子１中的特定氨基酸序列制备单克隆抗体；选择ＣＡ１２５外显子３中的特定氨基酸序列制备兔抗ＣＡ１２５多克隆抗体。检测时，样品可同时与固相单抗以及酶标兔抗ＣＡ１２５多克隆抗体相结合。血清中ＣＡ１２５水平升高多见于卵巢癌，亦见于子宫内膜炎及其它癌症。该检测试剂盒可用于卵巢癌等检测以及治疗预后好坏的判定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利涉及一种能够定量测定人血清或血浆中癌抗原125 (CA125)浓度的酶联免疫 吸附(ELISA)检测试剂盒的制备。
技术介绍
卵巢癌是妇女癌变中第八个常见的病种。目前，仍没有标准的筛选方法来检测卵巢癌[1' 2I。血清中CA125是一种高分子量的糖蛋白31，是一种与表皮卵巢癌相关的表面抗原。研究 表明，血清CA125水平的升高见于严重的子宫内膜炎和卵巢癌。60%以上患有卵巢癌的妇女， 其血清CA125的浓度高于35单位/毫升。血清CA125浓度的变化亦可用于术后监测与预后好 坏的判定。迄今为止，CA125是残留性(residual)表皮卵巢癌的非常敏感的标记物(marker)。此 外，CA125浓度的升高亦见于肺癌、宫颈癌、输卵管癌、子宫癌以及子宫内膜炎等。目前，国外有采用ELISA来检测人血清中CA125浓度的技术手段。一般采用双抗体夹芯 法，即样品同时与固相抗体以及酶联抗体结合。由于这些产品受到知识产权的限制，我们不 能自行生产。另外，这些产品的特异性与敏感性有待进一步提高w。
技术实现思路
为了生产我们拥有自主知识产权的产品，本专利技术提供一种新的CA125ELISA检测试剂盒。 该检测试剂盒能够直接从人血清或血浆中快速地检测出CA125的浓度，故能广泛应用于临床 快速诊断。该专利技术专利的主要技术特征是采用先进的生物科学技术、大量的计算分析和反复的科学 试验等手段从CA125外显子1中选择特定的氨基酸序列(序列I: Asp Met Arg His Pro Gly Ser ArgLysPhe AsnAlaThrGlu Arg)，合成多肽作为抗原，制备CA125单克隆抗体；从CA125 外显子3中选择特定的氨基酸序列(序列n: Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp Leu Gly Leu Asp ArgGluLeuTyr)，合成多肽作为抗原，制备兔抗CA125多克隆抗体。具体实施例方式首先，按照上述氨基酸序列1合成多肽，与载体蛋白(如KLH)结合，制备CA125单克 隆抗体，将其包被于反应板的微孔内，制成固相抗体。其次，按照上述氨基酸序列2合成多肽，与载体蛋白(如KLH)结合，并与抗原佐剂混 合，通过免疫兔子制备兔抗CA125多克隆抗体，再与辣根过氧化物酶(HRP)结合制得酶标 抗体。检测时，样品可同时与固相CA125单克隆抗体以及酶标兔抗CA125多克隆抗体结合， 其余则按常规方法进行。底物加入后，显色程度与样品中CA125浓度成正相关。与标准CA125 浓度相对照，即可知样品中CA125的浓度。健康妇女的CA125正常值低于35单位/毫升。该检测试剂盒应置于2-8°C冰箱中保存，使用时应用450nm波长的光波测定其吸光度来 进行检测。1. Yurkovetsky Z民Linkov FY, E Malehom D， Lokshin AE. Multiple biomarker panels for early detection of ovarian cancer. Future Oncol. 2006 Dec; 2(6): 733-741.2. Munkarah入Chatteijee ]V^ Tainsky MA. Update on ovarian cancer screening. Curr Opin Obstet Gynecol. 2007 Feb; 19(1): 22-26.3. Bast RC Jr, Badgwell D， Lu Z, etc. New tumor markers: Cal25 and beyond. Int J Gynecol Cancer 2005 Nov陽Dec; 15 suppl 3: 274-281.4. Chatteijee SK, Zetter BR. Cancer biomarkers: knowing the present and predicting the fiiture. Future Oncology. 2005. 1(1): 37-50.氨基酸序列表 序列I<110> 丁恩雨，丁荣新，桑恩典<120>癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备<160> 1<210> 1<211> 15<212>PRT<213>从CA125外显子1中选择的特定序列<220><400〉 1Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Ala Thr Glu Arg 15 10 15序列II<110> 丁恩雨，丁荣新，桑恩典<120>癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备<160> 1<210> 1<211> 16<212>PRT<213>从CA125外显子3中选择的特定序列<220><400> 1Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp Leu Gly Leu Asp Arg Glu Leu Tyr 15 10 1权利要求1.一种应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)的癌抗原125(CA125)检测试剂盒，其主要技术特征系采用完整CA125分子中的抗原决定簇所制备的单克隆抗体来包被反应板的微孔，用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的兔抗CA125多克隆抗体作为抗体-酶结合溶液。被检样品能够同时与上述两种抗体起反应。用以制备该检测试剂盒中所用CA125单克隆抗体的抗原决定簇，系CA125分子外显子(exon)1中的特定多肽。其氨基酸序列(序列1)为Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe AsnAla Thr Glu Arg。2. 用以制备该检测试剂盒中所用兔抗CA125多克隆抗体的抗原决定簇，系CA125分子 外显子(exon)3中的特定多肽。其氨基酸序列(序列2 )为Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp Leu Gly Leu Asp Arg Glu Leu Tyr。全文摘要一种癌抗原125(CA125)酶联免疫吸附检测试剂盒，能够直接从人血清中快速地检测出CA125的浓度。其主要技术特征是选择CA125外显子1中的特定氨基酸序列制备单克隆抗体；选择CA125外显子3中的特定氨基酸序列制备兔抗CA125多克隆抗体。检测时，样品可同时与固相单抗以及酶标兔抗CA125多克隆抗体相结合。血清中CA125水平升高多见于卵巢癌，亦见于子宫内膜炎及其它癌症。该检测试剂盒可用于卵巢癌等检测以及治疗预后好坏的判定。文档编号G01N33/577GK101315367SQ20071010729公开日2008年12月3日 申请日期2007年5月28日 优先权日2007年5月28日专利技术者丁恩雨, 丁荣新, 桑恩典 申请人:丁恩雨;丁荣新;桑恩典本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种应用酶联免疫吸附分析法（ＥＬＩＳＡ）的癌抗原１２５（ＣＡ１２５）检测试剂盒，其主要技术特征系采用完整ＣＡ１２５分子中的抗原决定簇所制备的单克隆抗体来包被反应板的微孔，用辣根过氧化物酶（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）标记的兔抗ＣＡ１２５多克隆抗体作为抗体－酶结合溶液。被检样品能够同时与上述两种抗体起反应。用以制备该检测试剂盒中所用ＣＡ１２５单克隆抗体的抗原决定簇，系ＣＡ１２５分子外显子（ｅｘｏｎ）１中的特定多肽。其氨基酸序列（序列１）为Ａｓｐ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ａｒｇ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁恩雨，丁荣新，桑恩典，
申请(专利权)人：丁恩雨，丁荣新，桑恩典，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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