【技术实现步骤摘要】
一种一锅法滚环扩增技术检测单核苷酸多态性的方法
本专利技术涉及一种一锅法滚环扩增技术检测单核苷酸多态性的方法，属于分子生物学和核酸化学领域。
技术介绍
滚环扩增(RCA)是1998年建立起来的一种恒温核酸扩增方法，它的提出模拟自然界微生物环状DNA的滚环复制过程，并且研究人员发现这种DNA复制方式存在于很多病毒中。随着连接酶介导的基因检测技术和挂锁探针局部DNA检测技术的出现,滚环扩增技术的发展速度迅速提高。RCA技术是在恒温下以环状单链DNA为模板进行线性单链扩增，产生上千个环状DNA拷贝衔接而成的DNA单链，不需要特定的热循环仪，并具有灵敏度高、特异性好、操作简便的特点。然而，RCA技术也存在一些不足：①反应步骤较多，耗时较长。②选择性较低，兼容性差。③难于实现原位检测。因此，建立简单、快速、适合原位检测的RCA方法具有十分重要的理论意义和实用价值。一锅法（one-pot）反应在纳米粒子制备，有机合成领域已被广泛应用，在生化分析等很多领域也应用越来越多，比如，Storhoff等基于Au纳米颗粒探针的选择性比色多核苷酸检测，实现了在四个单碱基缺陷存在下靶标的一锅...
【技术保护点】
1.一种一锅法滚环扩增技术检测单核苷酸多态性的方法，其特征在于具体步骤为：（1）一锅法滚环扩增：将1μL浓度为1μmol/L的锁式探针、1μL浓度为10 mmol/L的四种脱氧核糖核苷三磷酸的混合物即dNTPs和8μL的焦碳酸二乙酯处理的蒸馏水即DEPC水混合组成10 μL A预混液，再将2μL 10×Taq DNA 连接酶 Buffer、2μL10× Bst DNA 聚合酶Buffer、1μL浓度为10 nmol/L的待测靶序列、0.5μL 40U/μL的Taq DNA连接酶、0.5μL 8U/μL的Bst DNA聚合酶以及4μL DEPC水混合组成10 μL B预混液，...
【技术特征摘要】
1.一种一锅法滚环扩增技术检测单核苷酸多态性的方法，其特征在于具体步骤为：（1）一锅法滚环扩增：将1μL浓度为1μmol/L的锁式探针、1μL浓度为10mmol/L的四种脱氧核糖核苷三磷酸的混合物即dNTPs和8μL的焦碳酸二乙酯处理的蒸馏水即DEPC水混合组成10μLA预混液，再将2μL10×TaqDNA连接酶Buffer、2μL10×BstDNA聚合酶Buffer、1μL浓度为10nmol/L的待测靶序列、0.5μL40U/μL的TaqDNA连接酶、0.5μL8U/μL的BstDNA聚合酶以及4μLDEPC水混合组成10μLB预混液，然后将A预混液和B预混液混合均匀，用移液枪吹打均匀，以上操作均在冰面上进行，然后至于55℃下反应6小时，于80℃下20分钟使酶失活以终止扩增反应；（2）单核苷酸多态性分型测定：取步骤（1）中的扩增产物5μL、1μL6×LoadingBuffer和0.6μL100×SyberGreenⅠ工作液，室温放置5分钟，灌胶后点样到质量浓度为1%的琼脂糖凝胶中，跑胶时用1×TBE缓冲液，即0.04mol/LTris-硼酸，0.001mol/L...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱文远，周琳莹，郝杰，梁晓琳，潘宏程，郭自宽，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：广西,45
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