一种CYP2C19基因检测方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种CYP2C19基因检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物；CYP2C19基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。能够有效地对患者展开CYP2C19基因多态性筛查，为患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。本发明专利技术还涉及一种CYP2C19基因检测试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种CYP2C19基因检测方法及检测试剂盒
本专利技术涉及生物医学领域，尤其是涉及一种CYP2C19基因检测方法及检测试剂盒。
技术介绍
细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)又称为S-美芬妥英羟化酶，是细胞色素P450的一个成员，其活性存在明显的个体差异，影响许多临床药物的代谢，对不同个体的药物治疗作用和不良反应及药物的毒性产生重要影响。1993年Wrighton等证明S-美芬妥英在人肝脏中由CYP2C19编码表达的羟化酶氧化为4’-羟基美芬妥英，根据美芬妥英羟化代谢的水平可以判断CYP2C19酶的活性。1994年Morais发现CYP2C19上的2个多态性:ml(*2rs4244285)、m2(*3rs4986893)可以造成S-美芬妥英弱代谢，这两个多态性可以解释>99％东方人的CYP2C19遗传多态性的弱代谢者的等位基因。CYP2C19*2是第5外显子第681位的碱基发生G—A变异，使得转录时在第5外显子的初始段丢失了40bp^34682bp)的片段，从而改变了mRNA的阅读框架，提前产生一个终止密码，形成一个234个氨基酸的蛋白质缺失血红素结合区，从而丧失了催化活性。CYP2C19*3是第4外显子第636位处的碱基发生G—A变异，使212位原来编码色氨酸的密码子变为终止密码子，从而产生仅由211个氨基酸组成的没有活性的蛋白质。2006年SimSC等发现一个新的SNP:-806C>T(*17rsl2248560)，可以造成S-美芬妥英极快速代谢，在亚洲人群中约5％的人群携带。研究发现，CYP2C19参与许多药物代谢，如S-美芬妥英、苯巴比妥、丙戊酸(抗癫痫药)，奥美拉唑、雷贝拉唑(质子泵抑制剂)，氯胍、氯二胍(抗疟疾)，甲苯磺丁脲(降血糖药)，丙米嗪、氯丙米嗪、阿米替林(抗抑郁药)，地西泮、去甲地西泮(镇静、安眠药)等。CYP2C19酶活性存在多态性，因此不同的个体对药物代谢能力不同，产生的药物毒副作用及治疗效果不同。氯吡格雷是目前世界范围内使用最广泛的噻吩吡啶类抗血小板药，用于急性冠买综合征、冠脉支架术和冠心病的治疗。氯吡格雷属于前体药，其经过CYP2C19酶代谢后的活性产物才能发挥抗血小板的疗效。FDA和美国心脏病学会建议，对于CYP2C19慢代谢型患者需要增加氯吡格雷剂量或者考虑改变治疗方案。奥美拉唑是目前应用最为广泛的质子泵抑制剂之一。伏立康唑是一种光谱的三唑类抗真菌药。这两种药都是由CYP2C19酶主要代谢的，CYP2C19快代谢者，会出现疗效不佳；CYP2C19弱代谢者，会出现严重不良反应。检测CYP2C19基因型，可以更精确地调整药物剂量。丙戊酸钠和丙戊酸镁是目前治疗全身性或部分性癫痫的首选药，但丙戊酸的代谢产物具有一定的肝毒性，对肝脏有损害。CYP2C19快代谢者相对于慢代谢者更容易出现肝毒性等不良反应。对于快代谢型者患者建议慎用丙戊酸。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种CYP2C19基因的检测方法和检测试剂盒。本专利技术的目的采用以下技术方案实现：一种CYP2C19基因检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物；CYP2C19基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。进一步地，所述CYP2C19基因片段包括Cyp2c19＊2片段、Cyp2c19＊3片段、Cyp2c19＊4片段、Cyp2c19＊5片段及Cyp2c19＊17片段。进一步地，所述用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述Cyp2c19＊2片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：1，反向引物为SEQIDNos：2；用于扩增所述Cyp2c19＊3片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：3，反向引物为SEQIDNos：4；用于扩增所述Cyp2c19＊4片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：5，反向引物为SEQIDNos：6；用于扩增所述Cyp2c19＊5片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：7，反向引物为SEQIDNos：8；用于扩增所述Cyp2c19＊17片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：9，反向引物为SEQIDNos：10。进一步地，所述用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物包括：用于所述Cyp2c19＊2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：11；用于所述Cyp2c19＊3片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：12；用于所述Cyp2c19＊4片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：13；用于所述Cyp2c19＊5片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：14；用于所述Cyp2c19＊17片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：15。进一步地，所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。进一步地，Taq酶激活时温度为95℃。进一步地，Taq酶激活时间为15分钟。进一步地，DNA变性时温度为95℃。进一步地，DNA变性时间为15秒。一种CYP2C19基因检测试剂盒，包括：用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物，特异性引物包括SEQIDNos：1、SEQIDNos：2、SEQIDNos：3、SEQIDNos：4、SEQIDNos：5、SEQIDNos：6、SEQIDNos：7、SEQIDNos：8、SEQIDNos：9、SEQIDNos：10；用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物，单碱基延伸引物包括SEQIDNos：11、SEQIDNos：12、SEQIDNos：13、SEQIDNos：14、SEQIDNos：15。相比现有技术，本专利技术通过设计特异性引物扩增CYP2C19基因片段，设计单碱基延伸引物使CYP2C19基因片段的单碱基延伸，再通过核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对患者展开CYP2C19基因多态性筛查，为患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。附图说明图1为本专利技术一种CYP2C19基因检测方法的流程图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“及/或”包括一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CYP2C19基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物；CYP2C19基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。

【技术特征摘要】
1.一种CYP2C19基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物；CYP2C19基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。2.根据权利要求1所述的CYP2C19基因检测方法，其特征在于：所述CYP2C19基因片段包括Cyp2c19＊2片段、Cyp2c19＊3片段、Cyp2c19＊4片段、Cyp2c19＊5片段及Cyp2c19＊17片段。3.根据权利要求2所述的CYP2C19基因检测方法，其特征在于：所述用于扩增CYP2C19基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述Cyp2c19＊2片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：1，反向引物为SEQIDNos：2；用于扩增所述Cyp2c19＊3片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：3，反向引物为SEQIDNos：4；用于扩增所述Cyp2c19＊4片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：5，反向引物为SEQIDNos：6；用于扩增所述Cyp2c19＊5片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：7，反向引物为SEQIDNos：8；用于扩增所述Cyp2c19＊17片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：9，反向引物为SEQIDNos：10。4.根据权利要求2所述的CYP2C19基因检测方法，其特征在于：所述用于CYP2C19基因片段的单碱基延伸引物包括：用于所述Cyp2c19＊2片段的单碱基延伸引物，序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文忠，田军龙，胡军，张为，陈苏平，
申请(专利权)人：为康苏州基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32