用于检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物和探针及检测方法技术

本发明专利技术提供检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物、探针和检测方法。本发明专利技术所述的RPA引物和探针是基于单核细胞增生李斯特菌actA基因设计，引物序列见SEQ ID No.1、2和3。所述的探针长度为45‑52bp，在探针中间距5’端30bp的位置处采用dSpacer修饰，dSpacer分子两侧的胸腺嘧啶分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1取代，并且在探针的3’末端也需要通过阻塞基团C3Spacer修饰，其序列见SEQ ID No.4。相对于现有技术，本发明专利技术的检测方法可以在15min内完成检测，可快速检测样品中是否存在单核细胞增生李斯特菌，并且所建立的RPA方法特异性强，灵敏度高，不需要特殊仪器，在疾病监测、临床诊断和食品安全监测等领域具有重要的应用价值。

RPA primers and probes for detection of monocytic Lester bacteria and detection methods

The invention provides a RPA primer, probe and detection method for detecting Lester cell of monocytic hyperplasia. The RPA primers and probes of the present invention are based on the actA gene design of the monocytic Lester fungus, and the primer sequences are shown in SEQ ID ID No.1, 2 and 3. The length of the probe is 45 52bp, and dSpacer modification is used at the center of the probe at the position of 5 'end 30bp. The thymine on both sides of the dSpacer molecule is replaced by the fluorescent group FAM and the quenching group BHQ1 respectively, and the 3' end of the probe is also modified by the C3Spacer of the blocking group. The sequence of the probe is SEQ ID ID No.4. Compared with the existing technology, the detection method of the present invention can be detected in 15min, and it can quickly detect the presence of Lester bacteria in the sample, and the established RPA method has strong specificity, high sensitivity and no special instruments, and is heavy in the fields of disease monitoring, clinical diagnosis and food safety monitoring. The value of application.

【技术实现步骤摘要】
用于检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物和探针及检测方法
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体涉及用于检测单核细胞增生李斯特菌的引物和探针及检测方法。
技术介绍
单核细胞增生李斯特菌是最重要的食源性致病菌之一，是一种人畜共患病的病原菌。感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，开发单核细胞增生李斯特菌的快速检测方法具有重要的意义。目前单核细胞增生李斯特菌的检测方法传统培养方法，免疫学方法以及PCR方法。虽然传统培养方法对实验设备的要求不高，可操作性较强，但是检测的周期较长，检测效率低，无法满足当前检测工作中对样品进行快速检测的要求。而免疫学检测方法存在非特异反应，虽然灵敏度高，但缺乏特异性。PCR检测方法的不足之处在于扩增反应受多种因素的影响，需要投入比较昂贵的仪器，易出现非特异性扩增，检测时间相对较长。这些方法均不利于现场快速检测。重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinasepolymeraseamplification,RPA)本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物，其特征在于，所述的RPA引物是基于单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计的，其引物序列如下：上游引物SEQ ID No.1:5’‑CTTAGATTCTAGCATGCAGTCAGCGGATG‑3’下游引物SEQ ID No.2：5’‑CGTCGATTTTATCACGTACCCATTTACCCG‑3’。

【技术特征摘要】
1.用于检测单核细胞增生李斯特菌的RPA引物，其特征在于，所述的RPA引物是基于单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计的，其引物序列如下：上游引物SEQIDNo.1:5’-CTTAGATTCTAGCATGCAGTCAGCGGATG-3’下游引物SEQIDNo.2：5’-CGTCGATTTTATCACGTACCCATTTACCCG-3’。2.一种用于检测单核细胞增生李斯特菌RPA引物，其特征在于，采用权利要求1所述的引物中的上游引物、下游引物中的至少一种，或选自权利要求1所述的引物中的上游引物、下游引物序列或上游引物、下游引物序列的互补链序列中单条序列同源性为50％及以上的碱基序列。3.用于检测单核细胞增生李斯特菌的RPA探针，其特征在于，所述探针是基于单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计的，所述探针的长度为45-50bp，且在探针中间距5’端30bp的位置处采用dSpacer修饰，dSpacer分子两侧的胸腺嘧啶分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1取代，并且在探针的3’末端也需要通过阻塞基团C3Spacer修饰，其序列如下：探针SEQIDNo.3:5’-CTTAGATTCTAGCATGCAGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小青，陈晶，黄建飞，陈国培，严琼英，肖承荣，李日升，蔡琳，兰全学，杨国武，
申请(专利权)人：深圳市计量质量检测研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44