SRY基因引物对与探针的组合和SRY多位点检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于对人类进行性别鉴定的探针与引物对组合和包含该组合的试剂盒。一种SRY基因引物对和探针的组合，包括一个探针，一对SRY基因引物，所述探针为TaqMan探针，所述一对SRY基因引物为一对基因序列反向的引物；一种实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒：包括4组如权利要求1或2所述的SRY基因引物对和探针的组合，其中所述第一引物对中的正向引物的序列为：5'CGAACTCTGGCACCTTTCAATT3'第一引物对中的反向引物的序列为：3'CGCTTAACATAGCAGAAGCATATGA5'第一探针的序列为：FAM-TGTCGCACTCTCCTTGTTTTTGACAATGC-TAMRASRY基因引物对和探针组合能够检测人类性别，而实时荧光SRY多位点基因检测盒：涵盖了Y染色体SRY基因中的4个靶基因，灵敏度高,特异强，推荐方法中结果符合率100％。

【技术实现步骤摘要】
SRY基因引物对与探针的组合和SRY多位点检测试剂盒
本专利技术涉及一种基因引物与探针的组合以及包含该组合的试剂盒。更确切的说，是一种SRY基因引物与探针的组合和实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒。
技术介绍
目前检测SRY基因一般采用PCR技术,其观察结果主要为凝胶电泳成像法，耗时，耗力且易污染,由于其检测的高灵敏度极易产生假阳性。然而针对极少数情况会采用多重PCR技术,但DNA浓度低时同管多条引物对相互抑制，易造成灵敏度下降，有时会产生假阴性。以上两者，均会使测试结果造成错误，正确率难以保证。目前常规采用的方法：例如绒毛样本检测及羊膜腔穿刺取羊水细胞等，都属于创伤性的,对母亲及胎儿均有一定的风险。
技术实现思路
目的在于现代遗传咨询中要求做产前性别判断的越来越多，故在不刺激孕妇子宫的情况下，就可以做染色体分析的无创伤性性别检测，还可以通过检测男性个体不同时期SRY基因表达的量来监测个体盛衰的变化,日益引起广大医学家的关注。专利技术具体内容如下：一种SRY基因引物对和探针的组合，包括一个探针，一对SRY基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对SRY基因引物为一对基因序列反向的引物；其中所述的一种关于SRY基因引物对和探针的组合，其特征在于：所述SRY基因序列号位于YP11.3，只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1KB编码一个204氨基酸的蛋白质；一种实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒：包括4组如权利要求1或2所述的SRY基因引物对和探针的组合，其特征在于：所述第一引物对中的正向引物的序列为：5'CGAACTCTGGCACCTTTCAATT3'第一引物对中的反向引物的序列为：3'CGCTTAACATAGCAGAAGCATATGA5'第一探针的序列为：FAM-TGTCGCACTCTCCTTGTTTTTGACAATGC-TAMRA所述第二引物对中的正向引物的序列为：5'TCTTCCAGGAGGCACAGAAATT3'第二引物对中的反向引物的核苷酸序列为：3'TTCCGACGAGGTCGATACTTATAAT5'第二探针的序列为：FAM-CAGGCCATGCACAGAGAGAAATACCCG-TAMRA所述第三引物对中的正向引物的序列为：5'GCCGAAGAATTGCAGTTTGC3'第三引物对中的反向引物的序列为：3'AGTTGCACTTCGCTGCAGAGT5'第三探针的序列为：FAM-CCCGCAGATCCCGCTTCGG-TAMRA所述第四引物对中的正向引物的序列为：5'ACGAAAGCCACACACTCAAGAA3'第四引物对中的反向引物的序列为：3'GTGAGCTGGCTGCGTTGAT5'第四探针的序列为：FAM-AGCACCAGCTAGGCCACTTACCGCC-TAMRA【附图说明】图1为第一引物对和探针PCR荧光扩增原理图图2为第二引物对和探针PCR荧光扩增原理图图3为第三引物对和探针PCR荧光扩增原理图图4为第四引物对和探针PCR荧光扩增原理图图5为核酸扩增荧光检测结果分析阴性图图6为核酸扩增荧光检测结果分析阳性图【具体实施例】以下为本专利技术的实施例：一种SRY基因引物对和探针的组合，包括一个探针，一对SRY基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对SRY基因引物为一对基因序列反向的引物；其中所述的一种关于SRY基因引物对和探针的组合，其特征在于：所述SRY基因序列号位于YP11.3，只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1KB编码一个204氨基酸的蛋白质；一种实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒：包括4组如权利要求1或2所述的SRY基因引物对和探针的组合，其特征在于：所述第一引物对中的正向引物的序列为：5'CGAACTCTGGCACCTTTCAATT3'第一引物对中的反向引物的序列为：3'CGCTTAACATAGCAGAAGCATATGA5'第一探针的序列为：FAM-TGTCGCACTCTCCTTGTTTTTGACAATGC-TAMRA所述第二引物对中的正向引物的序列为：5'TCTTCCAGGAGGCACAGAAATT3'第二引物对中的反向引物的核苷酸序列为：3'TTCCGACGAGGTCGATACTTATAAT5'第二探针的序列为：FAM-CAGGCCATGCACAGAGAGAAATACCCG-TAMRA所述第三引物对中的正向引物的序列为：5'GCCGAAGAATTGCAGTTTGC3'第三引物对中的反向引物的序列为：3'AGTTGCACTTCGCTGCAGAGT5'第三探针的序列为：FAM-CCCGCAGATCCCGCTTCGG-TAMRA所述第四引物对中的正向引物的序列为：5'ACGAAAGCCACACACTCAAGAA3'第四引物对中的反向引物的序列为：3'GTGAGCTGGCTGCGTTGAT5'第四探针的序列为：FAM-AGCACCAGCTAGGCCACTTACCGCC-TAMRA使用该实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒，实验证明：从300名男女外周血浆中分离DNA，用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescencequantitativepolymerasechainreaction，FQ-PCR)的方法检测其中的Y性别决定区(sex-determiningregionY，SRY)基因，结果男的98名，98名SRY基因阳性，平均为(1520.00±80.00)拷贝/毫升，女性42名SRY基因阳性(41名为孕早期怀男胎的，其中一位女性未孕但近期有输血史)，其平均浓度为(56.00±40.00)拷贝/毫升，余者均为阴性，结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕42天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因，随孕周的增加，母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加，但有输血史或器官移植的女性不适宜检测SRY基因。样本数据显示如下：专利技术的检测原理在于，从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA，若能扩增出SRY基因片段，即可判断为男性，否则为女性。该法可对一滴血、一根毛发、多年的尸块、胎儿、有争议的性别进行性别鉴定。广泛应用于法医鉴定、无创孕期胎儿性别鉴定，及对有性别争议的运动员体检等。实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。以下为检测原理：Ct值的定义：在荧光定量PCR技术中，C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数荧光域值(threshold)的设定PCR反应的前10个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-10个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold＝10′SDcycle6-10Ct值与起始模板的关系研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系即起始拷贝数越多，Ct值越小。只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。荧光定量PCR所使用的荧光化学现将其原理简述如下：TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种SRY基因引物对和探针的组合，包括一个探针，一对SRY基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对SRY基因引物为一对基因序列反向的引物。

【技术特征摘要】
1.一种实时荧光SRY多位点基因检测试剂盒：包括4组SRY基因引物对和探针的组合，每组组合包含一个探针，一对SRY基因引物；所述探针为TaqMan探针，所述一对SRY基因引物为一对基因序列反向的引物；所述SRY基因序列号位于YP11.3，只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1KB编码一个204氨基酸的蛋白质，其特征在于：所述第一引物对中的正向引物的序列为：5'CGAACTCTGGCACCTTTCAATT3'第一引物对中的反向引物的序列为：3'CGCTTAACATAGCAGAAGCATATGA5'第一探针的序列为：FAM-TGTCGCACTCTCCTTGTTTTTGACAATGC-TAMRA所述第二引物对中的正向引物的序列为：5'TCTTCCAGGAGGCACAGAAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡松，
申请(专利权)人：胡松，
类型：发明
国别省市：广东;44