用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用技术

本发明专利技术涉及微生物耐药性技术领域，具体公开一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用。本发明专利技术通过设计与喹诺酮抗性相关的emr耐药通路和mdt耐药通路的16个基因的引物，并且以16S rDNA为内参基因，使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增，并且通过数据处理，细菌的氟喹诺酮相关基因的相对表达量和细菌之间的差异表达倍数可以直观地反应出来，相较于药敏试验的粗略判定耐药性。该方法更加科学和严谨。

Detection kit, detection method and application of fluoroquinolone antibiotic resistance for Escherichia coli

The invention relates to the technical field of microbial resistance, and specifically discloses a detection kit, detection method and application for the drug resistance of fluoroquinolone like antibiotics in Escherichia coli. The present invention is designed by designing primers for 16 genes of the EMR resistance pathway related to quinolone resistance and the MDT resistance pathway, and using 16S rDNA as the internal reference gene, and using high throughput fluorescence quantitative PCR instrument for amplification, and the relative expression of fluoroquinolone related genes and differential expression between bacteria by data processing. The multiple can be intuitively reacted, and the drug resistance is roughly judged compared with the drug sensitivity test. The method is more scientific and rigorous.

【技术实现步骤摘要】
用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用
本专利技术涉及微生物耐药性
，尤其涉及一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用。
技术介绍
临床检验医学中最常用的方法是K-B纸片法，目前，美国Nationalcommitteeforclinicallaboratorystandards(NcCLS)纸片扩散法敏感实验分委会，所推荐的标准方法，是以Bauer-Kirby创立的K-B法为基础，作为目前公认的标准的实验方法。将药敏纸片(含有定量抗菌药物纸片)贴在己经接种待检菌的琼脂平板标明的特定部位，原理为药物借其分子扩散力向周围琼脂中扩散，随药源距离加大，琼脂中药物浓度也逐渐减少的梯度浓度。药敏片药源周围一定区域内琼脂药物浓度恰恰高于抑制待检菌时，该区域内，细菌不能生长，形成一个透明的抑菌圈。抑菌圈的大小则可反应待检菌对测定药物的敏感程度。但是传统的K-B药敏法测定效率低，误差大。
技术实现思路
针对现有药敏法测定效率低，误差大等问题，本专利技术提供一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒。进一步地，本专利技术还提供一种用于大肠杆菌氟本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性，包括以16S rDNA为内参基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；emrB的下游引物：AGAAC...

【技术特征摘要】
1.一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性，包括以16SrDNA为内参基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；emrB的下游引物：AGAACGTAGCGACTGATAAAATGCT；emrA的上游引物：CTGCTCCTCCTTCTCACCTTG；emrA的下游引物：TTATCGGCCCAGACTTTCGT；emrE的上游引物：ATCTTGGTGGTGCAATACTTG；emrE的下游引物：GGACAATACCGACTCCTGAC；emrK的上游引物：ATGCCACTATCGCACTCAA；emrK的下游引物：TGGTATGCTCCAGCGTTTC；emrR的上游引物：TTTACCGCCGCAGCATAAC；emrR的下游引物：ACACCGCCCTGTTCCATCT；emrY的上游引物：TTAGTGCTCGGTGTTGGTG；emrY的下游引物：GAGTAACTGCGGCATAAGG；mdtK的上游引物：ACACCAGATTGCCCTGAACTT；mdtK的下游引物：TTGCCATACAGACACCCACC；mdtA的上游引物：CCTAACGGGCGTGACTTCA；mdtA的下游引物：TTCACCTGTTTCAAGGGTCAAA；mdtE的上游引物：CGTCGGCGCACTCGTT；mdtE的下游引物：TCCAGACGTTGTACGGTAACCA；mdtG的上游引物：TGGCACAAAATATCTGGCAGTT；mdtG的下游引物：TTGTGTGGCGATAAGAGCATTAG；mdtH的上游引物：CTGCCGTTAAATGGATGTATGC；mdtH的下游引物：ACTCCAGCGGGCGATAGG；mdtD的上游引物：GTCTGAAACTGTTCCGCACTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：张铁，王春光，张石磊，翟向和，史万玉，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北,13