筛选诱导的多能干细胞的方法技术

本发明专利技术涉及筛选诱导的多能干细胞的方法。本发明专利技术提供使用认定为特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系的lincRNA或mRNA的标志物筛选展现分化抗性的iPS细胞的方法，和这样的标志物。

Screening of induced pluripotent stem cells

The invention relates to a method for screening induced pluripotent stem cells. The present invention provides a method for screening the differentiating resistant iPS cells, and such markers, by using a marker that is identified as a specific expression of a differentiated iPS cell line that shows differentiation resistance.

【技术实现步骤摘要】
筛选诱导的多能干细胞的方法本申请是申请日为2012年7月25日，申请号为201280036781.9，专利技术名称为“筛选诱导的多能干细胞的方法”的申请的分案申请。
本专利技术涉及筛选诱导的多能干细胞的方法。更特别地，本专利技术涉及在诱导的多能干细胞中通过确认大的基因间的非编码RNA(largeintergenicnon-codingRNA，lincRNA)或mRNA的表达筛选不展现分化抗性的诱导的多能干细胞的方法。
技术介绍
近年来，已相继建立了小鼠和人诱导的多能干细胞(iPS细胞)。Yamanaka等人通过将Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc基因导入小鼠来源的成纤维细胞以启用这些基因的强制表达诱导了iPS细胞(WO2007/069666A1和Takahashi,K.和Yamanaka,S.,Cell,126:663-676(2006))。接着，已经表明iPS细胞也能用以上因子的3个来制备(除了c-Myc基因)(Nakagawa，M.等人，Nat.Biotechnol.,26:101-106(2008))。而且，Yamanaka等人通过将以上4个基因导入人皮肤来源的成纤维细胞，成功建立了iPS细胞，与涉及小鼠的情况相似(WO2007/069666A1和Takahashi,K.等人，Cell,131:861-872(2007))。同时，Thomson等人的小组使用Nanog和Lin28代替Klf4和c-Myc制备了人iPS细胞(WO2008/118820A2和Yu,J.等人，Science，318:1917-1920(2007))。iPS细胞能解决生物伦理问题例如胚胎的破坏，能在维持其多能性的同时生长，使得iPS细胞被预期作为再生医学的移植材料。同时，即使当这样建立的iPS细胞被诱导以分化为特异性的组织细胞时，产生的细胞可能包括具有增殖能力的未分化(或未充分分化的)细胞(MiuraK.等人，NatBiotechnol.,27:743-745(2009))。在这种情况下，有移植后肿瘤发生的顾虑。因此，在这样建立的iPS细胞系中筛选不含有对分化诱导展现抗性的细胞的iPS细胞系的方法是希望得到的。专利技术概述技术问题本专利技术的目标是有效地选择适合临床应用的安全的iPS细胞(诱导的多能干细胞)。特别地，本专利技术的目标是提供筛选不展现分化抗性的细胞系的方法。问题解决方案为达到以上目标，本专利技术人使用展现分化抗性的iPS细胞系和不展现分化抗性的iPS细胞系研究了特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系的RNA或特异性表达于不展现分化抗性的iPS细胞系的RNA。因此确认，由特定基因组区编码的大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系或不展现分化抗性的iPS细胞系中。基于以上结果，本专利技术人已经发现，通过使用由特定基因组区编码的大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA作为指示物(标志物)可筛选展现分化抗性的iPS细胞，因此完成了本专利技术。特别地，本专利技术包括下列[1]到[9]。[1]一种筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的方法，包含如下步骤：(i)测定选自A组和/或B组的至少一个大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA的表达，(ii)选择其中选自A组的lincRNA或mRNA表达或其中选自B组的lincRNA或mRNA不表达的人诱导的多能干细胞系；A组由以下组成：(A1)lincRNA:chr1:852245-854050反向链，(A2)GPR177，(A3)VTCN1，(A4)lincRNA:chr1:142803013-142804254反向链，(A5)APOA2，(A6)WNT6，(A7)EPAS1，(A8)COL3A1，(A9)SLC40A1，(A10)S100P，(A11)HOPX，(A12)GUCY1A3，(A13)CDH10，(A14)HAPLN1，(A15)PITX1，(A16)HAND1，(A17)CGA，(A18)AQP1，(A19)DLX6，(A20)DLX5，(A21)SOX17，(A22)FLJ45983，(A23)PLCE1，(A24)H19，(A25)lincRNA:chr11:2016408-2017024反向链，(A26)lincRNA:chr11:2017517-2017651正向链，(A27)IGF2，(A28)P2RY6，(A29)SLN，(A30)NNMT，(A31)APOA1，(A32)ERP27，(A33)LUM，(A34)CCDC92，(A35)CDX2，(A36)FLJ41170，(A37)MEG3，(A38)lincRNA:chr14:101292469-101299626正向链，(A39)lincRNA:chr14:101295637-101302637正向链，(A40)lincRNA:chr14:101296681-101298460正向链，(A41)lincRNA:chr14:101298129-101300147正向链，(A42)lincRNA:chr14:101324825-101327247正向链，(A43)MEG8，(A44)lincRNA:chr14:101365673-101366049正向链，(A45)lincRNA:chr14:101396955-101397357正向链，(A46)lincRNA:chr14:101430757-101433381正向链，(A47)lincRNA:chr14:101434059-101436282正向链，(A48)lincRNA:chr14:101472355-101473369正向链，(A49)DIO3，(A50)MEIS2，(A51)PRTG，(A52)C17orf51，(A53)lincRNA:chr17:21434064-21435857反向链，(A54)lincRNA:chr17:21435180-21454915反向链，(A55)lincRNA:chr17:21435959-21436405反向链，(A56)CCR7，(A57)KRT23，(A58)GREB1L，(A59)GATA6，(A60)TTR，(A61)UCA1，(A62)FLRT3，(A63)lincRNA:chrX:73040495-73047819反向链，(A64)VGLL1，(A65)RPS4Y1，(A66)DDX3Y，以及(A67)RPS4Y2，B组由以下组成：(B1)DMRTB1，(B2)lincRNA:chr1:73430887-73446112反向链，(B3)lincRNA:chr1:73444697-73444997反向链，(B4)C4orf51，(B5)PCDHA1，(B6)lincRNA:chr6:95250854-95263604反向链，(B7)lincRNA:chr6:14280358-14285376反向链，(B8)lincRNA:chr6:14283301-14285685反向链，(B9)C7orf57，(B10)lincRNA:chr7:124873114-124899839反向链，(B11)lincRNA:chr8:12959951本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的方法，所述方法包含如下步骤：(i)测定C4orf51mRNA的表达，(ii)选择其中所述C4orf51mRNA不表达的人诱导的多能干细胞系。

【技术特征摘要】
2011.07.25 US 61/511,1561.一种筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的方法，所述方法包含如下步骤：(i)测定C4orf51mRNA的表达，(ii)选择其中所述C4orf51mRNA不表达的人诱导的多能干细胞系。2.一种筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的方法，所述方法包含如下步骤：(i)测定位于C4orf51基因中的LTR区或其附近的DNA-甲基化状态，以及(ii)选择其中LTR7区域处于DNA-甲基化状态的人诱导的多能干细胞系。3.含有具有C4orf51mRNA的核苷酸序列中的至少15个连续核苷酸的多核苷酸的试剂用于筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的用途，其中在所述不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系中，所述C4orf51mRNA不表达。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述试剂是通过固定与具有C4orf51mRNA的核苷酸序列中的至少15个连续核苷酸的多核苷酸互补的多核苷酸作为探针制备的微阵列。5.含有识别由C4orf51mRNA编码的蛋白的抗体的试剂用于筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的用途，其中在所述不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系中，所述C4orf51mRNA不表达。6.含有权利要求3到5的任一项中的所述试剂的试剂盒用于筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的用途，其中在所述不展现分化抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：山中伸弥，高桥和利，小柳三千代，大贯茉里，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP