【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于生产调节性t细胞的方法、通过所述方法获得的调节性t细胞、包含所述调节性t细胞的药物组合物等。本专利技术还涉及其中被引入表达构建体的ips细胞。
技术介绍
1、近年来，由于调节性t细胞(treg)的免疫反应抑制功能，使用调节性t细胞的细胞疗法(treg疗法)的研究和开发已经在世界范围内得到推广，以用于治疗各种免疫病症的目的。因此，调节性t细胞预期用于移植物抗宿主病(gvhd)和自身免疫性疾病的治疗中，以及用于炎性疾病和过敏性疾病的治疗和预防中。
2、调节性t细胞宜广泛地分为天然存在的调节性t细胞和诱导型调节性t细胞。天然存在的调节性t细胞被定义为在胸腺中天然产生的。诱导型调节性t细胞被定义为是在人工耐受诱导模型中响应于外部刺激而从外周幼稚t细胞分化诱导而来的。这些调节性t细胞根据细胞中表达的标志物类型而进一步细分。
3、当cd4+cd25+调节性t细胞(天然存在的调节性t细胞群之一)从活体中去除时，各种器官特异性自身免疫性疾病会自发发生。此时，移植cd4+cd25+调节性t细胞预防自身免疫性疾病的发生。因此，天然存在的cd4+cd25+调节性t细胞被认为在维持外周免疫自身耐受中发挥重要作用。从那时起，人们已经清楚cd4+cd25+调节性t细胞不仅可抑制自身免疫，还可抑制大多数免疫反应，诸如外来抗原引起的炎症、移植引起的排斥、感染免疫、过敏和肿瘤免疫。目前，转录因子foxp3已被明确为cd4+cd25+调节性t细胞的主调节因子。
4、npl 1公开了对于由foxp3突变引起的
5、ptl 2公开了mcl-1与foxp3一起表达对于提高treg的存活很重要。另外，ptl 3公开了一种基因工程化哺乳动物细胞，其包含编码促进分化为cd4+treg的谱系定向因子(lineage commitment factor)的转基因。ptl 4公开了一种用于通过培养三维细胞聚集体来制备来自干细胞或祖细胞的t细胞组合物的方法，所述三维细胞聚集体包含选定的表达notch配体的基质细胞群体和选定的干细胞或祖细胞群体。
6、然而，尽管期望调节性t细胞具有高生产效率(产率)的工业生产方法，但目前还没有用于高效生产调节性t细胞的方法的报道。
7、foxp3是treg的主调节因子。已知foxp3在treg中组成型地表达，并且在不具有抑制功能的常规t细胞(tconv，也称为效应t细胞或炎性t细胞)中未观察到组成型表达。因此，已经进行了关于在原代treg中维持foxp3表达以及在原代tconv或大量cd4单阳性(sp)t细胞中诱导foxp3表达的研究，并且已经报道了具有维持和诱导foxp3表达的活性的化合物、细胞因子和其组合。此类化合物、细胞因子和其组合包括作为cdk8/19抑制剂的as2863619(npl 2)、作为mtor抑制剂的雷帕霉素(rapamycin)(npl 3、npl 4、npl 5和npl 6)、tnfr2激动剂抗体(npl 5、npl 7和npl 8)、细胞因子tgf-β(npl 2和npl 6)等。
8、引用列表
9、专利文献
10、ptl 1:wo2019/040655
11、ptl 2:wo2014/180943
12、ptl 3:wo2021/092581
13、ptl 4:wo2017/075389
14、非专利文献
15、npl 1:cell stem cell 24,309-317,february 7,2019
16、npl 2:sci.immunol.4,eaaw2707(2019)
17、npl 3:nat.immunol.20(9),1208-1219(2019)
18、npl 4:clin.exp.immunol.197(1):52-63(2019)
19、npl 5:front.immunol.9:573,(2018)
20、npl 6:plos one.11(2),e0148474(2016)
21、npl 7:plos one.11(5),e0156311(2016)
22、npl 8:sci.signal.13,eaba9600(2020)
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的一个目的是提供一种用于生产调节性t细胞的方法，所述方法可高效地生产调节性t细胞。
3、问题的解决方案
4、作为实现上述目的的广泛研究的结果，本专利技术人发现可通过将包含(a)foxp3基因的cns1、cns2和cns3、(b)启动子和(c)foxp3的cdna的表达构建体引入能够分化为调节性t细胞的细胞(特别是ips细胞)中并且诱导所获得的细胞分化诱导为调节性t细胞来高效地生产调节性t细胞。
5、基于此发现进行进一步检查后完成了本专利技术。本专利技术提供了下述的一种用于生产调节性t细胞的方法、ips细胞、调节性t细胞、药物组合物等。
6、[1]一种用于生产调节性t细胞的方法，所述方法包括：
7、步骤(1)将其中被引入表达构建体的能够分化为调节性t细胞的细胞分化为调节性t细胞，所述表达构建体包含：
8、(a)foxp3基因的保守非编码序列(cns)1、cns2和cns3；
9、(b)启动子；以及
10、(c)编码foxp3的核酸。
11、[2]根据[1]所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞是多能干细胞、造血干细胞、造血内皮细胞、祖t细胞或中胚层祖细胞。
12、[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞是ips细胞。
13、[4]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中cns1、cns2和cns3位于所述启动子的上游。
14、[4a]根据[1]至[4]中任一项所述的方法，其中所述启动子是foxp3基因启动子。
15、[5]根据[1]至[4a]中任一项所述的方法，其中所述调节性t细胞是cd25+/foxp3+细胞。
16、[5a]根据[1]至[5]中任一项所述的方法，其中所述调节性t细胞是cd25+/foxp3+/cd4+细胞。
17、[6]根据[1]至[5a]中任一项所述的方法，其还包括：
18、步骤(2)将表达构建体引入能够分化为调节性t细胞的所述细胞中，所述表达构建体包含：
19、(a)foxp3基因的c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于生产调节性T细胞的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中能够分化为调节性T细胞的所述细胞是多能干细胞、造血干细胞、造血内皮细胞、祖T细胞或中胚层祖细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其中能够分化为调节性T细胞的所述细胞是iPS细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其中CNS1、CNS2和CNS3位于所述启动子的上游。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述调节性T细胞是CD25+/FOXP3+细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其还包括：
7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(1)中培养三维细胞聚集体，并且所述三维细胞聚集体包含能够分化为调节性T细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞，以及表达Notch配体的基质细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中能够分化为调节性T细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞是CD34+细胞。
9.根据权利要求7所述的方法，其中能够分化为调节性T细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞是造血内皮细胞。
10.根据权利
11.一种iPS细胞，其中被引入表达构建体，所述表达构建体包含：
12.根据权利要求11所述的iPS细胞，其中CNS1、CNS2和CNS3位于所述启动子的上游。
13.一种调节性T细胞，其通过根据权利要求1所述的方法获得。
14.一种药物组合物，其包含根据权利要求13所述的调节性T细胞。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其用于预防和/或治疗异常增强的免疫反应。
16.一种用于预防和/或治疗异常增强的免疫反应的方法，其包括向有需要的对象施用根据权利要求13所述的调节性T细胞。
17.根据权利要求13所述的调节性T细胞，其用于预防和/或治疗异常增强的免疫反应。
18.根据权利要求13所述的调节性T细胞在生产用于预防和/或治疗异常增强的免疫反应的药物中的用途。
19.根据权利要求1所述的方法，其还包括：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于生产调节性t细胞的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞是多能干细胞、造血干细胞、造血内皮细胞、祖t细胞或中胚层祖细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞是ips细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其中cns1、cns2和cns3位于所述启动子的上游。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述调节性t细胞是cd25+/foxp3+细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其还包括：
7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(1)中培养三维细胞聚集体，并且所述三维细胞聚集体包含能够分化为调节性t细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞，以及表达notch配体的基质细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞是cd34+细胞。
9.根据权利要求7所述的方法，其中能够分化为调节性t细胞的所述细胞或由其分化诱导的细胞是造血内皮细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：金子新，入口翔一，葛西义明，关谷敬子，松田淳志，佐藤崇之，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：
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