T载体及其构建方法与其前T载体技术

本发明专利技术公开了Ｔ载体及其构建方法与其前Ｔ载体。该Ｔ载体，是３′端均带有单个Ｔ突出末端的线性双链ＤＮＡ质粒，其中，在一个３′Ｔ突出末端的内侧连接有ａｔｔＬ１序列，在另一个３′Ｔ突出末端的内侧连接有ａｔｔＬ２序列。其制备方法包括以下步骤：１）制备含有ａｔｔＬ１－ａｔｔＬ２盒的前Ｔ载体；所述ａｔｔＬ１－ａｔｔＬ２盒包括ＡｈｄＩ盒和位于所述ＡｈｄＩ盒上游的ａｔｔＬ１序列以及位于所述ＡｈｄＩ盒下游的ａｔｔＬ２序列；所述ＡｈｄＩ盒包括间隔ＤＮＡ序列、紧密连接于所述间隔ＤＮＡ序列两侧的各一个ＡｈｄＩ酶切位点序列；２）用ＡｈｄＩ或ＡｈｄＩ的同裂酶酶切步骤１）中的前Ｔ载体，得到Ｔ载体。该Ｔ载体可作为入门载体。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域中的T载体及其构建方法与其前T载体。
技术介绍
λ噬菌体依靠一套位点特异性重组系统整合到细菌染色体中以及完成溶菌周期和溶源周期之间的转换(Bushman W，Thompson J F，Vargas L，et al.Control ofdirectionality in lambda site specific recombination.Science，1985，230906-911；Landy A.Dynamic，structural，and regulatory aspects of lambdasite-specific recombination.Ann Rev Biochem，1989，58913-949)。Invitrogen公司根据λ噬菌体的这种位点特异性重组系统开发了一套用于DNA体外重组的技术，称为Gateway克隆技术。Gateway技术是一种通用性的克隆方法，利用该技术可以快速和高效地将目的DNA序列同时构建到多种与Gateway技术兼容的载体系统，用于功能分析和蛋白表达(Hartley J L，Temple G F，Brasch 本文档来自技高网...

【技术保护点】
前Ｔ载体，是含有ａｔｔＬ１－ａｔｔＬ２盒的双链环状质粒；所述ａｔｔＬ１－ａｔｔＬ２盒包括ＡｈｄＩ盒和位于所述ＡｈｄＩ盒上游的ａｔｔＬ１序列以及位于所述ＡｈｄＩ盒下游的ａｔｔＬ２序列；所述ＡｈｄＩ盒包括间隔ＤＮＡ序列以及连接于所述间隔ＤＮＡ序列两侧的各一个ＡｈｄＩ酶切位点序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈其军，王学臣，陈珈，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]