乳腺特异性表达载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明专利技术提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：１）构建ＤＮＡ片段Ｍ↓［０］；Ｍ↓［０］自上游至下游依次为同源臂Ｔ↓［１］－Ｔ↓［６］；２）将Ｍ↓［０］插入载体，得到连续三次基因抓捕载体；３）通过三次同源重组，Ｔ↓［５］和Ｔ↓［６］抓获乳蛋白基因座３’调控区；Ｔ↓［３］和Ｔ↓［４］抓获完整的外源目的蛋白基因组序列；Ｔ↓［１］和Ｔ↓［２］抓获乳蛋白基因座５’调控区。本发明专利技术得到了乳蛋白－目的蛋白的杂合基因座，杂合基因座内包含乳蛋白上下游表达调控序列，中间是外源目的蛋白的基因组序列。本发明专利技术将为动物乳腺个体表达系统注入新的活力，有力促进乳腺生物反应器表达系统的推广运用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。技术背景目前常用的蛋白质表达系统主要有细菌、酵母、哺乳动物细胞、动物生物反应 器等，上述几种蛋白质表达系统各有其优缺点和适用范围，不同特性的蛋白质需要 选择相应的表达系统。动物乳腺生物反应器(mammary gland bioreactor)属于动物生物反应器中的 一个重要分支，又称动物个体乳腺表达系统，它属于转基因动物的范畴，其核心内 容是通过各种转基因技术，将乳腺组织特异性启动子驱动的外源基因，在动物乳腺 组织高效表达，在乳汁中生产目的产品。如何使外源基因高效、稳定、特异性表达 是制备乳腺生物反应器的一个主要难题，存在的主要障碍包括1)表达量低或不 表达，不具有商业开发价值；2)转基因的位点效应导致各转基因动物系表达水平 差异大，需要大量筛选工作，导致工作量和成本大幅上升；3)异位表达问题，即 在乳腺以外的部位渗漏表达外源蛋白，导致动物生理健康受损而难以获得生产系。克服以上难题的关键在于表达载体的构建。早期研究中大多将目标基因的cDNA 加上乳蛋白基因有限的上下游调控序列构建表达载体，也有少数使用目标基因的基 因组序列或微小基因，鉴于克隆载体的容量有限，这样本文档来自技高网...

【技术保护点】
乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：１）构建ＤＮＡ片段Ｍ↓［０］；Ｍ↓［０］自上游至下游依次为同源臂Ｔ↓［１］、同源臂Ｔ↓［２］、同源臂Ｔ↓［３］、同源臂Ｔ↓［４］、同源臂Ｔ↓［５］、同源臂Ｔ↓［６］；所述６个同源臂的长度均为４００－６００ｂｐ；同源臂Ｔ↓［５］和同源臂Ｔ↓［６］能通过与乳蛋白ＢＡＣ同源重组获得乳蛋白基因座３’调控区；同源臂Ｔ↓［３］和同源臂Ｔ↓［４］能通过与外源目的蛋白ＢＡＣ同源重组获得完整的外源目的蛋白基因组序列；同源臂Ｔ↓［１］和同源臂Ｔ↓［２］能通过与乳蛋白ＢＡＣ同源重组获得乳蛋白基因座５’调控区；２）将所述ＤＮＡ片段Ｍ↓［０］插入载体中，得到连续三次基因抓捕载...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红星，施庚寿，吴晓洁，周颜荣，黄培堂，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]