一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法技术

本发明专利技术提供一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，通过使用单一变量法调整测试增强光源的波长对甘草组织培养苗的生理影响，确定最适增强光源波长，并根据不同波长光源对甘草组培苗的影响，确定不同波长光源出组合，并通过保持增强光源不变反向确定基础培养基，同时引入组培苗的实际增殖系数作为筛选标准，更加适合商业工厂化生产。

A method for screening and promoting the proliferation of Glycyrrhiza uralensis callus

The present invention provides a method for screening and promote callus proliferation conditions, enhance the wavelength of physiological effects on seedlings of Glycyrrhiza tissue culture by using a single variable method to adjust the test, determine the optimum light wavelength, and according to the effect of different wavelength light source of the licorice group seedlings, determine the different wavelength light source combination, and keep the light medium by reverse invariant basis, the actual multiplication coefficient of plantlets as the screening criteria introduced at the same time, more suitable for commercial production.

【技术实现步骤摘要】
一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法
本专利技术属于甘草组织培养
，尤其涉及一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法。
技术介绍
甘草，（学名：GlycyrrhizauralensisFisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用，然而现有的甘草培养基中极少有通过增强光源调节甘草生长的技术。绿色植物是一部以光为动力的机器，许多生理生化过程受光的调节控制，形态构建受光作用的诱导。不同光质对植物的光形态建成、生理生化过程的调节已有报道。在日光灯光照条件下，辅助不同光质的光照，对甘草组培诱导生长进行调整，提高甘草组织培养的生产效率。铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
技术实现思路
基于现有技术存在上述问题，本专利技术提供一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，通过使用单一变量法调整测试增强光源的波长对甘草组织培养苗的生理影响，确定最适增强光源波长，并根据不同波长光源对甘草组培苗的影响，确定不同波长光源出组合，并通过保持增强光源不变反向确定基础培养基，同时引入组培苗的实际增殖系数作为筛选标准，更加适合商业工厂化生产。一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培增殖过程中添加增强光源的种类并确定光源波长，初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；步骤S30对照培养，以MS培养基为基础培养基，添加TDZ（噻苯隆）的浓度为0.06mg/L、NAA（萘乙酸）的浓度为2.5mg/L、活性炭的浓度为0.15mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素C的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草愈伤组织，并进行常规增殖组织培养作为对照组，在常规培养的基础上添加不同波段增强增强光源作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个对照组和实验组的褐化的数量，并计算褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养后的重量减去褐化的重量，再除以培养前的重量，计算出实际增殖系数，将实际增殖系数减去褐化率得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的增强光源波长；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的增强光源波长范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适波长范围；步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适波长范围搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基；步骤S90不同波长组合筛选，通过单一因数确定不同波长对甘草愈伤组织增殖的生理参数影响，调整最适合波长组合。优选地，所述的步骤S30中每个实验组或者对照组设置5-15个平行组。优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。优选地，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的描述。一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培增殖过程中添加增强光源的种类并确定光源波长，初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；步骤S30对照培养，以MS培养基为基础培养基，添加TDZ（噻苯隆）的浓度为0.06mg/L、NAA（萘乙酸）的浓度为2.5mg/L、活性炭的浓度为0.15mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素C的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草愈伤组织，并进行常规增殖组织培养作为对照组，在常规培养的基础上添加不同波段增强增强光源作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个对照组和实验组的褐化的数量，并计算褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养后的重量减去褐化的重量，再除以培养前的重量，计算出实际增殖系数，将实际增殖系数减去褐化率得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的增强光源波长；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的增强光源波长范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适波长范围；步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适波长范围搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基；步骤S90不同波长组合筛选，通过单一因数确定不同波长对甘草愈伤组织增殖的生理参数影响，调整最适合波长组合。作为优选实施例，所述的步骤S30中每个实验组或者对照组设置10个平行组。作为优选实施例，所述的步骤S70中重复的次数是3次。作为优选实施例，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。经过筛选确定如下增强光源具有比更高的实际增殖系数：使用白光、蓝光增强光源和绿光增强光源照射愈伤组织，绿色光源是波段为550nm-580nm的绿光，蓝色光源是波段为450nm-470nm的蓝光，光照时间为光照12小时/黑暗12小时。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培增殖过程中添加增强光源的种类并确定光源波长，初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm

【技术特征摘要】
1.一种筛选促进甘草愈伤组织增殖培养条件的方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培增殖过程中添加增强光源的种类并确定光源波长，初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；步骤S30对照培养，以MS培养基为基础培养基，添加TDZ（噻苯隆）的浓度为0.06mg/L、NAA（萘乙酸）的浓度为2.5mg/L、活性炭的浓度为0.15mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素C的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草愈伤组织，并进行常规增殖组织培养作为对照组，在常规培养的基础上添加不同波段增强增强光源作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个对照组和实验组的褐化的数量，并计算褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养后的重量减去褐化...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：陈志育，
类型：发明
国别省市：广东,44