一种甘草子叶诱导培养基筛选方法技术

本发明专利技术提供一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其通过单一变量法对甘草子叶进行诱导培养，分析统计诱导率、褐化率和生长量，在评价当中不仅仅以成功诱导作为唯一评价标准，结合生长量作为评价标注更加符合商业工厂化的生产。

Method for screening Glycyrrhiza uralensis cotyledon induction medium

The present invention provides a method for screening of licorice from Cotyledon Explants of medium, through the single variable method of licorice cotyledons were induced and cultured, statistical analysis of induction rate, browning rate and growth, not only in the evaluation to successfully induce as the only evaluation criteria, combined with the growth rate as the evaluation mark more in line with the commercial plant production.

【技术实现步骤摘要】
一种甘草子叶诱导培养基筛选方法
本专利技术属于甘草组织培养
，尤其涉及一种甘草子叶诱导培养基筛选方法。
技术介绍
甘草，（学名：GlycyrrhizauralensisFisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用，然而目前的培养基筛选方法都是以科研为目的的筛选方法，不能商业工厂化生产的需求。稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（RareEarth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
技术实现思路
基于现有技术中甘草的组培诱导培养基的筛选方法中偏向于科研，不适合商业工厂化生产的问题，本专利技术提供一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其通过单一变量法对甘草子叶进行诱导培养，分析统计诱导率、褐化率和生长量，在评价当中不仅仅以成功诱导作为唯一评价标准，结合生长量作为评价标注更加符合商业工厂化的生产。一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素的量并确定稀土元素初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素添加量的培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素浓度梯度中诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素浓度梯度；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。优选地，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置5-15个浓度梯度。优选地，所述的步骤S30中接种的甘草子叶的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10-20组平行实验组。优选地，所述的稀土元素是铈元素。优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。优选地，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的描述。一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素的量并确定稀土元素初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素添加量的培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素浓度梯度中诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素浓度梯度；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。作为优选实施例，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置10个浓度梯度。作为优选实施例，所述的步骤S30中接种的甘草子叶的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10组平行实验组。作为优选实施例，所述的步骤S70中重复的次数是2次。作为优选实施例，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。经过筛选出以MS培养基为基础培养基，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L，最适合甘草子叶工厂化诱导生产。以上所述实施例仅表达了本专利技术的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本专利技术专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。因此，本专利技术专利的保护范围应以所附权利要求为准。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素的量并确定稀土元素初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素添加量的培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素浓度梯度中诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素浓度梯度；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10‑S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。...

【技术特征摘要】
1.一种甘草子叶诱导培养基筛选方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素的量并确定稀土元素初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素添加量的培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素浓度梯度中诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素浓度梯度；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：陈志育，
类型：发明
国别省市：广东,44