本发明专利技术提供了一种大白菜游离小孢子诱导培养基，其配方含有KNO3、MgSO4∙7H2O、KH2PO4、Ca(NO3)2∙4H2O、Na2‑EDTA、FeSO4∙7H2O、MnSO4∙4H2O、AgNO3、H3BO3、ZnSO4∙7H2O、KI、Na2MoO4∙2H2O、CuSO4∙5H2O、CoCl2∙6H2O、L‑谷氨酰胺、维生素B1、维生素B6、烟酸、叶酸、生物素、肌醇、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、L‑谷胱甘肽、甲基亚硝基脲、蔗糖、植物凝胶、6‑BA、复酞核酸、水解蛋白、秋水仙碱、活性炭和植物硫化激动素PSK‑α。该培养基可以大大提高大白菜游离小孢子胚性愈伤组织的诱导效率，具有重要的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方，具体涉及一种可以大大提高大白菜游离小孢子诱导为胚性愈伤组织效率的培养基配方，属于蔬菜培育高新
技术介绍
大白菜（Brassicacampestrisssp.pekinensisLour.）属于十字花科芸薹属芸薹种大白菜亚种，是原产于我国的一种重要蔬菜作物。大白菜生态类型多样，分布广，产量高，耐贮运，供应期长，营养全面，食用方法多样，且种植简易、省工、成本低，在我国菜篮子中居不可替代的重要地位。我国大白菜的栽培面积和产量均为各种蔬菜作物之首，大白菜生产在蔬菜业中占有主导地位。由于历史、生态、生产和消费习惯差异的原因，我国北方地区是大白菜的主产区。随着人们生活质量的提高，对大白菜品质也提出了更高的要求，这就迫切需要育种工作者选育出更多的优质、抗病、丰产的优良品种。大白菜为异花授粉植物，具有显著的杂种优势，目前主要采用杂交育种方法进行大白菜新品种培育。传统杂交育种方法育成了一系列大白菜品种，为蔬菜生产做出了卓越的贡献。然而，大白菜杂交育种方法存在周期长、效率低等突出问题，育成一个稳定优良自交系一般需要6-8年，甚至更长时间，选育自交系非常费事、费工。近年来随着人工成本的增加，常规育种的不足在实际工作中日渐明显。因此，各国学者开始寻找育种的新途径和新方法。游离小孢子培养，是指直接从花蕾或花药中获得游离的、新鲜的小孢子群体进行培养，经由胚状体或愈伤组织的诱导，再生出完整的单倍体植株，再经过人工或自然加倍，成为正常可育、纯合的二倍体植株的技术。游离小孢子培养具有纯单倍性、单细胞性和培养细胞数量大等特点，因此越来越受到育种工作者的青睐。该技术用于育种可在1-2年内获得优良自交系和自交不亲和纯系，因此可大大缩短育种年限，从而提高育种效率。游离小孢子培养技术，目前比较成功的研究领域是禾本科和茄科，多种禾本科和茄科作物均验证成功出高效的诱导和分化体系。十字花科蔬菜的游离小孢子培养技术也进行了一系列研究，对大白菜小孢子胚胎发生的机制、影响因素做了大量的研究探索，并取得了许多重要的研究进展。我国的大白菜游离小孢子培养研究始于20世纪80年代后期。1988年，河南省农科院园艺研究所栗根义等在国内首次将大白菜游离小孢子诱导成胚和胚再生成功。随后，河南省农科院将该技术应用于DH纯系和亲本材料的培养，成功育成了豫白菜7号，成为国内外首个大白菜游离小孢子培养方法培育成的新品种。之后，又先后选育出14个通过省级以上审（鉴）定的不同类型大白菜新品种，其中豫白菜7号在1994-1997年间推广面积达到3.01万hm2。2002年北京市蔬菜研究中心利用小孢子培养技术育成的橘红心品种获得国家专利技术专利。虽然大白菜游离小孢子培养育种技术取得了一系列研究进步，也培育出豫白菜7号、豫新3号、豫园5号、橘红心等优良品种，但是大白菜游离小孢子培养技术并不完善，主要是大白菜游离小孢子诱导率不高，胚状体成苗率低等问题一直没有得到很好的解决。小孢子诱导率低将导致难以获得足够的选择群体，直接限制了大白菜游离小孢子培养技术在育种上的应用。培养基是游离小孢子培养的物质基础，直接关系到小孢子的生长与分化，培养基组分对小孢子的刺激和启动，是游离小孢子能否诱导成功的最关键的因素。培养基组分的合适配比，可显著影响小孢子诱导效率，一些有机和无机添加物，可以显著提高小孢子诱导效率。目前有研究发现，相对于禾本科和茄科作物，低离子浓度的基本培养基配方对十字花科小孢子诱导更加有利，氨基酸和活性炭可以显著提高大白菜游离小孢子的诱导能力。因此，继续优化组合基本培养基配比，发掘和试验针对于提高大白菜游离小孢子成胚诱导能力的有机无机添加物，是建立大白菜游离小孢子高效诱导培养体系的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以大大提高大白菜游离小孢子胚性愈伤组织的诱导效率、具有重要的应用价值的大白菜游离小孢子诱导培养基配方。本专利技术的目的是通过以下技术方案解决的：一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，AgNO37-9mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O8.5-9.5mg/L，KI0.4-0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.2-0.3mg/L，CuSO4∙5H2O0.02-0.03mg/L，CoCl2∙6H2O0.02-0.03mg/L，L-谷氨酰胺750-850mg/L，维生素B10.45-0.55mg/L，维生素B60.45-0.55mg/L，烟酸4.5-5.5mg/L，叶酸0.04-0.06mg/L，生物素0.04-0.06mg/L，肌醇90-110mg/L，甘氨酸3.5-4.5mg/L，脯氨酸17-23mg/L，丝氨酸70-90mg/L，L-谷胱甘肽27-33mg/L，甲基亚硝基脲1.2-1.8g/L，蔗糖120-140g/L，植物凝胶3.0-3.5g/L，6-BA0.2-0.3mg/L，复酞核酸0.15-0.25mg/L，水解蛋白0.5-0.7g/L，秋水仙碱0.06-0.08mg/L，活性炭0.04-0.06g/L，植物硫化激动素PSK-α30-40pmol/L，pH5.6-5.8。本专利技术相比现有技术有如下优点：本专利技术根据禾本科和茄科小孢子诱导培养基配方，针对于大白菜游离小孢子的孢子体发育特性，继续优化并组合基本培养基配比，低离子浓度基本培养基的组配，有利于大白菜游离小孢子的诱导；采用低含量的植物凝胶，使配制成的培养基半固体化，对大白菜游离小孢子的诱导更有利；发掘和试验针对于提高大白菜游离小孢子成胚诱导能力的有机添加物和无机添加物，水解蛋白、L-谷氨酰胺、叶酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、L-谷胱甘肽、甲基亚硝基脲、秋水仙碱、活性炭、植物硫化激动素PSK-α等物质的合适浓度的添加，均不同程度的提高了大白菜游离小孢子的诱导率；6-BA和复酞核酸的复配，显著提高了大白菜游离小孢子的诱导能力。本专利技术所提供的大白菜游离小孢子诱导培养基，是在现有研究发现基础之上进一步创造性改良的成果，是经过大量单因子、多因子试验所筛选的最优组合，我们进行了大量的实验研究亦得出本专利技术的组分配比是最优的。采用本专利技术所提供的培养基可以大大提高游离大白菜小孢子胚性愈伤组织的诱导效率，因此具有较高的产业推广价值。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明。一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，AgNO37-9mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO3 56‑64mg/L，MgSO4∙7H2O 60‑65mg/L，KH2PO4 65‑70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O 200‑250mg/L，Na2‑EDTA 11‑14mg/L，FeSO4∙7H2O 12‑15mg/L，MnSO4∙4H2O 23‑27mg/L，AgNO3 7‑9mg/L，H3BO3 8.0‑8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5‑9.5mg/L，KI 0.4‑0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.2‑0.3mg/L，CuSO4∙5H2O 0.02‑0.03mg/L，CoCl2∙6H2O 0.02‑0.03mg/L，L‑谷氨酰胺 750‑850mg/L，维生素B1 0.45‑0.55mg/L，维生素B6 0.45‑0.55mg/L，烟酸 4.5‑5.5mg/L，叶酸 0.04‑0.06mg/L，生物素 0.04‑0.06mg/L，肌醇 90‑110mg/L，甘氨酸 3.5‑4.5mg/L，脯氨酸 17‑23mg/L，丝氨酸 70‑90mg/L，L‑谷胱甘肽 27‑33mg/L，甲基亚硝基脲 1.2‑1.8g/L，蔗糖 120‑140g/L，植物凝胶 3.0‑3.5g/L，6‑BA 0.2‑0.3mg/L，复酞核酸 0.15‑0.25mg/L，水解蛋白 0.5‑0.7g/L，秋水仙碱 0.06‑0.08mg/L，活性炭 0.04‑0.06g/L，植物硫化激动素PSK‑α 30‑40pmol/L，pH 5.6‑5.8。...
【技术特征摘要】
1.一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，AgNO37-9mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O8.5-9.5mg/L，KI0.4-0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.2-0.3mg/L，CuSO4∙5H2O0.02-0.03mg/L，CoCl2∙6H2O0.02-0.03mg/L，L-谷氨酰胺750-850mg\...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋兆霞，谭兴江，张瑞明，
申请(专利权)人：宋兆霞，
类型：发明
国别省市：山东;37
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