本发明专利技术公开了一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒及其使用方法，包括干粉A、B、C及溶液D，干粉A(20ug):10％-30％CD3单抗、10％-20％干扰素-伽马(IFN-γ)、60％-80％白细胞介素-2(IL-2)；干粉B(40ug)：5％-10％CD3单抗、20％-30％CD28单抗、60％-75％白细胞介素-2；干粉C(120ug)：100％白细胞介素-2；溶液D(6ml):20％人血白蛋白、0.72％氯化钠、79.28％注射用水。本发明专利技术利用这个CIK细胞诱导试剂盒能够配合淋巴细胞培养基在最短的时间内诱导扩增出5*109以上的淋巴细胞，其中CIK细胞(CD3+CD56+)比例达到25％以上。为体外大规模扩增CIK细胞提供便利的方法，为相关研究及临床实验提供便利。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种诱导CIK细胞的试剂盒及其使用方法，尤其是一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
当前免疫细胞因其高效的肿瘤细胞杀伤活性，其无任何副作用的优势已经逐渐被医学界认可。CIK(Cytokineinducedkiller)细胞作为免疫细胞中最具代表性的一种细胞，其诱导和扩增的方法各不相同，且诱导出的细胞数量和质量也参差不齐。没有一套简单、高效、稳定的诱导试剂盒。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一套简单、高效、稳定的配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒及其使用方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒，包括20ug干粉A、40ug干粉B、120ug干粉C及6ml溶液D，按质量百分比，各种组分的成分如下：干粉A:10％-30％CD3单抗、10％-20％干扰素-伽马、60％-80％白细胞介素-2；干粉B：5％-10％CD3单抗、20％-30％CD28单抗、60％-75％白细胞介素-2；干粉C：100％白细胞介素-2；溶液D:20％人血白蛋白、0.72％氯化钠、79.28％注射用水。优选，按质量百分比，干粉A：20％CD3单抗、20％干扰素-伽马、60％白细胞介素-2；干粉B：20％CD3单抗、20％CD28单抗、60％白细胞介素-2。上述的配合淋巴细胞培养基快速诱导出大量CIK细胞的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：(1)使用10毫升淋巴细胞培养基充分溶解试剂盒中的干粉A，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在两个T-175培养瓶中分别加入4.5毫升过滤后的溶液，在CO2培养箱中孵育2小时；(2)分离获得1*108的外周血单个核细胞，重悬于200毫升淋巴细胞培养基中，将重悬的细胞平均接种至2个细胞培养瓶中；(4)将细胞培养液混合均匀后放置在二氧化碳培养箱中培养；(4)培养的第三天，使用试剂盒中的溶液D充分溶解干粉C，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液；在两个培养瓶中分别加入100微升的干粉C溶解液，并将剩余的溶解液保存在2-8℃的环境下；(5)培养的第5天，在两个细胞培养瓶中分别加入100ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入100微升干粉C溶解液后继续培养；(6)培养的第7天，将全部的细胞培养液及细胞转移到1.8-2升容积的细胞培养袋中，并补加200毫升的新鲜淋巴细胞培养基；(7)取4.5毫升的淋巴细胞培养基溶解干粉B，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在两个培养袋中分别加入2毫升过滤后的溶液；(8)培养的第9天，在两个细胞培养袋中分别加入400ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入400微升干粉C溶解液后继续培养；(9)培养的第11天，在两个细胞培养袋中分别加入800ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入800微升干粉C溶解液后继续培养；(10)培养的第14天，回收两个培养袋中全部的3200毫升的细胞培养液；离心并回收细胞，计算细胞总数并通过流式细胞检测方法确定其中CIK细胞的比例。所述步骤(10)中，所述CIK细胞的比例是指CD3+CD56+的比例。本专利技术的有益效果是：能够稳定的获得一定数量和质量的CIK细胞，细胞总量在5*109以上的淋巴细胞，其中CIK细胞(CD3+CD56+)比例达到25％以上。附图说明图1是本专利技术试剂盒诱导的CIK细胞；图2是CIK细胞流式检测结果。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明：本专利技术的配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒，包括20ug干粉A、40ug干粉B、120ug干粉C及6ml溶液D，按质量百分比，各种组分的成分如下：干粉A:10％-30％CD3单抗、10％-20％干扰素-伽马、60％-80％白细胞介素-2；干粉B：5％-10％CD3单抗、20％-30％CD28单抗、60％-75％白细胞介素-2；干粉C：100％白细胞介素-2；溶液D:20％人血白蛋白、0.72％氯化钠、79.28％注射用水。优选，按质量百分比，干粉A：20％CD3单抗、20％干扰素-伽马、60％白细胞介素-2；干粉B：20％CD3单抗、20％CD28单抗、60％白细胞介素-2。上述的配合淋巴细胞培养基快速诱导出大量CIK细胞的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：(1)使用10毫升淋巴细胞培养基充分溶解试剂盒中的干粉A，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在两个T-175培养瓶中分别加入4.5毫升过滤后的溶液，在CO2培养箱中孵育2小时；(2)分离获得1*108的外周血单个核细胞，重悬于200毫升淋巴细胞培养基中，将重悬的细胞平均接种至2个细胞培养瓶中；(5)将细胞培养液混合均匀后放置在二氧化碳培养箱中培养；(4)培养的第三天，使用试剂盒中的溶液D充分溶解干粉C，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液；在两个培养瓶中分别加入100微升的干粉C溶解液，并将剩余的溶解液保存在2-8℃的环境下；(5)培养的第5天，在两个细胞培养瓶中分别加入100ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入100微升干粉C溶解液后继续培养；(6)培养的第7天，将全部的细胞培养液及细胞转移到1.8-2升容积的细胞培养袋中，并补加200毫升的新鲜淋巴细胞培养基；(7)取4.5毫升的淋巴细胞培养基溶解干粉B，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在两个培养袋中分别加入2毫升过滤后的溶液；(8)培养的第9天，在两个细胞培养袋中分别加入400ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入400微升干粉C溶解液后继续培养；(9)培养的第11天，在两个细胞培养袋中分别加入800ml新鲜的淋巴细胞培养基，并加入800微升干粉C溶解液后继续培养；(10)培养的第14天，回收两个培养袋中全部的3200毫升的细胞培养液；离心并回收细胞，计算细胞总数并通过流式细胞检测方法确定其中CIK细胞的比例。所述步骤(10)中，所述CIK细胞的比例是指CD3+CD56+的比例。实施例1如图1、2所示，本专利技术的CIK细胞的试剂盒，包括20ug干粉A、40ug干粉B、120ug干粉C及6ml溶液D，按质量百分比，各种组分的成分如下：干粉A：20％CD3单抗、20％干扰素-伽马(Interferon-γ，IFN-γ)、60％白细胞介素-2(Interleukin，IL-2)；本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒，其特征在于，包括20ug干粉A、40ug干粉B、120ug干粉C及6ml溶液D，按质量百分比，各种组分的成分如下：干粉A:10％‑30％CD3单抗、10％‑20％干扰素‑伽马、60％‑80％白细胞介素‑2；干粉B：5％‑10％CD3单抗、20％‑30％CD28单抗、60％‑75％白细胞介素‑2；干粉C：100％白细胞介素‑2；溶液D:20％人血白蛋白、0.72％氯化钠、79.28％注射用水。
【技术特征摘要】
1.一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞的试剂盒，其特征
在于，包括20ug干粉A、40ug干粉B、120ug干粉C及6ml溶液D，按质
量百分比，各种组分的成分如下：
干粉A:10％-30％CD3单抗、10％-20％干扰素-伽马、60％-80％白细胞介
素-2；
干粉B：5％-10％CD3单抗、20％-30％CD28单抗、60％-75％白细胞介素-2；
干粉C：100％白细胞介素-2；
溶液D:20％人血白蛋白、0.72％氯化钠、79.28％注射用水。
2.根据权利要求1所述的配合淋巴细胞培养基快速诱导大量CIK细胞
的试剂盒，其特征在于，按质量百分比，干粉A：20％CD3单抗、20％干扰
素-伽马、60％白细胞介素-2；干粉B：20％CD3单抗、20％CD28单抗、60％
白细胞介素-2。
3.如权利要求1中所述的配合淋巴细胞培养基快速诱导出大量CIK细
胞的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)使用10毫升淋巴细胞培养基充分溶解试剂盒中的干粉A，并利用
0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在两个T-175培养瓶中分别加入4.5毫升
过滤后的溶液，在CO2培养箱中孵育2小时；
(2)分离获得1*108的外周血单个核细胞，重悬于200毫升淋巴细胞培
养基中，将重悬的细胞平均接种至2个细胞培养瓶中；
(3)将细胞培养液混合均匀后放置在二氧...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩洪起，鲁振宇，刘俊江，张冰晶，秦臻，
申请(专利权)人：天津普瑞赛尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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