一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基制造技术

本发明专利技术提供了一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，该培养基的配比由一定比例的KNO3、NH4NO3、KH2PO4、MgSO4•7H2O、CaCl2、MnSO4•7H2O、ZnSO4•7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4•2H2O、CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O、FeSO4•7H2O、甘氨酸、丝氯酸、赖氨酸、烟酸、叶酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、肌醇、水解乳蛋白、酵母提取液、6BA、NAA、蔗糖、琼脂、活性炭组成，pH值为5.5~5.8。采用本发明专利技术的技术方案的绿苗分化培养基进行绿苗分化培养，大大提高了绿苗分化率，为野生稻优异种质利用打下坚实基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于稻种资源研究的植物组织培养
，尤其涉及一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基。
技术介绍
在有性杂交技术中，采用种间远缘杂交方法是有效的转移种间优异基因的有效方法，野栽远缘杂交育种和种质创新技术是促进野生稻优异基因利用的有效途径，而杂种后代花药培养获得单倍体植株，经染色体加倍后获得稳定重组基因型优良株系，是最有效的野生稻优异基因利用的途径之一。在水稻野栽(栽野)远缘杂交过程中或者在野生稻优异种质创新、育种过程常常出现杂种F2代及以后的子代(F2～Fn)中严重分离的现象，这种现象严重阻碍野生稻优异种质利用。我们在近10年来先后作了1000余个普通野生稻与栽培稻品种杂交组合，部分株系不经过花药培养的杂交组合后代材料已经种植超过F18代，还在继续分离，很难获得稳定的优良材料。采用野栽杂种后代(F2～4)的材料进行花药培养获取单倍体愈伤组织进而分化出单倍体绿苗在H1代就获得稳定单株，H2代就形成稳定株系，能够有效地克服野栽杂种后代疯狂分离技术难题，并极大地缩短野栽杂交育种周期，提升野生稻优异种质(基因)利用效果。我们曾经做过1400多个野栽杂交组合，先后历时10余年，仍然有部分杂交组合后代品系继续分离，无法获得自交稳定品系，从而严重影响野生稻优异种质(优异基因)的应用。同时，经过调查，许多育种家都一致反映，利用野生稻优异种质作杂交育种周期很长，杂种后代出现严重分离是造成周期长的主要原因。所以，大家都希望能采取新技术克服这一难题，提供容易稳定的具有优异基因的中间材料，进而促进野生稻优异种质的利用。然而，杂种花药培养技术的成功应用必须拥有花药愈伤组织高效诱导培养基和愈伤组织绿苗分化高效培养基。但是，目前普通野生稻与栽培稻杂交后代愈伤组织绿苗分化率很低，不足10％，最高也低于15％，所以严重影响了花药培养的效率。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术公开了一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，提高了愈伤组织绿苗分化率，使野栽杂种单倍体育种和种质创新成为现实，并极大地提高野生稻优异种质(基因)的利用效率。对此，本专利技术采用的技术方案为：一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，包括的组分及其浓度为：其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。作为本专利技术的进一步改进，所述的野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其包括的组分及其浓度为：作为本专利技术的进一步改进，所述铁盐采用铁盐母液，所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到。采用此技术方案，我们在野生稻优异种质创新研究及野栽杂交育种过程中先后做了100多次试验，每次花药愈伤组织200多块，共试验21800多块愈伤组织，平均愈伤组织绿苗分化率34.68％，株系最高分化率91.67％。作为本专利技术的进一步改进，所述野栽杂交后代花药愈伤组织在绿苗分化前在进行愈伤组织培养时所采用的诱导培养基包括的组分及其浓度为：其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。采用此技术方案，在野生稻优异种质创新研究及野栽杂交育种过程中先后做了200多次试验，每次小花2800多枚，共试验57 6000多枚小花，平均愈伤组织诱导率20％以上，株系最高诱导率33％以上；而且其诱导出来的愈伤组织质量较好，再采用此技术方案的绿苗分化培养基进行绿苗分化培养，大大提高了绿苗分化率。本专利技术的有益效果为：采用本专利技术的技术方案，使野栽杂交后代花药愈伤组织的平均绿苗分化率达到34.68％，远高于对照培养基的绿苗分化率6.42～13.82％，株系最高分化率91.67％，解决了野栽杂种后代花药愈伤组织白化苗分化率高、绿苗分化率低的难题。在野栽杂交后代单倍体技术中从根本上解决普通野生稻与栽培稻的野栽杂交后代疯狂分离的技术难题，为野生稻优异种质利用打下坚实基础。有效地提升了我国普通野生稻与栽培稻杂交后代花药培养技术水平，基本上解决野栽杂种后代疯狂分离，严重影响野生稻优异基因在水稻(杂交水稻、超级稻、优质常规稻)利用的技术难题。具体实施方式下面对本专利技术的较优的实施例作进一步的详细说明。实施例1一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 1880mg/l，NH4NO3 1430mg/l，KH2PO4 515mg/l，MgSO4·7H2O 310mg/l，CaCl2141mg/l，MnSO4·7H2O 20.3mg/l，ZnSO4·7H2O 3.3mg/l，H3BO35.2mg/l，KI0.7mg/l，NaMoO4·2H2O 0.15mg/l，CuSO4·5H2O 0.015mg/l，CoCl2·6H2O 0.015mg/l，铁盐9ml/L，甘氨酸1.9mg/l，丝氯酸1.9mg/l，赖氨酸1.9mg/l，烟酸0.45mg/l，叶酸0.45mg/l，盐酸硫胺素0.3mg/l，盐酸吡哆素0.4mg/l，肌醇100mg/l，水解乳蛋白130mg/l，酵母提取液180mg/l，6BA 4.0mg/l，NAA 2.0mg/l，蔗糖14900mg/l，琼脂9000mg/l，活性炭1.5mg/l，pH值为5.5。其中，所述铁盐采用铁盐母液，所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到。实施例2一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 1900mg/l，NH4NO3 1450mg/l，KH2PO4 525mg/l，MgSO4·7H2O 320mg/l，CaCl2151mg/l，MnSO4·7H2O 22.3mg/l，ZnSO4·7H2O 4.3mg/l，H3BO3 6.2mg/l，KI 0.8mg/l，NaMoO4·2H2O 0.25mg/l，CuSO4·5H2O 0.025mg/l，CoCl2·6H2O 0.025mg/l，铁盐10ml/L，甘氨酸2.0mg/l，丝氯酸2.0mg/l，赖氨酸2.0mg/l，烟酸0.5mg/l，叶酸0.5mg/l，盐酸硫胺素0.4mg/l，盐酸吡哆素0.5mg/l，肌醇100mg/l，水解乳蛋白150mg/l，酵母提取液200mg/l，6BA 4.0mg/l，NAA 2.0mg/l，蔗糖15000mg/l，琼脂9000mg/l，活性炭2.0mg/l，pH值为5.6。其中，所述铁盐采用铁盐母液，所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到。实施例3一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 1920mg/l，NH4NO3 1470mg/l，KH2PO4 535mg/l，MgSO4·7H2O 330mg/l，CaCl2161mg/l，MnSO4·7H2O 24.3mg/l，ZnSO4·7H2O 5.3mg/l，H3BO3 7.2mg/l，KI 0.9mg/l，NaMoO4·2H2O 0.35mg/l，CuSO4·5H2O本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其特征在于：包括的组分及其浓度为：KNO3               1850~1950mg/l，NH4NO3             1410~1490mg/l，KH2PO4             500~550 mg/l，MgSO4•7H2O         300~350 mg/l，CaCl2              130~170 mg/l，MnSO4•7H2O         19.5~25.5 mg/l，ZnSO4•7H2O         3.0~6.0 mg/l，H3BO3              4.5~8.5 mg/l，KI                0.6~1.0 mg/l，NaMoO4•2H2O        0.10~0.40 mg/l，CuSO4•5H2O         0.010~0.040 mg/l，CoCl2•6H2O         0.010~0.040 mg/l，铁盐              9~11ml/L，甘氨酸            2.0±0.15 mg/l，丝氯酸            2.0±0.15 mg/l，赖氨酸            2.0±0.15 mg/l，烟酸              0.5±0.05 mg/l，叶酸              0.5±0.05 mg/l，盐酸硫胺素        0.4±0.15 mg/l，盐酸吡哆素        0.5±0.15 mg/l，肌醇              100±2.5 mg/l，水解乳蛋白        150±20 mg/l，酵母提取液        200±20 mg/l，6BA               4.0±0.5 mg/l，NAA               2.0 ±0.5 mg/l，蔗糖              15000±100 mg/l，琼脂              9000±100 mg/l，活性炭            2.0±0.5 mg/l，pH                5.5~5.8；其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。...

【技术特征摘要】
1.一种野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其特征在于：包括的组分及其浓度为：KNO3 1850~1950mg/l，NH4NO3 1410~1490mg/l，KH2PO4 500~550 mg/l，MgSO4•7H2O 300~350 mg/l，CaCl2 130~170 mg/l，MnSO4•7H2O 19.5~25.5 mg/l，ZnSO4•7H2O 3.0~6.0 mg/l，H3BO3 4.5~8.5 mg/l，KI 0.6~1.0 mg/l，NaMoO4•2H2O 0.10~0.40 mg/l，CuSO4•5H2O 0.010~0.040 mg/l，CoCl2•6H2O 0.010~0.040 mg/l，铁盐 9~11ml/L，甘氨酸 2.0±0.15 mg/l，丝氯酸 2.0±0.15 mg/l，赖氨酸 2.0±0.15 mg/l，烟酸 0.5±0.05 mg/l，叶酸 0.5±0.05 mg/l，盐酸硫胺素 0.4±0.15 mg/l，盐酸吡哆素 0.5±0.15 mg/l，肌醇 100±2.5 mg/l，水解乳蛋白 150±20 mg/l，酵母提取液 200±20 mg/l，6BA 4.0±0.5 mg/l，NAA 2.0 ±0.5 mg/l，蔗糖 15000±100 mg/l，琼脂 9000±100 mg/l，活性炭 2.0±0.5 mg/l，pH 5.5~5.8；其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。2.根据权利要求1所述的野栽杂交后代花药愈伤组织绿苗分化培养基，其特征在于，其包括的组分及其浓度为：KNO3 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁云涛，陈成斌，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院水稻研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45