一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法技术

本发明专利技术公开了一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法，包括以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行体细胞胚诱导、增殖培养产生次生胚，或者进行胚性愈伤的诱导、分化不定芽等技术环节。本发明专利技术首次建立了闽楠未成熟合子胚的体细胞胚及胚性愈伤的诱导、培养技术体系，明确取材最佳时间，筛选出优良体细胞胚、胚性愈伤诱导培养基、增殖培养基、体细胞胚萌发培养基、分化培养基，有效提高了体细胞胚诱导率、增殖率、体细胞胚萌发率、分化系数等，有助于缓解闽楠种苗供应严重不足的现状。此外，本发明专利技术胚性愈伤的成功诱导，为进行体细胞融合、种质资源保存、基因转化及优良杂交组合扩繁提供了技术保证。

A method for somatic embryo and adventitious bud induction of Phoebe

The invention discloses a phoebebournei somatic embryo and adventitious bud induction method, including bournei immature seeds as materials, the stripping of immature embryos immature seeds were used as explants for somatic embryo induction and secondary embryo formation or proliferation culture, embryogenic callus induction, adventitious bud differentiation and other technical aspects. The present invention is established for the first time, inducing culture system of phoebebournei immature zygotic embryos of somatic embryos and embryogenic callus were clear, the best time to select excellent somatic embryos and embryogenic callus induction medium, proliferation medium, somatic embryo germination medium, differentiation culture medium, effectively improve the body somatic embryo induction rate and proliferation rate, somatic embryo germination rate, differentiation coefficient, help to alleviate the situation of insufficient supply of Phoebe bournei seedlings. In addition, the invention of embryogenic callus was induced by somatic cell fusion, germplasm preservation, genetic transformation and multiplication of superior cross combinations provides technical assurance.

【技术实现步骤摘要】
一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法
本专利技术属于植物生物
，具体涉及一种闽楠体细胞胚诱导、培养方法。
技术介绍
闽楠(Phoebebournei(Hemsl.)Yang)，中国特有，是国家二级珍稀渐危种(傅立国，金鉴明.中国植物红皮书稀有濒危植物，科学出版社，1991)。闽楠为樟科常绿大乔木，分布于中亚热带常绿阔叶林地带的江西、福建、浙江南部、广东、广西等地(中国科学院中国植物志编辑委员会中国植物志:第31卷，北京:科学出版社，1982.)。闽楠木材芳香耐久，淡黄色，材质致密坚韧，不易反翘开裂，易加工，削面光滑，纹理美观，为上等建筑、家具、造船及工艺雕刻等良好木材，同时，其树体高大，四季翠绿，是园林绿化优良树种。可见，闽楠具有极高的经济价值、社会价值、生态价值、观赏价值。但闽楠现存资源极少，保护和扩繁优异种质资源成为该种研究的热点与重点。闽楠自然繁殖主要通过种子繁殖，但种子大小年现象突出，且种子在野外保存寿命短，发芽率极低，因此导致闽楠资源极少。近些年，大量的科研工作者开始研究闽楠种苗保育相关技术，但多集中在闽楠种子活力、休眠、萌发(李铁华、文仕知、彭险峰等，2003,2009本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法，其特征在于，体细胞胚诱导方法包括：以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行体细胞胚的诱导、体细胞胚增殖培养产生次生胚、体细胞胚萌发生根步骤；不定芽诱导方法包括：以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行胚性愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织分化诱导不定芽、不定芽生根步骤，其中，1)体细胞胚诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基：谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、2,4‑D 1.0‑2.0mg/L、6‑BA0.1‑1.0mg/L，暗培养；2)胚性愈伤组织诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基：谷氨酰胺500mg/L、水...

【技术特征摘要】
1.一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法，其特征在于，体细胞胚诱导方法包括：以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行体细胞胚的诱导、体细胞胚增殖培养产生次生胚、体细胞胚萌发生根步骤；不定芽诱导方法包括：以闽楠未成熟种子为材料，剥取未成熟种子幼胚为外植体，进行胚性愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织分化诱导不定芽、不定芽生根步骤，其中，1)体细胞胚诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基：谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、2,4-D1.0-2.0mg/L、6-BA0.1-1.0mg/L，暗培养；2)胚性愈伤组织诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基：谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、6-BA0.1-1.0mg/L，IBA1.5mg/L，暗培养；2)体细胞胚增殖培养基为含有下述成分的MS固体培养基：6-BA0.5-1.0mg/L、NAA0.1-1.0mg/L，暗培养；3)胚性愈伤组织分化培养基为含有下述成分的WPM固体培养基：TDZ0.5-1.5mg/L、IBA0.1-0.5mg/L，光培养。4)体细胞胚萌发生根培养基为含有下述成分的MS固体培养基：6-BA1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L，光培养。5)不定芽生根培养基为含有下述成分的WPM固体培养基：6-BA1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L，光培养。2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：童再康，楼雄珍，黄华宏，张俊红，林二培，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33