一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗的方法，取驼峰藤幼嫩茎段及叶片作为外植体，消毒后接种到过渡培养基中，外植体在过渡培养基中培养一段时间，取未污染的叶片外植体转接到愈伤组织诱导培养基中诱导培养，诱导增殖，用增殖后的愈伤组织诱导不定芽；取未污染茎段外植体转接到不定芽诱导培养基中诱导培养，再转接于不定芽增殖培养基中诱导增殖，将分化出的不定芽接种于生根壮苗培养基中培养。对不同外源植物生长调节剂种类、浓度、搭配比例进行优化选择，确定对驼峰藤愈伤组织、不定芽诱导及其再分化成苗的影响，筛选出诱导驼峰藤培养基的配方，该组培无性快繁，能保持母株优良遗传性状。这对于驼峰藤资源保存和药物及园林开发利用有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，属于稀有特有植物的组织培养技术，尤其涉及驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗方法。
技术介绍
驼峰藤（Merrillanthushainanensis）是萝藦科驼峰藤属国家二级保护植物，中国特有物种，具有观赏和药用价值。驼峰藤为木质藤本植物，叶对生、膜质、羽状脉，叶柄顶端具丛生小腺体，聚伞状花序，腋生，着花多朵；花梗细，长0.5～1.5cm，基部着生有卵形的小苞片；花蕾圆球状，花冠裂片的顶端向内粘合；花萼裂片、卵圆形，长2mm，宽1.5mm，具缘毛，花萼内有5个小腺体；花冠黄色，辐状或近辐状，有脉纹，5裂至中部，裂片广卵形、钝头，略向右覆盖；副花冠5裂，肉质，着生于合蕊冠上，裂片卵形，背部隆起，腹部贴生在雄蕊上；花药顶端的透明膜片近卵形，覆盖着柱头；花粉块长圆形，下垂，顶端通过花粉块柄与着粉腺连结；子房无毛，柱头平扁，基部盘状；蓇葖单生，纺锤状，长9～112cm，直径3.5～14cm，外果皮黄色，无毛；种子近圆形，顶端具白色种毛，种毛长3.5～4cm；花期3～4月，果期5～6月。驼峰藤生长于低海拔至中海拔山地林谷中，主要分布于高要、保亭、万宁和白沙等地，由本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗，其特征主要在于如下步骤：1）外植体培育：将驼峰藤种子经浸泡催芽处理后，播种于以椰糠：沙子=1:1为基质的苗床，小苗长至5.0 cm左右后移栽到大田，需要外植体材料时，用不锈钢剪刀剪取顶端新长出的茎段或叶片，作为外植体材料来源；2）外植体的获取及消毒：于晴天剪取长势良好的驼峰藤嫩茎和叶片，装入洁净塑料袋中，带回实验室，将茎剪成长3.0～4.0 cm左右的茎段即仅取茎尖顶端前4节、嫩叶剪成大小合适的方形组织块，置于洁净的烧杯中，用流水冲洗10～15 min，然后将茎段和叶片在洗洁精水中浸泡15 min左右，再用流水冲洗干净，冲洗后的茎段于超净工作台上，先...

【技术特征摘要】
1.一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗，其特征主要在于如下步骤：1）外植体培育：将驼峰藤种子经浸泡催芽处理后，播种于以椰糠：沙子=1:1为基质的苗床，小苗长至5.0cm左右后移栽到大田，需要外植体材料时，用不锈钢剪刀剪取顶端新长出的茎段或叶片，作为外植体材料来源；2）外植体的获取及消毒：于晴天剪取长势良好的驼峰藤嫩茎和叶片，装入洁净塑料袋中，带回实验室，将茎剪成长3.0～4.0cm左右的茎段即仅取茎尖顶端前4节、嫩叶剪成大小合适的方形组织块，置于洁净的烧杯中，用流水冲洗10～15min，然后将茎段和叶片在洗洁精水中浸泡15min左右，再用流水冲洗干净，冲洗后的茎段于超净工作台上，先用75%酒精浸泡20s，用无菌水漂洗3次，后用0.1%升汞浸泡10min，无菌水漂洗4次，每次1.5min；冲洗后的叶片于超净工作台上，先用75%酒精浸泡10s，然后用无菌水漂洗2次，再于0.1%升汞中浸泡8min，然后用无菌水漂洗4次，每次1.5min，然后将消毒后的嫩茎和叶片放入事先准备好的无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干材料上残留的水分，接种前将茎用无菌不锈钢刀片切成2.5～3.0cm长的带腋芽茎段，以腋芽着生点为基准，上端长约1.0cm，下端长1.5～2.0cm，下端切成楔形；将消毒后的叶片切割成1.0cm2左右，然后将切好的外植体接种到MS培养基中，培养15~20d后挑取无污染的外植体诱导愈伤组织或不定芽；3）叶片愈伤组织诱导：将过渡培养基中无污染的叶片外植体转接到愈伤组织诱导培养基中，接种时外植体横放，并轻压外植体材料使之与培养基充分接触；培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000lx，每天光照时间10～12h，一周后可见米白色或鲜绿色愈伤组织从切口处长出，待愈伤组织长到1.5cm左右宽时，转入愈伤组织增殖培养基中诱导增殖；4）叶片愈伤组织增殖：将疏松、嫩绿色、长势良好的愈伤组织转接入增殖培养基上，用镊子轻压愈伤组织使之与培养基充分接触，培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000lx，每天光照时间10～12h，培养30d后，可见愈伤组织大量长出；5）不定芽诱导：将过渡培养基中无污染的茎段外植体转接到不定芽诱导培养基中，接种时将茎段竖直插入培养基中，达0.5～1.0cm，使之与培养基充分接触；将愈伤组织接种到不定芽增殖培养基中，诱导不定芽，接种时轻压愈伤组织，使之与培养基充分接触，培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000lx，每天光照时间10～12h，15d后可产生两种不定芽，一种是长度大于1.0cm的单芽，另一种是带有愈伤组织，长度小于1.0cm的丛生芽，待不定芽长到1.5cm左右高时，即可转入增殖培养基中培养；6）不定芽增殖：将单芽苗切成1.5cm左右长的小段，接种于不定芽增殖培养基中诱导增殖；将簇生态的丛生芽切成1.0cm2左右，接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，接种时将茎段竖直插入培养基中，达0.5～1.0cm，使之与培养基充分接触；培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000lx，每天光照时间10～12h，培养15d后，可见不定芽大量长出；7）生根培养：选取高3.0~5.0cm的不定芽，接种于生根培养基上培养30d，即可得驼峰藤无菌苗；培养室温度24～26℃，湿度7...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯俊，王彩云，
申请(专利权)人：侯俊，
类型：发明
国别省市：贵州;52