地桃花组织培养与快速繁殖的方法技术

本发明专利技术属于植物培养技术领域，涉及一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法。包括地桃花的消毒、腋芽萌发不定芽的诱导、丛生芽的诱导、不定芽的增殖、再生植株的生根培养、炼苗移栽的步骤。本发明专利技术能够不受地桃花种子数量、萌发率和气候限制而快速地获得与母株相同性状的地桃花植株，利于产业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物培养
，涉及一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法。
技术介绍
地桃花(UrenalobataLinn.)，又名肖梵天花，为锦葵科(Malvaceae)梵天花属(Urena)直立亚灌木状草本，产长江以南各省区，喜生于干热的空旷地、草坡或疏林下。其茎皮富含坚韧的纤维，供纺织和搓绳索，常用为麻类的代用品；其花艳丽，有用作花卉的潜力；其根或全草可入药，名为地桃花，别称天下捶《生草药性备要》、八卦拦路虎《福建民间草药》、假桃花、粘油子《南宁市药物志》、八卦草《闽南民间草药》、迷马桩、野桃花《贵州草药》、梵尚花《广西药用植物图志》、羊带归、虱麻头《广西中药志》、寄马桩、红孩儿、石松毛、牛毛七《四川中药志》、半边月、拔脓膏、大梅花树、野茄子《广西民间常用中药手册》、油玲花、土杜仲、野桐乔、山棋菜《福建中草药》、刀伤药(南川《常用中草药手册》)、肖梵天花、三角风、桃子草《湖南药物志》、刺头婆《常用中草药彩色图谱》、千下锤(江西《草药手册》)、大迷马桩棵、土黄芪、巴巴叶、窝吼《云南中草药》、地马椿《贵州中草药名录》，全年均可采，洗净，鲜用或晒干。其性凉，味甘、辛，具祛风利湿、活血消肿、清热解毒之功效，主治感冒、风湿痹痛、痢疾、泄泻、淋证、带下、月经不调、跌打肿痛、喉痹、疮疖和毒蛇咬伤等症，是我国西南地区少数民族习用草药。已有研究表明，地桃花的化学成分主要为黄酮类、甾醇、鞣质、酚类、糖类、皂苷等。地桃花水提液在体外对大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、普通变形菌(Proteusvulgaris)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)均有一定的抑菌活性。目前，地桃花尚未被《中国药典》收录，但含有地桃花药材的花红片和花红颗粒为2010年版《中国药典》收录品种。在我国，目前地桃花主要靠种子繁殖，受制于种子数量、萌发率和气候限制，不能得到快速繁殖。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法。为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)地桃花的消毒剪取当年抽出的、带叶的地桃花茎段，刷洗后减去叶片，留若干叶柄，置于洗洁精溶液中搅拌后用流水冲洗0.5h以上，在无菌环境下依次转入到70％的酒精溶液和0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒，即为消毒完成的茎段外植体，取出放入已灭菌的湿滤纸上待接种；(2)腋芽萌发不定芽的诱导用消毒后的刀具将上一步获得的茎段外植体两端各切除少量茎段，以正常的极性方向接种到添加有6-BA0-5mg/L，IBA0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s，得腋芽萌发的不定芽；(3)丛生芽的诱导将上一步得到的腋芽萌发的不定芽切成带一叶的茎段，以正常的极性方向接种到添加有ZT0-1.0mg/L，IBA0-1.0mg/L，CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s，得不定芽丛；14h光/10h暗是指一天光照14h，在黑暗中培养10h，交替进行，以下同。(4)不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2-3株不定芽的芽块，接种到添加有6-BA0-5.0mg/L，IBA0-1.0mg/L，CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s；(5)再生植株的生根培养切取叶片嫩绿、生长旺盛且2-3cm高的不定芽，插入到添加IBA0-1.0mg/L，AC0.5-1.0g/L，1/8-1/4MS基本培养基的生根培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/(m2·s)，得生根的组培苗；(6)炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5cm以上，根长超过3cm时，将组培苗定植于高压湿热灭菌过的珍珠岩、泥炭重量比为1：1-9的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在15-25℃之间；3d后，揭开薄膜一角，让内外空气相通，适应1d后将薄膜全部揭开，于叶面喷雾以保持湿润，待新叶长出后移栽大田中继续种植。在上述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法中，在步骤(1)中，所述的无菌环境为经紫外线消毒30min以上并开启无菌风的超净工作台，茎段转入70％的酒精溶液中浸泡40s，取出用无菌水冲洗3次，再浸入滴加有吐温-80和1mol/LNaOH溶液的0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒9-10min，然后用无菌水充分浸洗3次。在上述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法中，在步骤(2)中，所述的刀具为经过高温灼烧消毒的解剖刀，培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS基本培养基相同，该培养基中的蔗糖添加量为30.0g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min；在上述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法中，在步骤(3)中，培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS基本培养基相同，该培养基中的蔗糖添加量为30g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min；在上述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法中，在步骤(4)中，培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)地桃花的消毒剪取当年抽出的、带叶的地桃花茎段，刷洗后减去叶片，留若干叶柄，置于洗洁精溶液中搅拌后用流水冲洗0.5h以上，在无菌环境下依次转入到70％的酒精溶液和0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒，即为消毒完成的茎段外植体，取出放入已灭菌的湿滤纸上待接种；(2)腋芽萌发不定芽的诱导用消毒后的刀具将上一步获得的茎段外植体两端各切除少量茎段，以正常的极性方向接种到添加有6‑BA 0‑5mg/L，IBA 0‑1.0mg/L，AC 0‑2.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30‑40μmol/m2·s，得腋芽萌发的不定芽；(3)丛生芽的诱导将上一步得到的腋芽萌发的不定芽切成带一叶的茎段，以正常的极性方向接种到添加有ZT 0‑1.0mg/L，IBA 0‑1.0mg/L，CH 0‑1.0g/L，AC 0.5‑1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30‑40μmol/m2·s，得不定芽丛；(4)不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2‑3株不定芽的芽块，接种到添加有6‑BA 0‑5.0mg/L，IBA 0‑1.0mg/L，CH 0‑1.0g/L，AC 0.5‑1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30‑40μmol/m2·s；(5)再生植株的生根培养切取叶片嫩绿且2‑3cm高的不定芽，插入到添加IBA 0‑1.0mg/L，AC 0.5‑1.0g/L，1/8‑1/4MS基本培养基的生根培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30‑40μmol/(m2·s)，得生根的组培苗；(6)炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5cm以上，根长超过3cm时，将组培苗定植于高压湿热灭菌过的珍珠岩、泥炭重量比为1：1‑9的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在15‑25℃之间；3d后，揭开薄膜一角，让内外空气相通，适应1d后将薄膜全部揭开，于叶面喷雾以保持湿润，待新叶长出后移栽大田中继续种植。...

【技术特征摘要】
1.一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，包
括以下步骤：
(1)地桃花的消毒
剪取当年抽出的、带叶的地桃花茎段，刷洗后减去叶片，留
若干叶柄，置于洗洁精溶液中搅拌后用流水冲洗0.5h以上，在无
菌环境下依次转入到70％的酒精溶液和0.1％HgCl2溶液内浸泡消
毒，即为消毒完成的茎段外植体，取出放入已灭菌的湿滤纸上待
接种；
(2)腋芽萌发不定芽的诱导
用消毒后的刀具将上一步获得的茎段外植体两端各切除少量
茎段，以正常的极性方向接种到添加有6-BA0-5mg/L，IBA0-1.0
mg/L，AC0-2.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养
基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为
25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s，
得腋芽萌发的不定芽；
(3)丛生芽的诱导
将上一步得到的腋芽萌发的不定芽切成带一叶的茎段，以正
常的极性方向接种到添加有ZT0-1.0mg/L，IBA0-1.0mg/L，
CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外
植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：
培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度
30-40μmol/m2·s，得不定芽丛；
(4)不定芽的增殖
将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2-3
株不定芽的芽块，接种到添加有6-BA0-5.0mg/L，IBA0-1.0
mg/L，CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，
接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条
件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照

\t强度30-40μmol/m2·s；
(5)再生植株的生根培养
切取叶片嫩绿且2-3cm高的不定芽，插入到添加IBA0-1.0
mg/L，AC0.5-1.0g/L，1/8-1/4MS基本培养基的生根培养基中，
接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条
件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14h光/10h暗，光
照强度30-40μmol/(m2·s)，得生根的组培苗；
(6)炼苗移栽
待生根的组培苗的苗高长至5cm以上，根长超过3cm时，
将组培苗定植于高压湿热灭菌过的珍珠岩、泥炭重量比为1：1-9
的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保
湿，室内温度控制在15-25℃之间；3d后，揭开薄膜一角，让内
外空气相通，适应1d后将薄膜全部揭开，于叶面喷雾以保持湿
润，待新叶长出后移栽大田中继续种植。
2.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方
法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的无菌环境为经紫外线消
毒30min以上并开启无菌风的超净工作台，茎段转入70％的酒精
溶液中浸泡40s，取出用无菌水冲洗3次，再浸入滴加有吐温-80
和1mol/LNaOH溶液的0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒9-10min，
然后用无菌水充分...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春椿，熊耀康，孙骏威，张水利，俞冰，李石清，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33