一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法技术

本发明专利技术公开了一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：外植体的选取与消毒、不定芽诱导、不定芽继代获得试管苗、根的诱导、移栽。采用该繁殖方法对铁甲秋海棠进行组织培养，一个培养周期增殖率为1200倍以上，繁殖速度快，有效解决了铁甲秋海棠种苗繁殖的难题。

Method of establishment of regeneration system of a body from the leaves of Begonia masoniana

The invention discloses a method of Begonia masoniana from Leaf Regeneration System of the body, which is characterized by comprising the following steps: selection and sterilization of explant, adventitious bud induction, adventitious bud subculture plantlets obtained, root induction and transplanting. The breeding methods of Begonia masoniana tissue culture, a culture cycle multiplication rate was more than 1200 times, fast propagation speed, effectively solves the problem of propagation of Begonia masoniana.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及一种铁甲秋海棠(Begoniamasoniana)组织培养的繁殖方法。
技术介绍
铁甲秋海棠(Begoniamasoniana)，秋海棠科（Begoniaceae）秋海棠属（Begonia）多年生草本观叶植物，原产巴西东部一带，叶形优美，叶色绚丽，是室内极好的观叶植物。性喜温暖、湿润、半阴及空气湿度大的环境，忌强光直射。生长适温为22-25℃，不耐高温，气温超过32℃则生长缓慢。铁甲秋海棠，根茎肥厚，粗短，叶轮廓斜宽卵形至斜近圆形，边缘有密、微凸起的长芒之齿。上面深绿色，有浅色斑纹，下面淡褐绿色。叶和叶柄上密生茸毛，花较小，为黄色。5-7月开花，聚伞花序，花朵饱满呈水红色，袅娜娇艳，亦颇具观赏价值。然而，作为秋海棠属植物的一种，其种子不易获得，有性繁殖能力弱，且后代多变异，优良性状难以保持。且播种繁殖常用与国内外引种、品种改良和规模性商品生产，播种常规引种以春季4-5月或秋季9-10月为宜。因种子特别细小，播种时需谨慎操作，植物组织培养技术作为当代新兴的生物技术方法之一，具有繁殖系数高、遗传性状稳定、不受季节限制等诸多优点，因而十分适用于优秀观赏植物的推广繁殖，目前已广泛应用于马蹄莲、兰花、菊花、月季等观赏植物的再生产，秋海棠属植物中也有许多品种组培成功。但关于铁甲秋海棠组织培养的报道较少，偶有关于秋海棠属植物的组培报道，何勇等通过蟆叶秋海棠的幼嫩叶片外植体进行组织培养，得出了再生植株，但只是重点研究了愈伤组织的诱导试验，并没有对增殖方法进行摸索（《蟆叶秋海棠离体培养的研究》，湖北农业科学，2009年第8期，1814-1816页），与之前秋海棠相关的申请专利201010504126比较，扦插时间较长，且增殖率较低。徐菲等曾发表文章《蟆叶秋海棠“光灿”组织培养技术研究》，江西农业科学，2011年12期，然而，其整体增殖率较低，一个培养周期增殖率仅为100倍，且周期相对较长。虽然蟆叶秋海棠和铁甲秋海棠均为秋海棠属植物，但品种形态差异较大，套用组培繁殖技术比较困难，而现有报道中未见铁甲秋海棠的组培繁殖技术的研究，现亟需一种铁甲秋海棠高效离体快繁方法，用以推广该优良品种。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了建立铁甲秋海棠组织培养繁殖体系。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，包括如下步骤：（1）外植体的选取与消毒：选取完全展开的成熟健壮叶片作为外植体，冲洗干净后，进行消毒，消毒过程为：先以适量洗涤剂溶液振荡清洗15min，再用自来水流水冲洗40min，取出后于无菌操作台上，用75%酒精消毒10s，立即转入含有0.1%的升汞溶液中消毒25min，再以无菌水冲洗5-6次，每次1min，消毒滤纸吸干表面水分，将叶片边缘切除后切成3-4cm2的方形小块。（2）不定芽的诱导：取步骤（1）中处理得到的外植体方形小块，将叶片平铺接种于诱导培养基中进行不定芽的诱导，培养温度为25±2℃，进行暗光照培养20d；所述暗光照培养条件为：光照时间为14h/d，光照强度为1000lx；所述诱导培养基为MS＋2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.5mg/LDA-6，pH值为5.8-6.0；（3）不定芽继代获得试管苗：将诱导得到的不定芽切分后，接入壮苗培养基中进行继代培养30d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为1500lx；所述继代壮苗培养基为MS＋0.4mg/LIBA，pH值为5.8-6.0；一般需要2~3个继代周期（40d左右）使不定芽长成大苗。（4）根的诱导：将步骤（3）中得到的铁甲秋海棠试管苗接入生根培养基中进行生根培养10d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为1500lx；所述生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA，pH值为5.8-6.0；待不定根长至3cm左右，植株整体生长稳健时，可准备移苗出瓶。(5)将培养瓶移出组培室，将瓶盖打开，组培苗炼苗2-3天，将组培苗的根浸泡在复合微生物制剂中，10min，移栽入基质中，所述基质优选为：按照2：1的体积比例将泥炭土和珍珠岩混匀。所述复合微生物制剂为：按照淡紫灰链霉菌发酵液：黄绿木霉发酵液：假丝酵母菌发酵液：粪产碱杆菌发酵液：草炭：磷酸氢二钠重量比＝1：2：3：2：4：1所述淡紫灰链霉菌(Streptomyceslavendulae)为CGMCCNO.2130；所述黄绿木霉为黄绿木霉（Trichodermaaureoviride）ACCC32248所述假丝酵母菌具体为假丝酵母菌（Candidautilis）ATCCNo.22023;所述粪产碱杆菌为粪产碱杆菌（Alcaligenesfaecalis）ATCC31555。首先将淡紫灰链霉菌、黄绿木霉、假丝酵母菌、粪产碱杆菌分别按照常规方式活化，然后培养至菌液中活菌数达到107个/克获得发酵液，将上述发酵液按照质量比例1：2：3：2混合，按照重量配比添加草炭、磷酸氢二钠即得。对于本专利技术的进一步改进在于，所述步骤（1）中外植体的选取及选取时间：以完全展开的成熟健壮叶片为外植体，在诱导15-20天后即可有效获得大量不定芽，数量多且生长迅速；在3-4月份进行外植体选取和消毒，污染率大大降低。本专利技术铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法具有以下优点：组织培养方法其步骤都具有相似性，其结果却具有显著的不同，本申请专利技术人经过反复实验得出，铁甲秋海棠在初代诱导不定芽的阶段，较弱光照1000lx的暗光培养能够使外植体迅速分裂，获得大量不定芽；后期再采用1500lx的光照强度进行壮苗效果最佳。采用1000lx的光照强度能够诱导出不定芽，强光照会大大抑制不定芽的形成。这可能是由于铁甲秋海棠野生生境为阴暗潮湿条件形成的。本领域公知，对于植物组培领域研究如何利用植物组织分化再生植株，提高植物的繁殖数量，是科学家研究重要的技术重点也是技术难点，而激素种类及激素浓度使用范围，培养基类型更是重中之重，本申请专利技术人经过大量创造性劳动，筛选的到最佳的铁甲秋海棠诱导培养基、增殖培养基及生根培养基的成分及激素组合，不仅诱导、增殖效果明显，且出芽时间大大缩短，且壮苗、生根效果显著。泥炭土具有良好的通透性和较大的盐分平衡能力，珍珠岩吸水、透气，本申请专利技术人经过多年创造性劳动，进行筛选对比实验，从大量扦插基质中筛选得出泥炭、珍珠岩按照2：1的体积比例结合使用，最适宜铁甲秋海棠生根存活，各基质间互作互应，达到透气、保湿、固根的效果。利用组合基质培养铁甲秋海棠，能够快速有效的得到大量铁甲秋海棠，解决其短缺的问题；通过对取样时间、灭菌、光照、激素等条件的优化，一个周期内，能够使得铁甲秋海棠增殖率达到1200倍以上，成活后快速达到种苗规格，此外，组培操作不必考虑季节因素，出瓶前可一年四季的扩繁，繁殖系数可以指数化增长，能够高效的得到铁甲秋海棠种苗，大大满足了市场的需求。具体实施方式实施例1外植体取样时间筛选1、不同季节取样的比较于12月1日、2月1日、3月1日、4月1日和5月1日五个时间点，选取展叶叶片进行消毒处理和初代诱导。消毒方法均为“先以适量洗涤剂溶液振荡清洗15min，再用自来水流水冲洗40min，取出后于无菌操作台上，用75%酒精消毒10s，立即转本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：外植体的选取与消毒、不定芽诱导、不定芽继代获得试管苗、根的诱导、移栽。

【技术特征摘要】
1.一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：外植体的选取与消毒、不定芽诱导、不定芽继代获得试管苗、根的诱导、移栽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：步骤（1）外植体的选取与消毒：选取叶片作为外植体，冲洗干净后，进行消毒，切成3-4cm2的方形小块；步骤（2）不定芽的诱导：取步骤（1）中处理得到的叶片平铺接种于诱导培养基中进行不定芽的诱导，暗光照培养，所述暗光照培养条件为：光照时间为14h/d，光照强度为1000lx；所述诱导培养基为MS＋2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.5mg/LDA-6；步骤（3）不定芽继代获得试管苗：将步骤（2）诱导得到的不定芽切分后，接入壮苗培养基中进行继代培养获得试管苗，光照时间为14h/d，光照强度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32