本发明专利技术公开了一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，在无菌环境中将三七愈伤组织进行接种及继代培养，得到三七紫色素愈伤组织；其诱导培养的培养基为MS+0.1～2mg/L NAA+0.1～2mg/L BA+0.002～4mg/L TDZ，所述继代培养的光照控制为10～15小时光照、10～15小时黑暗，交替进行。本发明专利技术通过光照条件及强度的控制，并在培养基中加入TDZ及与其他植物激素的搭配，使三七愈伤组织的诱导率明显提高，并有利于紫色素的形成。本发明专利技术为大量提取三七愈伤组织中的紫色素奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种三七紫色素三七愈伤组织的继代培养方法。
技术介绍
三七为五加科人参属植物，有“金不换”、“南国神草”、“参中之王”等美誉，是云南特有的名贵中药材，也是我国中医药中一颗璀璨的明珠。三七紫色素为一种存在于三七植株茎、叶、花及根的细胞液中的化合物，使植株呈现出红、紫红、兰等不同颜色。三七紫色素的本质为花色苷，花色苷是类黄酮--以黄酮核为基础的一类物质中能呈现红色的一族化合物。由于它具有独特的功能性，而被应用于清除体内自由基、增殖叶黄素、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、预防糖尿病、减肥、保护视力等。花色苷作为一种天然色素，安全、无毒，且对人体具有许多保健功能，已被应用于食品、保健品、化妆品、医药等行业。然而，目前并无关于三七紫色素的利用与开发的相关文献及报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是根据提供一种通过组织培养手段培养出富含紫色素的三七愈伤组织，为大量提取其中的花色苷奠定了基础。本专利技术提供的技术方案：一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，在无菌环境中将三七愈伤组织进行接种及继代培养，得到三七紫色素愈伤组织；所述继代培养的培养基为MS+0.1～2mg/LNAA+0.1～2mg/LBA+0.002～4mg/LTDZ，(即在每一升的MS培养基中添加0.1～2mgNAA、0.1～2mgBA和0.002～1mgTDZ)。所述MS为MS培养基，NAA为萘乙酸，BA为苄氨基腺嘌呤，TDZ为噻苯隆。优选的，所述继代培养的光照控制为10～15小时光照、10～15小时黑暗，交替进行，优选的，所述继代培养的光照控制为12小时光照、12小时黑暗，交替进行。优选的，所述的光照控制的光强度为1000—1500lx。优选的，所述的继代培养的温度为22℃—25℃；优选的，所述的继代培养的空气相对湿度：50—80％。优选的，所述的接种方法为：在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2的方型小块，接种于培养基中。优选的，所述三七愈伤组织为生长至直径1-2cm的愈伤组织。优选的，所述的诱导培养的周期为4～5周。本专利技术的有益效果：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。通过继代培养，可使愈伤组织无限期地保存持在不分化的增殖状态。本专利技术通过对光照时间、培养基、湿度、温度等条件控制，培养出富含紫色素、增殖率高的愈伤组织。本专利技术通过光照的控制有效的提高了三七紫色素的含量，并在培养基中加入TDZ及与其他植物激素的搭配，使三七愈伤组织的诱导率明显提高，并有利于紫色素的形成。本专利技术利用组织培养繁殖效率高、生长周期短的优点，建立适合三七紫色素愈伤组织生长的组培条件，从而提供大量的优质的富含紫色素的愈伤组织，为从三七愈伤组织中提取紫色素提供物质基础，有利于自动化、规模化生产,提高生产效率。具体实施方式实施例1一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，包括以下步骤：选取生长至直径1cm的三七愈伤组织，在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2的方型小块，在无菌的条件下，在酒精灯火焰附近打开组培瓶，瓶口在火焰上灼烧一下，将切好的愈伤组织接种到继代培养基上，其中，继代培养的培养基为MS+0.1mg/LNAA+0.1mg/LBA+0.002mg/LTDZ，培养4周。其中，光照控制为10小时光照、10小时黑暗，交替进行，光照控制的光强度为1000lx。继代培养的温度为22℃；空气相对湿度：50％。实施例2一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，包括以下步骤：选取生长至直径1-2cm的三七愈伤组织，在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2的方型小块，在无菌的条件下，在酒精灯火焰附近打开组培瓶，瓶口在火焰上灼烧一下，将切好的愈伤组织接种到继代培养基上。其中，继代培养的培养基为MS+2mg/LNAA+2mg/LBA+4mg/LTDZ，培养5周。其中，光照控制为15小时光照、15小时黑暗，交替进行，光照控制的光强度为1500lx。继代培养的温度为25℃；空气相对湿度：80％。实施例3一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，包括以下步骤：选取生长至直径2cm的三七愈伤组织，在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2方型小块，在无菌的条件下，在酒精灯火焰附近打开组培瓶，瓶口在火焰上灼烧一下，将切好的愈伤组织接种到继代培养基上，其中，继代培养的培养基为MS+1mg/LNAA+1.2mg/LBA+0.08mg/LTDZ，培养4周。其中，光照控制为12小时光照、12小时黑暗，交替进行，光照控制的光强度为1200lx。继代培养的温度为23℃；空气相对湿度：60％。不同植物激素对三七愈伤组织的继代培养增殖率及紫色素含量的影响试验：选取3组相同的三七愈伤组织进行继代培养，在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2的方型小块，在无菌的条件下，在酒精灯火焰附近打开组培瓶，瓶口在火焰上灼烧一下，分别将切好的愈伤组织接种到3组不同的继代培养基上。其中，继代培养基分别为：(1)MS+0.1mg/LTDZ、(2)MS+0.1mg/LNAA+0.1mg/LBA及(3)MS+0.1mg/LNAA+0.1mg/LBA+0.1mg/LTDZ。在相同的环境下进行培养，其中光照控制为12小时光照条件和12小时黑暗条件交替进行,光照强度为1000lx；温度：25℃；空气相对湿度：80％；培养5周后对其增殖率及紫色素的含量进行测试。表1，不同植物激素对三七愈伤组织的继代培养的增殖率及紫色素含量编号NAABATDZ增殖率紫色素含量1000.112％8％20.10.1042％1％30.10.10.172％19％从表1的结果可以看出，TDZ的添加能明显有利于三七的愈伤组织的继代培养，能明显提高愈伤组织的增殖率及愈伤组织中紫色素的含量，获得高增殖率及紫色素含量高的愈伤组织。TDZ与NAA和BA的协同作用有利于愈伤组织的增殖与生长，及紫色素的产生。不同光照条件对愈伤组织的继代培养的增殖率及紫色素含量的影响试验：选取6组相同的三七愈伤组织进行继代培养，在无菌环境中将三七愈伤组织分割成0.5mm2的方型小块，在无菌的条件下，在酒精灯火焰附近打开组培瓶，瓶口在火焰上灼烧一下，将切好的愈伤组织接种到MS+0.1mg/LNAA+0.1mg/LBA+0.1mg/LTDZ的继代培养基上。对其进行不同的光照处理，分别为(1)5小时光照条件和5小时黑暗条件交替进行,(2)10小时光照条件和10小时黑暗条件交替进行,(3)12小时光照条件和12小时黑暗条件交替进行,(4)15小时光照条件和15小时黑暗条件交替进行,(5)20小时光照条件和20小时黑暗条件交替进行,(6)30小时光照条件和30小时黑暗条件交替进行。6组的光照强度为1000lx；温度：25℃；空气相对湿度：80％；培养5周后对其增殖率及紫色素的含量进行测试。表2，不同光照条件对三七愈伤组织的继代培养的增殖率及紫色素含量光照交替时间51012152030增殖率36％48％70％62％36％30％紫色素含量8％18％19％13％5％3％从表2的结果可以看出，使用光照与黑暗交替的光照条件与三七愈伤组织中紫色素的形成有影响本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，其特征在于，在无菌环境中将三七愈伤组织进行接种及继代培养，得到三七紫色素愈伤组织；所述继代培养的培养基为MS+0.1～2mg/L NAA+0.1～2mg/L BA+0.002～4mg/L TDZ。
【技术特征摘要】
1.一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，其特征在于，在无菌环境中将三七愈伤组织进行接种及继代培养，得到三七紫色素愈伤组织；所述继代培养的培养基为MS+0.1～2mg/LNAA+0.1～2mg/LBA+0.002～4mg/LTDZ。2.根据权利要求1所述的一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，其特征在于，所述继代培养的光照控制为10～15小时光照、10～15小时黑暗，交替进行。3.根据权利要求2所述的一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，其特征在于，所述继代培养的光照控制为12小时光照、12小时黑暗，交替进行。4.根据权利要求2所述的一种三七紫色素愈伤组织的继代培养方法，其特征在于，所述的光照控制的光强度为1000—15...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈中坚，魏富刚，王勇，余育启，
申请(专利权)人：文山苗乡三七科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53
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