天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基制造技术

本发明专利技术提供天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基，所述培养基为改良SH增殖培养基或改良BM2增殖培养基。本发明专利技术建立了天山云杉胚性愈伤组织增殖的技术平台，确定天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养基：改良SH，DCR，1/2DCR，BM和MSG培养基；其中最佳天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养基为改良SH，并提出天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养条件。本发明专利技术为实现天山云杉胚性愈伤组织增殖培养的更广泛应用提供坚实的理论基础，同时建立了天山云杉胚性愈伤组织培养的技术平台，为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。

High efficient propagation medium for embryogenic callus of Tianshan spruce

The invention provides a high-efficiency propagation medium for embryogenic callus of Tianshan spruce, wherein the culture medium is an improved SH multiplication medium or an improved BM2 multiplication medium. The invention establishes a technology platform of spruce embryogenic callus proliferation, determining medium spruce embryogenic callus proliferation: modified SH, DCR, 1/2DCR, BM and MSG medium; the best medium Tianshan spruce embryogenic callus proliferation is improved SH, and proposed the cultivation conditions of Picea schrenkiana embryo callus proliferation. Provide a solid theoretical basis for more extensive application of the invention of spruce embryogenic callus proliferation culture, and establish the technology platform for the cultivation of spruce embryogenic callus, laid the foundation for the study of Picea schrenkiana genetic improvement germplasm innovation, shorten the breeding cycle.

【技术实现步骤摘要】
天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基
本专利技术属于无性繁殖
，具体涉及天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基。
技术介绍
植物体细胞胚（体胚）发生是双倍体或者单倍体的体细胞在特定条件下，未经性细胞融合而是通过合子胚胎发生类似的途径发育出新个体的过程。植物组织培养中体细胞胚的发生不仅具有普遍性，而且具有数量多，速度快，结构完整的特点，在应用上是一种有效大规模的无性繁殖方法。目前天山云杉主要通过有性繁殖产生后代。因为，种子成熟率低、生长较慢、繁殖和品种选育困难，所以无性繁殖一直受到各国林业决策部门的重视与林木育种工作者以及森林经营者的特别关注，尤其是现代生物技术的蓬勃发展，如植物组织培养及体细胞胚胎发生技术，具有繁殖效率高、周期短、不受自然条件制约、稳定、选育优良品种，对造林工程具有重大意义等特点。天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养已取得了一定的进展，愈伤组织的增殖是体细胞胚胎培养的关键，而在天山云杉体细胞胚愈伤组织的专用增殖培养基鲜见报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基。本专利技术报道了天山云杉体细胞胚增殖阶段的技术研究，为实现天山云杉体细胞胚培养的更广泛应用提供坚实的理论基础，同时建立了天山云杉胚性愈伤组织增殖培养的技术平台，为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。本专利技术提供天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基，所述培养基为改良SH增殖培养基或改良BM2增殖培养基；其中，（1）所述改良SH增殖培养基的配方为：大量元素硝酸钾(KNO3)2500mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O)400mg/L磷酸二氢铵（NH4）H2PO4300mg/L氯化钙(CaCl2·2H2O)200mg/L微量元素五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.2mg/L硼酸(H3BO3)5mg/L一水硫酸锰(MnSO4·H2O)10mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.1mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)1mg/L碘化钾(KI)1mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O)0.1mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠(FeNaEDTA)35mg/L有机物烟酸(NicotinieAcid)5mg/L盐酸硫胺素(Thiamine-HCl)5mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine-HCl)0.5mg/L肌醇(Myo-Inositol)1000mg/L水解酪蛋白(Caseinhydrolysat)1000mg/L蔗糖（Saccharose）20g/L卡拉胶(Gelrite)3000mg/LL-谷氨酰胺500mg/L外源生长调节剂2,4-D1.10mg/L6-BA0.44mg/L；（2）所述改良BM2增殖培养基的配方为：大量元素氯化钙(CaCl2·2H2O)134.5mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O)400mg/L磷酸二氢钾KH2PO4340mg/L微量元素四水硫酸锰(MnSO4·4H2O)11.15mg/L一水硫酸锰(MnSO4·H2O)20.8mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)8mg/L硼酸(H3BO3)5mg/L碘化钾(KI)1mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O)0.025mg/L五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.24mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.2mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠(FeNaEDTA)65.1mg/L有机物肌醇(Myo-Inositol)1000mg/L烟酸(NicotinieAcid)0.25mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine-HCl)0.25mg/L盐酸硫胺素(Thiamine-HCl)0.5mg/LL-甘氨酸（Glycine）1mg/L水解酪蛋白(Caseinhydrolysat)500mg/L蔗糖（Saccharose）20g/L卡拉胶(Gelrite)3000mg/LL-谷氨酰胺450mg/L外源生长调节剂2,4-D1.10mg/L6-BA0.44mg/L。作为优选，所述培养基为改良SH增殖培养基。本专利技术还提供上述增殖培养基的制备方法，制备时，首先，每升添加除L-谷氨酰胺外的配方量的各组分后，纯净水作为溶剂，搅拌均匀后调pH值至5.8±0.02，然后添加Gelrite（卡拉胶）作为固化剂，封口准备消毒；在121℃，2×107Pa的压力下进行15min高压灭菌后，将培养基自然冷却至60℃时加入配方量（用孔径为0.22μm的滤器过滤灭菌）的L-谷氨酰胺。然后将培养基倒入培养皿中自然冷却凝固，放置1d后再使用。本专利技术还提供上述天山云杉胚性愈伤组织高效增殖的接种方法，其特征在于：是将天山云杉胚性愈伤组织接种于权利要求1或2所述的培养基中，将尺寸为70.3×28mm的培养器皿接种0.65g胚性愈伤组织后（分成4块接种于增殖培养基上），盖上盖子，在黑暗中，温度为23±2℃条件下培养，每周称一次新鲜增殖量并观察增殖的生长状态，直至愈伤组织生长进入停止，各处理均重复5次。首先，将愈伤组织与培养基分离，然后转入无菌培养皿（称量前去皮）进行新鲜增殖的称量。记录数据后再将胚性愈伤组织接回原处继续培养。为了避免污染，上述操作均在超净台内进行。绘制生产曲线，确定最佳继代周期。本专利技术建立了天山云杉胚性愈伤组织增殖的的技术平台，确定天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养基：改良SH，DCR，1/2DCR，BM和MSG培养基；其中最佳天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养基为改良SH，并提出天山云杉胚性愈伤组织增殖的培养条件。本专利技术为实现天山云杉胚性愈伤组织增殖培养的更广泛应用提供坚实的理论基础，同时建立了天山云杉胚性愈伤组织培养的技术平台，为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为天山云杉胚性愈伤组织在5种不同增殖培养基上的增殖量与增殖率表现；（SHT表示SH培养基，其中的T表示为天山云杉）。图2为不同的天山云杉胚性愈伤组织在改良SH培养基中的增殖情况。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。一、最适培养基的选择培养基是植物组织培养的重要基质，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基培养才有可能成功。本实验采用DCR、1/2DCR、SH、BM2和MSG为5种增殖培养基，再分别添加外源生长调节剂：1.10mg/L2,4-D+0.44mg/L6-BA，作为本实验的5种增殖培养基，并将其分别命名为改良DCR增殖培养基、改良1/2DCR增殖培养基、改良SH增殖培养基、改良BM2增殖培养基和改良MSG增殖培养基。五种增殖培养基的配方及制备方法如下：（1）改良SH增殖培养基的配方如下：大量元素硝酸钾(KNO3)2500mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O)400mg/L磷酸二氢铵（NH4）H2PO4300mg/L氯化钙(CaCl2·2H2O)200mg/L微量元素五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.2mg/L硼酸(H3BO3)5mg/L一水硫酸锰(本文档来自技高网...

【技术保护点】
天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基，其特征在于：所述培养基为改良SH增殖培养基或改良BM2增殖培养基；其中，（1）所述改良SH增殖培养基的配方为：大量元素硝酸钾(KNO

【技术特征摘要】
1.天山云杉胚性愈伤组织高效增殖培养基，其特征在于：所述培养基为改良SH增殖培养基或改良BM2增殖培养基；其中，（1）所述改良SH增殖培养基的配方为：大量元素硝酸钾(KNO3)2500mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O)400mg/L磷酸二氢铵（NH4）H2PO4300mg/L氯化钙(CaCl2·2H2O)200mg/L微量元素五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.2mg/L硼酸(H3BO3)5mg/L一水硫酸锰(MnSO4·H2O)10mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.1mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)1mg/L碘化钾(KI)1mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O)0.1mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠(FeNaEDTA)35mg/L有机物烟酸(NicotinieAcid)5mg/L盐酸硫胺素(Thiamine-HCl)5mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine-HCl)0.5mg/L肌醇(Myo-Inositol)1000mg/L水解酪蛋白(Caseinhydrolysat)1000mg/L蔗糖（Saccharose）20g/L卡拉胶(Gelrite)3000mg/LL-谷氨酰胺500mg/L外源生长调节剂2,4-D1.10mg/L6-BA0.44mg/L；（2）所述改良BM2增殖培养基的配方为：大量元素氯化钙(CaCl2·2H2O)134.5mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O)400mg/L磷酸二氢钾KH2PO4340mg/L微量元素四水硫酸锰(MnSO4·4H2O)11.15mg/L一水硫酸锰(MnSO4·H2O)20.8mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)8mg/L硼酸(H3BO3)5mg/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊丽米努尔，雪合拉提·伊明诺夫，夏衣达·雪合拉提，哈丽努尔·阿不力米提，刘永萍，
申请(专利权)人：新疆林科院造林治沙研究所，
类型：发明
国别省市：新疆,65