本发明专利技术提供了辽藁本的组织培养方法，将新鲜辽藁本叶片，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2,4‑二氯苯氧乙酸、6‑糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。以总培养基计，MS，2,4‑二氯苯氧乙酸、6‑糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比：1000g:0.2~0.5mg:0.04~0.08mg:6~9g：1.2~2g:0.01~0.03g。目前，有关辽藁本组织培养的文献报道未见报道，采用本发明专利技术得到的愈伤组织，在组合培养基上，不仅愈伤组织长得快且大，而且外观为嫩绿色，长势好。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及辽藁本的愈伤组织的培养方法，属于中药的
技术介绍
：辽藁本(Ligusticum jeholense Nakai et Kitag)为伞形科藁本属多年生草本植物，是《中华人民共和国药典》收载的大宗常用中药藁本的主要来源之一，主要分布于辽宁、吉林、山西及山东地区。辽藁本味辛、温。具有祛风，散寒，除湿，止疼作用。用于风寒感冒，颠顶疼痛，风湿痹痛。现代药理研究表明其具有治疗风寒泄泻、周身疼痛、疥癣、腹痛等疾病。由于没有规范化管理以及经济利益的驱使，多年来对野生资源不可持续的采挖，使辽藁本的产量不断下降，野生藁本资源遭到严重破坏。野生辽藁本的引种和人工栽培实践中，种群以无性更新为主。而以根茎进行抚育和移栽工作进展缓慢，为了保护这一野生资源，本专利技术对辽藁本进行了愈伤组织培养的研究，提出科学有效地恢复和扩大辽藁本种群的提供新途径。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供辽藁本愈伤组织培养在获得辽藁本中的应用。本专利技术的另一个目的是提供辽藁本愈伤组织培养的方法。本专利技术是通过如下方案实现的：取辽藁本嫩叶灭菌，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2,4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。所述的基础培养基为：MS培养基。所述的MS培养基、2,4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比为：1000g:0.2～0.5mg:0.04～0.08mg:6～9g：1.2～2g:0.01～0.03g。进一步地，所述的2,4-二氯苯氧乙酸的重量为：MS：2,4-二氯苯氧乙酸＝1000g：0.2～0.3mg。所述的6-糖基氨基嘌呤的重量组成为：MS：6-糖基氨基嘌呤＝1000g：0.04～0.06mg。所述的蔗糖的重量组成为：MS：蔗糖＝1000g：6～7.5g。所述的琼脂的重量组成为：MS：琼脂＝1000g：1.2～1.5g。所述的肌醇的重量组成为：MS：肌醇＝1000g：0.01～0.015g。具体地，本专利技术的培养方法为：将辽藁本的嫩叶进行灭菌，剪成0.5×0.5cm的小块，以1000gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2.0～2.5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸10mL～15mL，0.4～0.5mg/L 6-糖基氨基嘌呤10～15mL，30～35g/L蔗糖20～25mL，6～8g/L琼脂20～25mL，0.1～0.15g/L肌醇10～15mL，调节PH＝5.8～6.0的组合培养基，每种培养基接种培养40～50个嫩叶小块，培养60～70天，即可。本专利技术针对没有文献报道辽藁本的愈伤组织培养，采用组合培养基，进行辽藁本嫩叶的组织培养，从而得到外观为嫩绿色，长势好的愈伤组织。具体实施方式：实施例1：①将采集的新鲜辽藁本的嫩叶去掉茎；放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70％酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2％次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水；将已经灭菌的叶片切成0.5×0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；②以1000g MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸10mL～15mL，0.4mg/L 6-糖基氨基嘌呤10mL～15mL，30g/L蔗糖20mL～25mL，6g/L琼脂20mL～25mL；③调节组合培养基的P H＝5.8～6.0；④培养基接种培养50个叶片小块，培养60～70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长缓慢，长势不好。实施例2：①将采集的新鲜辽藁本的嫩叶去掉茎；放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70％酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2％次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水；将已经灭菌的嫩茎切成0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；②以1000gMS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加0.4mg/L 6-糖基氨基嘌呤10mL～15mL，30g/L蔗糖20mL～25mL，6g/L琼脂20mL～25mL；0.1g/L
肌醇10～15mL；③调节组合培养基的PH＝5.8～6.0；④培养基接种培养50个叶片小块，培养60～70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长较少，长势不好。实施例3：①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎；放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70％酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2％次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水；将已经灭菌的叶片切成0.5×0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；②以1000g MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸10mL～15mL，30g/L蔗糖20mL～25mL，6g/L琼脂20mL～25mL，0.1g/L肌醇10～15mL；③调节组合培养基的PH＝5.8～6.0；④培养基接种培养50个叶片小块，培养60～70天，结果愈伤组织外观为黄褐色，组织生长较少，长势不好。实施例4：①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎；放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70％酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2％次氯酸钠洗3分钟，无菌水洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水；将已经灭菌的叶片切成0.5×0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；②以1000g MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸10mL～15mL，0.4mg/L 6-糖基氨基嘌呤10mL～15mL，30g/L蔗糖20mL～25mL，6g/L琼脂20mL～25mL，0.1g/L肌醇10～15mL；③调节组合培养基的PH＝7.0～7.5；④培养基接种培养50个叶片小块，培养60～70天，结果愈伤组织外观为褐色，组织生长很缓慢几乎不生长，长势非常不好。实施例5：①将采集的新鲜辽藁本嫩叶去掉茎；放于磨口广口瓶中用自来水冲洗2小时，再用70％酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次，2％次氯酸钠洗3分钟，无菌水
洗6次，放入无菌培养皿中用滤纸吸干表面水；将已经灭菌的叶片切成0.5×0.5cm的小块，作为愈伤组织诱导培养的材料；②以1000g MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，向其中添加2.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸10mL～15mL，0.4mg/L 6-糖基氨基嘌呤10mL～15mL，30g/L蔗糖20mL～25mL，6g/L琼脂20mL～25mL，0.1g/L肌醇10～15mL；③调节组合培养基的PH＝5.8～6.0；④培养基接种培养50个叶片小块，培养60～70天，结果愈伤组织外观为嫩绿色，长得快且大，长势好。实验结论：各种激素及PH值对辽藁本的愈伤组织生长影响较大，在各种激素适量及PH＝5.8～6.0时生长效果最好；在组合生长调节剂的培养基上，嫩叶不仅愈伤组织长得快且大，而且外观为嫩绿色，长势好。本文档来自技高网...
【技术保护点】
辽藁本愈伤组织培养在获得辽藁本中的应用。
【技术特征摘要】
1.辽藁本愈伤组织培养在获得辽藁本中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，取辽藁本嫩叶灭菌，以MS为愈伤组织诱导培养的基础培养基，添加2,4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇作为培养基进行培养。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的基础培养基为：MS 培养基。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以总培养基计，MS，2,4-二氯苯氧乙酸、6-糖基氨基嘌呤、蔗糖、琼脂、肌醇的重量组成比为：1000g: 0.2~0.5mg: 0.04~0.08mg:6~9g：1.2~2g: 0.01~0.03g。5.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，2,4-二氯苯氧乙酸的重量为：MS：2,4-二氯苯氧乙酸=1000g：0.2~0.3mg。6.如权利要求2或4所述的应用，其特征在于，6-糖基氨基嘌呤的重量为：MS：6-糖基氨基嘌呤=1000g：0.04~0.06m...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾凌云，路金才，李娜，赵玥，王晶，李敬，程珍，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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