一种辽东楤木高产皂苷愈伤组织的培养方法，本发明专利技术涉及一种愈伤组织的培养方法。本发明专利技术要解决现有辽东楤木愈伤组织难于培养，以及皂苷产量低的问题。本发明专利技术利用辽东楤木的幼嫩叶片作为外植体，经70%酒精和0.1%HgCl2浸泡消毒后，接入到MS培养基中；将接种的培养基放置于黑暗条件下培养10～15d，然后移至12h/d光照条件下培养15～20d；将培养的愈伤组织继代转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d；经多次继代培养后；即完成辽东楤木高产皂苷愈伤组织的培养。本发明专利技术方法操作简便，材料成本低，污染率极低；愈伤组织出愈率可达100%；皂苷含量和产量较高，本发明专利技术应用于愈伤组织的培养领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及ー种愈伤组织的培养方法。
技术介绍
辽东惚木[Aralia elates (Miq. ) Seem]是ー种食药兼用型经济植物,主要分布于中国东北地区。辽东惚木的食药用价值较高，其嫩芽含有丰富的营养成分，植株的叶片、根皮中均含有多种三萜皂苷，主要皂苷元为齐墩果酸，其具有增强体质、抗除疲劳、抗炎保肝、降血糖血脂、抗癌、抗病毒等作用，药用价值显著，可以作为生产中药制剂的原料。齐墩果酸类三萜皂苷的结构比较复杂，人工合成还比较困难，现在主要是从植物中提取。随着辽东惚木药用价值的显现，一些林区惚木资源被迅速开发利用，但同时也遭到严重破坏，目前现有 的辽东惚木资源已难以满足市场的需求。通过植物组织培养的方法可以大規模、快速地获得大量的具有本植物遗传特性的愈伤组织；可以为植物幼体提供适宜的、条件均一的微小气候环境，摆脱自然中温度、光照的变化及灾害性气候等不良因素对幼体的不利影响，对植物细胞生长极为有利；且一般次生代谢产物含量高的植物或器官诱导出的愈伤组织次生代谢物的含量也会较高。因此，利用组织培养大規模地生产愈伤组织为解决辽东惚木资源及三萜皂苷产物匮乏的难题提供了希望。植物不同器官诱导及诱导产生的愈伤组织具有不同的环境适应性，在培养过程中需要适宜的激素、培养基、光照等条件才能够健康茁壮的生长。目前还没有关于辽东惚木组织培养方面的报道研究多在外植体诱导愈伤组织、植株再生方面，对愈伤组织诱导及生长的条件优化、愈伤组织中皂苷含量及产量方面的研究鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有辽东惚木愈伤组织难于培养，以及皂苷产量低的问题，而ー种辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养方法。本专利技术提供了一种辽东惚木愈伤组织的培养方法，培养的愈伤组织生长速度快、质地疏软、皂苷含量较高，培养方法简便易行。本专利技术ー种辽东惚木愈伤组织的培养方法是按以下步骤进行一、采集辽东惚木的叶片，用水冲洗3(T40min后,再用质量百分比浓度为70%的こ醇溶液浸泡消毒10s，然后用质量百分含量为0. l%HgCl2浸泡消毒8min，最后用无菌水冲洗4飞次，再用无菌滤纸吸干叶片上的水分，将叶片切割成IXlcm2的正方形，接入到MS培养基中；ニ、将步骤一的MS培养基放置于黑暗条件下培养l(Tl5d，培养温度为22°C ^26°C，然后移至12h/d的光照条件下培养15 20d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x，长出愈伤组织；三、将愈伤组织转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x ;四、按步骤三的处理方法继代培养愈伤组织3飞次，即完成辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养。本专利技术培养方法操作简便，材料成本低，设备要求低，污染率极低；愈伤组织出愈率高，可达100% ;培养的愈伤组织生长健康，呈黄緑色或緑色，富有光泽，质地疏软，生长速度快，每瓶鲜重为5. 50 6. 50g，干重为0. 48 0. 56g ;愈伤组织中皂苷含量高，为0. 95% I.20%，皂苷产量为每瓶4. 56 6. 72mg。附图说明 图I为将叶片接种到诱导培养基中的照片；图2为叶片诱导生出愈伤组织的图片；图3为愈伤组织的继代培养的图片；图4为二次继代培养30d的愈伤组织的图片；图5为继代培养的60d的愈伤组织的图片；图6为继代培养90d的愈伤组织的图片。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式一种辽东惚木愈伤组织的培养方法是按以下步骤进行一、采集辽东惚木的叶片，用水冲洗3(T40min后，再用质量百分含量为70%的こ醇浸泡消毒10s，然后用质量百分含量为0. l%HgCl2浸泡消毒8min，最后用无菌水冲洗4 6次，再用无菌滤纸吸干叶片上的水分，将叶片切割成IXlcm2的正方形，接入到MS培养基中；ニ、将步骤ー的MS培养基放置于黑暗条件下培养l(Tl5d，培养温度为22°C 26°C，然后移至12h/d的光照条件下培养15 20d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x ;三、将愈伤组织转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x ;四、按步骤三的处理方法继代培养愈伤组织3飞次，即完成辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养。本实施方式培养方法操作简便，材料成本低，设备要求低，污染率极低；愈伤组织出愈率高，可达100%;培养的愈伤组织生长健康，呈黄緑色或绿色，富有光泽，质地疏软，生长速度快，每瓶鲜重为5. 50 6. 50g,干重为0. 48 0. 56g ;愈伤组织中皂苷含量高，为0.95% I. 20%，皂苷产量为每瓶4. 56 6. 72mg。具体实施方式ニ 本实施方式与具体是实施方式一不同的是步骤一中采集的叶片为5月中旬 6月中旬的生长20 25d的新生叶片。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体是实施方式一至ニ不同的是步骤一中的MS培养基包含有I. Omg/L 2，4-D、质量浓度3%蔗糖和6. 5g/L琼脂。其它与具体实施方式一至二相同。具体实施方式四本实施方式与具体是实施方式一至三之一不同的是步骤ニ中将接种的培养基放置于黑暗条件下培养13d。其它与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五本实施方式与具体是实施方式一至四之一不同的是步骤ニ中将培养基移至12h/d光照条件下培养17d。其它与具体实施方式一至四之一相同。具体实施方式六本实施方式与具体是实施方式一至五之一不同的是步骤ニ和步骤三中的光照强度为23001x。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式与具体是实施方式一至六之一不同的是步骤三中的1/2MS培养基是包含有0. 5mg/L NAA+0. 3 0. 5mg/L 6-BA、质量浓度3%蔗糖和6. 5g/L琼脂。其它与具体实施方式一至六之一相同。具体实施方式八本实施方式与具体是实施方式一至七之一不同的是步骤四中所述的按步骤三的处理方法4飞次继代培养愈伤组织。其它与具体实施方式一至七之一相同。通过以下试验验证本专利技术的效果本试验的一种辽东惚木愈伤组织的培养方法是按以下步骤进行一、采集辽东惚木的叶片，用水冲洗3(T40min后，再用质量百分比浓度为70%的こ醇溶液浸泡消毒10s，然后用质量百分含量为0. l%HgCl2浸泡消毒8min，最后用无菌水冲洗4飞次，再用无菌滤纸吸 干叶片上的水分，将叶片切割成IXlcm2的正方形，接入到MS培养基中；ニ、将步骤一的MS培养基放置于黑暗条件下培养l(Tl5d，培养温度为22°C ^26°C，然后移至12h/d的光照条件下培养15 20d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x，长出愈伤组织；三、将愈伤组织转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x ;四、按步骤三的处理方法继代培养愈伤组织3飞次，即完成辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养。本实施方式所述MS基本培养基由1650mg/L的NH4N03、1900m本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养方法，其特征在于辽东惚木愈伤组织的培养方法是按以下步骤进行一、采集辽东惚木的叶片，用水冲洗3(T40min后，再用质量百分比浓度为70%的こ醇溶液浸泡消毒10s，然后用质量百分含量为0. l%HgCl2浸泡消毒8min，最后用无菌水冲洗4飞次，再用无菌滤纸吸干叶片上的水分，将叶片切割成IXlcm2的正方形，接入到MS培养基中；ニ、将步骤一的MS培养基放置于黑暗条件下培养l(Tl5d，培养温度为22°C 26°C，然后移至12h/d的光照条件下培养15 20d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x，长出愈伤组织；三、将愈伤组织转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d，培养温度为22°C 26°C，光照强度为200(T25001x ;四、按步骤三的处理方法继代培养愈伤组织3飞次，即完成辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养。2.根据权利要求I所述的ー种辽东惚木高产皂苷愈伤组织的培养方法，其特征在于步骤一中采集的叶片为5月中旬 6月...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵恒田，黄福山，邱玉娟，班文杰，张渴望，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：
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