一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法技术

本发明专利技术涉及植物无毒培养技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，包括植株热处理、材料选取、材料消毒、材料预处理和组织培养，所述组织培养包括原球茎诱导培养、增殖培养、壮苗培养和移栽。采用本方法能使培养后的蝴蝶兰苗株发病率低，成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，苗株长势良好，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养蝴蝶兰无毒苗提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物无毒培养
，具体涉及一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法。
技术介绍
蝴蝶兰是当前国际花坛的名花，属于兰科蝴蝶兰属植物，原产地主要是亚热带、热带，天然分布在大洋洲、亚洲。蝴蝶兰具有观赏期长、色泽丰富、花色秀丽以及体态优美轻盈等特点，也被人们称为“洋兰皇后”，在兰科植物中是一种最普及、最广泛的栽培种类，具有很高的商业价值，是国际四大观赏热带兰的一种。蝴蝶兰是单茎性气生兰，侧枝发育非常少，因此很难常规进行分株繁殖，而且很少形成种子，种子发育也比较困难，基本上在自然条件下萌发的难度比较大，因此蝴蝶兰高效繁殖的主要手段就是组织培养。但是采用组织培养带来快速繁殖的同时，引发的病毒传播也越来越严重，严重危害蝴蝶兰的病毒主要有建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒，病毒传播严重制约了兰花产业化发展，病毒可造成植株叶斑、坏死以及花朵变色、畸形等症状，严重影响其品质，目前尚无确切的药物能有效防治病毒的危害与传播，因此繁殖蝴蝶兰无毒苗是产业化发展的必经之路，但是其他兰花品种的方法又不能直接运用到蝴蝶兰身上，因此需要独立开发一种针对蝴蝶兰培养无毒苗的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，使培养后的蝴蝶兰苗株品质好、脱毒率高且长势健壮，实现蝴蝶兰的无病毒栽培。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，包括以下步骤：(1)植株热处理：将长势良好的蝴蝶兰放入培养箱中进行培养，培养期间，培养箱内湿度为80～90％，培养箱内温度开始时为30℃，每隔一天上升1℃，直至38℃，培养时间为22～25d，光照时间为16h/d，光照强度为3000～5000lx；(2)材料选取：将上述热处理后的蝴蝶兰从培养箱中取出，切取蝴蝶兰的茎尖；(3)材料消毒：将上述切取的茎尖用清水冲洗干净，冲洗后剥去外层叶片，在超净工作台上用体积分数为70％的酒精浸泡20～30s，然后用质量分数为0.2％的氯化汞溶液分2～3次共消毒5～6min，每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分；(4)材料预处理：将消毒后的蝴蝶兰茎尖浸泡在19～20mg/L病毒唑溶液中20min；(5)组织培养：将预处理后的蝴蝶兰茎尖进行组织培养，从而培养出蝴蝶兰无毒苗。如上所述的一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，进一步说明为，所述组织培养步骤包括以下子步骤：(a)原球茎诱导培养：将材料预处理后的蝴蝶兰茎尖在解剖镜下剥离成长度为0.5～1.0mm的茎段，然后接种到诱导培养基中进行培养，所述诱导培养基为：1/2MS+0.3～0.7mg/L6-BA+0.3～0.5mg/LNAA+10～15g/L蔗糖，pH值为5.4～5.5，培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；(b)增殖培养：将诱导出的原球茎放入到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+3～5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/LNAA+0.1～0.2mg/LIBA+25～30g/L蔗糖+95～105g/L香蕉泥+95～105g/L马铃薯泥，pH值为5.4～5.5，培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；(c)壮苗培养：增殖继代培养后，选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：1/2MS+0.3～0.7mg/L6-BA+0.3～0.5mg/LNAA+30～35g/L蔗糖，培养温度24～26℃，光照时间为13h/d，光照强度为1800～21000lx；(d)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。如上所述的一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，进一步说明为，所述材料消毒步骤中，每次用氯化汞溶液消毒时，向氯化汞溶液中加入3～4滴吐温-20。本专利技术的有益效果是：采用本方法能使培养后的蝴蝶兰苗株发病率低，成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，苗株长势良好，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养蝴蝶兰无毒苗提供了技术支持。具体实施方式下面对本专利技术具体实施方式做进一步的阐述。本专利技术提供了一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，从而培养蝴蝶兰无毒苗，实现蝴蝶兰的无病毒栽培，该方法包括以下步骤：(1)植株热处理：将长势良好的蝴蝶兰放入培养箱中进行培养，培养期间，培养箱内湿度为80～90％，培养箱内温度开始时为30℃，每隔一天上升1℃，直至38℃，培养时间为22～25d，光照时间为16h/d，光照强度为3000～5000lx；温度呈阶梯式增长，具体是这样的，第一天温度为30℃，第二天温度为31℃，第三天温度为32℃，依次类推，直到第九天第一天温度为38℃，剩余的培养时间均为38℃，直至培养时间结束。部分病毒在高温条件下会失去活性，持续一定时间后，病毒含量不断下降，经过热处理能在一定程度上脱掉部分病毒，蝴蝶兰热处理的温度上限为38℃，超过38℃，会使蝴蝶兰失去活性，甚至枯死，热处理温度采用阶梯上升，能使蝴蝶兰植物逐渐适应温度的变化，提高蝴蝶兰。(2)材料选取：将上述热处理后的蝴蝶兰从培养箱中取出，切取蝴蝶兰的茎尖；植物病毒在植株体内主要沿植物输导组织蔓延发展，植物顶端分生组织没有导管、筛管的分化，同时植物顶端细胞生活力强，能不断分裂摆脱病毒的侵入，所以植物顶端分生细胞中一般不含病毒，切取蝴蝶兰的茎尖进行组培，从而可以获得蝴蝶兰无毒苗，大大降低蝴蝶兰苗株的发病率。(3)材料消毒：将上述切取的茎尖用清水冲洗干净，冲洗后剥去外层叶片，在超净工作台上用体积分数为70％的酒精浸泡20～30s，然后用质量分数为0.2％的氯化汞溶液分2～3次共消毒5～6min，每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分；一般消毒用的0.1％氯化汞溶液灭菌效果不佳，而浓度较高的氯化汞溶液又易使茎尖失去活性，抑制诱导，而本培育方法采用质量分数为0.2％的氯化汞溶液能较好起到灭菌作用而又对其活性影响较小，并且采用分2～3次操作，能更好的保护茎尖活性；作为优选，每次用氯化汞溶液消毒时，向氯化汞溶液中加入3～4滴吐温-20。(4)材料预处理：将消毒后的蝴蝶兰茎尖浸泡在19～20mg/L病毒唑溶液中20min；由于病毒唑通过抑制病毒核酸复制的方式来阻止病毒的增加，因其对核酸的复制过程有阻碍作用，所以采用病毒唑溶液来对蝴蝶兰茎尖进行预处理，从而增加蝴蝶兰苗株的脱毒率。表1为病毒唑不同浓度和处理时间对蝴蝶兰茎尖培养的影响：从表1中可以看出，使用了病毒唑处理后，蝴蝶兰芽尖死亡率基本都要高于未使用病毒唑处理的芽尖，这说明病毒唑对芽尖生长具有一定的抑制作用，但是经过病毒唑处理后，脱毒率明显增加，病毒唑浓度越高，脱毒率也越高，但是病毒唑浓度越高，死亡率也相应增加，且长势越弱，因此选用对蝴蝶兰茎尖采用19～20mg/L病毒唑溶液中浸泡20min。(5)组织培养：将预处理后的蝴蝶兰茎尖进行组织培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)植株热处理：将长势良好的蝴蝶兰放入培养箱中进行培养，培养期间，培养箱内湿度为80～90％，培养箱内温度开始时为30℃，每隔一天上升1℃，直至38℃，培养时间为22～25d，光照时间为16h/d，光照强度为3000～5000lx；(2)材料选取：将上述热处理后的蝴蝶兰从培养箱中取出，切取蝴蝶兰的茎尖；(3)材料消毒：将上述切取的茎尖用清水冲洗干净，冲洗后剥去外层叶片，在超净工作台上用体积分数为70％的酒精浸泡20～30s，然后用质量分数为0.2％的氯化汞溶液分2～3次共消毒5～6min，每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分；(4)材料预处理：将消毒后的蝴蝶兰茎尖浸泡在19～20mg/L病毒唑溶液中20min；(5)组织培养：将预处理后的蝴蝶兰茎尖进行组织培养，从而培养出蝴蝶兰无毒苗。

【技术特征摘要】
1.一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)植株热处理：将长势良好的蝴蝶兰放入培养箱中进行培养，培养期间，培养箱内湿度为80～90％，培养箱内温度开始时为30℃，每隔一天上升1℃，直至38℃，培养时间为22～25d，光照时间为16h/d，光照强度为3000～5000lx；(2)材料选取：将上述热处理后的蝴蝶兰从培养箱中取出，切取蝴蝶兰的茎尖；(3)材料消毒：将上述切取的茎尖用清水冲洗干净，冲洗后剥去外层叶片，在超净工作台上用体积分数为70％的酒精浸泡20～30s，然后用质量分数为0.2％的氯化汞溶液分2～3次共消毒5～6min，每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分；(4)材料预处理：将消毒后的蝴蝶兰茎尖浸泡在19～20mg/L病毒唑溶液中20min；(5)组织培养：将预处理后的蝴蝶兰茎尖进行组织培养，从而培养出蝴蝶兰无毒苗。2.根据权利要求1所述的一种蝴蝶兰无毒苗培养繁殖方法，其特征在于：所述组织培养步骤包括以下子步骤：(a)原球茎诱导培养：将材料预处理后的蝴蝶兰茎尖在解剖镜下剥离成长度为0.5～1.0mm的茎段，然后接种到诱导培养基中进行培养，所述诱导培养基为：1/2MS+0.3～0.7mg/L6-BA+0.3～0.5mg/LNAA+10～15g/L蔗糖，pH值为5.4～5.5，培...

【专利技术属性】
技术研发人员：苟兴明，刘若东，
申请(专利权)人：成都东山兰韵农业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51