一种欧洲山杨品系组培育苗方法技术

本发明专利技术提供了一种欧洲山杨品系组培育苗方法，将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；将外植体接种到不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；欧洲山杨不定芽接种到继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；将1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。采用本发明专利技术的组培育苗方法，得到组培苗的成活率为91.4～91.6％。本发明专利技术的组培育苗方法可使以一个茎段为基数，经培养一年内可增殖到10 000～100 000株组培苗。

Method for breeding seedlings of Yang Pin group of European mountain

The present invention provides a method for the European mountain Yang Pin group seedling cultivation, the stem segments with axillary bud followed by alcohol solution, washed with distilled water, disinfectant and the sterile water rinse again, remove the ends of stem segments of 1 ~ 2mm, get the explant; the explants were inoculated into the culture medium of adventitious bud differentiation and differentiation culture of 30 ~ 45d, the European aspen Populus tremula adventitious buds; adventitious buds were inoculated to subculture medium in subculture, 1.2 ~ 2.0cm high adventitious buds of Populus tremula; 1.2 ~ 2.0cm of Populus tremula adventitious shoots transferred to the medium for adventitious bud rooting rooting from Europe Aspen regeneration plantlets. With the method of tissue culture seedling, the survival rate of tissue culture plantlets is 91.4 ~ 91.6%. Tissue culture method of the invention can make to a stem segment as the base, through training within a year to 10 from 000 to 100 proliferation 000 plantlets.

【技术实现步骤摘要】
一种欧洲山杨品系组培育苗方法
本专利技术属于农林育种方法
，尤其涉及一种欧洲山杨品系组培育苗方法。
技术介绍
欧洲山杨原产中国新疆的阿尔泰、塔城、天山东部北坡至西部伊犁山区，其抗寒、喜光、喜凉爽气候，在我国西北、东北的同纬度地区可广泛栽培与推广。欧洲山杨为杨属白杨派树种，在自然界中，它主要依靠种子和根蘖繁殖，种子繁殖子代性状会发生分离，不能确保优良单株性状的表现，因此生产上使用比较广泛是无性繁殖方法。无性繁殖方法包括扦插、嫁接、根蘖或组织培养等，欧洲山杨扦插生根困难，此种方法生产上难以利用，而利用嫁接或根蘖的繁殖方式，希望在1～2年内达到几万甚至几百万株苗木的生产能力，则初始繁殖材料至少达到上千株至几万株。。而且利用“三倍体欧洲无絮山杨快速繁殖体系”中的方法进行灭菌与组织培养，在利用参考文献“三倍体欧洲无絮山杨快速繁殖体系”中的培养方法进行繁殖的过程中，主要问题如下：灭菌方法不可行，在75％酒精中约30～60秒，在0.1％的升汞中灭菌5～10分，无菌水冲洗3～5遍，褐化率达到85％～100％，褐化会导致培育苗难以成活，而褐化率越高表明培育苗的成活率就越低；利用不定芽诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+0.05NAAmg/L进行腋芽诱导，不定芽诱导率仅为14.2％～25.8％；对于增殖培养基MS+6-BA0.5mg/L+0.05NAAmg/L，植株增殖率为2～3倍，且生长植株平均为1.0～1.5cm，最终导致培育苗的成活率低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种欧洲山杨品系组培育苗方法，能够提高育苗的成活率。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；3)将所述步骤2)得到的欧洲山杨不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；4)将所述步骤3)得到的1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。优选的，所述步骤1)中茎段的长度为0.5～2cm。优选的，所述步骤1)中酒精溶液中乙醇的体积浓度为70～75％，所述酒精溶液浸泡的时间为10～20s；所述消毒剂为氯化汞溶液，所述氯化汞溶液中氯化汞的质量浓度为0.05～0.15％，所述消毒剂消毒的时间为1.5～4.5min。优选的，所述步骤2)中的不定芽分化培养基包括以下浓度的组分：NH4NO3150～250mg/L、KNO3150～200mg/L、CaCl240～55mg/L、MgSO4170～200mg/L、Ca(NO3)2260～290mg/L、K2SO4140～160mg/L、KH2PO4170～200mg/L、KI0.41～0.42mg/L、H3BO32.5～3.5mg/L、MnSO411～12mg/L、ZnSO44.0～4.5mg/L、Na2MoO40.12～0.13mg/L、CuSO40.012～0.013mg/L、FeSO413.0～14.5mg/L、Na2-EDTA18～19mg/L、肌醇40～60mg/L、盐酸吡哆醇0.2～0.3mg/L、烟酸0.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素2～3mg/L、甘氨酸0.5～1.5mg/L、6-苄基腺嘌呤0.3～1.0mg/L，余量为水。优选的，所述分化培养的条件包括：所述培养的温度为20～30℃；所述培养的光照时间为10～15h/d；所述培养的光照强度为3500～5000Lx；所述培养的光源为三基色色温6500k荧光灯；所述培养的环境湿度为70～80％。优选的，所述步骤3)中的继代增殖培养基包括以下浓度的组分：KNO3300～400mg/L、NH4NO3350～450mg/L、CaCl290～100mg/L、MgSO4330～400mg/L、Ca(NO3)2500～600mg/L、K2SO4550～650mg/L、KH2PO4350～400mg/L、FeSO425～30mg/L、Na2-EDTA35～40mg/L、KI0.05～1.0mg/L、H3BO36.0～6.5mg/L、MnSO420～25mg/L、ZnSO48.0～9.0mg/L、Na2MoO40.2～0.3mg/L、CuSO40.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素3～8mg/L、烟酸0.3～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg/L、肌醇90～110mg/L、甘氨酸1～3mg/L、6-苄基腺嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.03～0.08mg/L，余量为水。优选的，所述继代培养的条件包括：所述培养的温度为20～30℃；所述培养的光照时间为10～15h/d；所述培养的光照强度为3500～5000Lx；所述培养的光源为三基色色温6500k荧光灯；所述培养的环境湿度为70～80％。优选的，所述步骤4)中的不定芽生根培养基包括以下浓度的组分：KNO3300～400mg/L、NH4NO3350～450mg/L、CaCl290～100mg/L、MgSO4330～400mg/L、Ca(NO3)2500～600mg/L、K2SO4550～650mg/L、KH2PO4350～400mg/L、FeSO425～30mg/L、Na2-EDTA35～40mg/L、KI0.05～1.0mg/L、H3BO36.26.0～6.5mg/L、MnSO420～25mg/L、ZnSO48.0～9.0mg/L、Na2MoO40.2～0.3mg/L、CuSO40.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素3～8mg/L、烟酸0.3～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg/L、肌醇90～110mg/L、甘氨酸1～3mg/L、乙哚丁酸1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.005～0.015mg/L，余量为水。优选的，所述生根培养的条件包括：所述培养的温度为20～30℃；所述培养的光照时间为10～15h/d；所述培养的光照强度为2500～3500Lx；所述培养的光源为三基色色温6500k荧光灯；所述培养的环境湿度为70～80％。本专利技术还包括将上述技术方案得到的欧洲山杨再生组培苗进行两步生根，所述两步生根包括以下步骤：1)将欧洲山杨再生组培苗的根部用高锰酸钾溶液浸泡后，栽入基质内培养，得到再次生根的欧洲山杨组培苗；所述培养过程中第1～3天环境湿度为80～95％，第4～7天环境湿度为70～85％，第8～10天环境湿度为45～55％，第11天以后为自然环境湿度；2)将所述步骤1)得到的再次生根的欧洲山杨组培苗移栽到自然光下培养；所述自然光下培养的昼温为21～29℃，所述培养的夜温为18～21℃，所述培养的环境湿度为80～95％。本专利技术提供了一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；3)将所述步骤2)得到的欧洲山杨不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；4)将所述步骤3)得到的1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。

【技术特征摘要】
1.一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；3)将所述步骤2)得到的欧洲山杨不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；4)将所述步骤3)得到的1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。2.根据权利要求1所述的欧洲山杨品系组培育苗方法，其特征在于，所述步骤1)中茎段的长度为0.5～2cm。3.根据权利要求1所述的欧洲山杨品系组培育苗方法，其特征在于，所述步骤1)中酒精溶液中乙醇的体积浓度为70～75％，所述酒精溶液浸泡的时间为10～20s所述消毒剂为氯化汞溶液，所述氯化汞溶液中氯化汞的质量浓度为0.05～0.15％，所述消毒剂消毒的时间为1.5～4.5min。4.根据权利要求1所述的欧洲山杨品系组培育苗方法，其特征在于，所述步骤2)中的不定芽分化培养基包括以下浓度的组分：NH4NO3150～250mg/L、KNO3150～200mg/L、CaCl240～55mg/L、MgSO4170～200mg/L、Ca(NO3)2260～290mg/L、K2SO4140～160mg/L、KH2PO4170～200mg/L、KI0.41～0.42mg/L、H3BO32.5～3.5mg/L、MnSO411～12mg/L、ZnSO44.0～4.5mg/L、Na2MoO40.12～0.13mg/L、CuSO40.012～0.013mg/L、FeSO413.0～14.5mg/L、Na2-EDTA18～19mg/L、肌醇40～60mg/L、盐酸吡哆醇0.2～0.3mg/L、烟酸0.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素2～3mg/L、甘氨酸0.5～1.5mg/L、6-苄基腺嘌呤0.3～1.0mg/L，余量为水。5.根据权利要求1或4所述的欧洲山杨品系组培育苗方法，其特征在于，所述分化培养的条件包括：所述培养的温度为20～30℃；所述培养的光照时间为10～15h/d；所述培养的光照强度为3500～5000Lx；所述培养的光源为三基色色温6500k荧光灯；所述培养的环境湿度为70～80％。6.根据权利要求1所述的欧洲山杨品系组培育苗方法，其特征在于，所述步骤3)中的继代增殖培养基包括以下浓度的组分：KNO3300～400mg/L、NH4NO3350～450mg/L、CaCl290～100mg/L、MgSO4330～400mg/L、Ca(NO3)2500～600mg/L、K2SO4550～650mg/L、KH2PO4350～400mg/L、FeSO425～30mg/L、Na...

【专利技术属性】
技术研发人员：白卉，邢亚娟，毕金鸽，王艳敏，卢慧颖，郭成博，李京，兰岚，李祺，
申请(专利权)人：黑龙江省林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23