一种白牛筋木的组培增殖方法技术

本发明专利技术公开了一种白牛筋木的组培增殖方法，具体步骤包括外植体的选取、外植体的灭菌、无菌系建立和继代增殖；外植体的选取是在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；外植体的灭菌是剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡20‑30min，然后用无菌水清洗4次。本发明专利技术采用组织培养增殖方法，为大批量育苗，降低育苗成本，提高育苗效率奠定基础。

In vitro proliferation method of white Dichotomanthes wood

The invention discloses a method for in vitro proliferation of white Dichotomanthes wood, concrete steps including explant selection, sterile line sterilization of explants, the establishment and subculture; selection of explants in March to May in fine weather, their Dichotomanthes had vegetative branches of tender stem segments or stem apex; sterilization the explants was cut off on the leaf stems, with detergent or stem stem tip, and then tap water rinse, the stem or stem tip into the clean workbench, with 75% alcohol for 30s, then sterilized distilled water alcohol rinse, and then immersed into the mercuric chloride solution 0.1% in 20 30min, and then washed 4 times with sterile water. The invention adopts the method of tissue culture and multiplication, so as to lay the foundation for mass seedling raising, reducing the cost of raising seedlings and improving the efficiency of seedling raising.

【技术实现步骤摘要】
一种白牛筋木的组培增殖方法
本专利技术涉及一种树木的增殖方法，具体是一种白牛筋木的组培增殖方法。
技术介绍
牛筋条在植物分类上属于蔷薇科牛筋条属，产于云南的只有一种和一个变种。云南省农业科学院园艺作物研究所结合云南山高坡陡、冬春干旱的实际，就地取材，在总结群众经验的基础上，对牛筋条植物进行了研究。根据初步观察，牛筋条无论嫁接苹果和梨都有矮化树体和提早结果的明显效果，可以一砧多用，是一个很有希望的苹果和梨的实生矮化砧。但牛筋条是常绿灌木，四季常绿，主根发达，入土很深，须根少，有抗早耐瘠的一面，又有不耐移栽、定植的一面，一般嫁接苗由于须根少，移苗定植后缓苗期长，影响生长。白牛筋木的繁殖方法主要是种籽繁殖和扦插繁殖。种籽繁殖的实生苗因为主根发达，入土深，须根少，又是常绿树，所以移栽成活率低；扦插繁殖，除了要求外界具有一定的湿度、温度、空气和自生以及外界具备充足营养物质外，还需要一些微量的特殊活性物质，操作复杂，由于牛筋条扦插生根困难，育苗成本高，效率低，影响了其推广速度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高育苗效率、降低育苗成本的白牛筋木的组培增殖方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种白牛筋木的组培增殖方法，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡20-30min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30-40ML，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段5-8个，密封后将其放入培养室进行培养；（4）继代增殖：牛筋条在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；代培养所用培养基为MS+1-2mg6BA+0.05-0.5%NAA，每瓶培养基为50ML，接入无菌系的茎段3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一定，每20-25d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，牛筋条增殖系数达到13-15。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤（1）中的茎段或茎尖用质量百分浓度为75%的酒精消毒30秒，再用质量百分浓度为0.1%的升汞消毒25min。作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤（3）和步骤（4）中的培养室条件为：培养室温度控制在25-27℃，每天光照12h，光照强度为1000-1200Lx。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用组织培养增殖方法，对白牛筋木矮化砧木进行大批量生产，降低了育苗成本，提高了育苗效率。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。实施例1一种白牛筋木的组培增殖方法，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡20min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30mL，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段5个，密封后将其放入培养室进行培养；控制好培养所需的光照和温度条件，避免外界对培养室的污染，及时清除被污染的茎段和培养基；培养室温度控制在25℃，每天光照12h，光照强度为1000Lx。（4）继代增殖：牛筋条在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；代培养所用培养基为MS+1mg6BA+0.05%NAA，每瓶培养基为50ML，接入无菌系的茎段3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一定，每20d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，牛筋条增殖系数达到13；培养室温度控制在25℃，每天光照12h，光照强度为1000Lx。实施例2一种白牛筋木的组培增殖方法，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡25min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基35mL，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段6个，密封后将其放入培养室进行培养；控制好培养所需的光照和温度条件，避免外界对培养室的污染，及时清除被污染的茎段和培养基；培养室温度控制在26℃，每天光照12h，光照强度为1100Lx。（4）继代增殖：牛筋条在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；代培养所用培养基为MS+1.5mg6BA+0.2%NAA，每瓶培养基为50ML，接入无菌系的茎段3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一定，每22d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，牛筋条增殖系数达到14；培养室温度控制在26℃，每天光照12h，光照强度为1100Lx。实施例3一种白牛筋木的组培增殖方法，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡30min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基40mL，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段8个，密封后将其放入培养室进行培养；控制好培养所需的光照和温度条件，避免外界对培养室的污染，及时清除被污染的茎段和培养基；培养室温度控制在27℃，每天光照12h，光照强度为1200Lx。（4）继代增殖：牛筋条在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；代培养所用培养基为MS+2mg6BA+0.5%NAA，每瓶培养基为50ML，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白牛筋木的组培增殖方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡20‑30min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30‑40ML，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段5‑8个，密封后将其放入培养室进行培养；（4）继代增殖：牛筋条在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；代培养所用培养基为MS+1‑2mg6BA+0.05‑0.5%NAA，每瓶培养基为50ML，接入无菌系的茎段3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一定，每20‑25d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，牛筋条增殖系数达到13‑15。...

【技术特征摘要】
1.一种白牛筋木的组培增殖方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）外植体的选取：在3月至5月的晴好天气，剪取牛筋条当年生营养枝的幼嫩茎段或茎尖；（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗洁精清洗茎段或茎尖，再用自来水冲洗干净，将茎段或茎尖放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡20-30min，然后用无菌水清洗4次；（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30-40ML，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，将消毒好的茎段或茎尖剪成长为2cm的茎段，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段5-8个，密封后将其放入培...

【专利技术属性】
技术研发人员：李坤明，陈伟，陈瑶，胡忠荣，万萌，
申请(专利权)人：云南省农业科学院园艺作物研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53