扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法技术

本发明专利技术公开了扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，包括如下步骤：1)外植体采集：采集幼嫩的茎段，去除叶片，清水冲洗后作为外植体备用；2)外植体消毒：对步骤1)得到的外植体进行浸泡消毒，并用无菌水冲洗；3)初代培养：将步骤2)得到的消毒处理好的外植体接种于诱导培养基中进行培养；4)继代培养：将步骤3)诱导培养基中形成的不定芽分离切割，转接入继代培养基中进行培养；5)生根培养：选取步骤4)得到的生长健壮的增殖苗转入生根培养基中进行培养；6)移栽：待根系发育完成，洗去基部培养基，炼苗10天后移栽入轻基质中。该方法具有种苗繁殖速度快、生产不受季节影响、移栽成活率高、种苗一致性好等优点，为扁桃斑鸠菊的规模化和标准化生产提供了工艺方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，特别是涉及扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法。
技术介绍
扁桃斑鸠菊(VernoniaamygdalinaDel.)又名桃叶斑鸠菊、杏叶斑鸠菊、神奇树、苦树、南非树、南非叶，为菊科斑鸠菊属植物，原产于非洲。扁桃斑鸠菊叶子可以安全食用，在尼日利亚等地被当作一种蔬菜。其叶片具有独特的气味和苦涩感，因而常被称为苦叶，可入药，在治疗肿瘤尤其是防治乳腺癌、降血压方面极具潜力。扁桃斑鸠菊在东南亚及台湾等地民间应用较多，而中国大陆则相对比较陌生，近年来两广地区陆续有引进，但母本数量和相关应用研究较少。采用组织培养技术建立其无性快繁技术体系，可以提高其繁殖系数、实现周年生产、保障种苗的品质，并且有利于种质资源保存，加快推进其产业化和标准化生产，也为更深层次的研究提供了技术平台。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，该方法具有种苗繁殖速度快、生产不受季节影响、移栽成活率高、种苗一致性好等优点，为扁桃斑鸠菊的规模化和标准化生产提供了工艺方法。本专利技术所述的扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，包括以下步骤：1)外植体采集：采集幼嫩的茎段，去除叶片，清水冲洗后作为外植体备用；2)外植体消毒：对步骤1)得到的外植体进行浸泡消毒，并用无菌水冲洗；3)初代培养：将步骤2)得到的消毒处理好的外植体接种于诱导培养基中进行培养；4)继代培养：将步骤3)诱导培养基中形成的不定芽分离切割，转接入继代培养基中进行培养；5)生根培养：选取步骤4)得到的生长健壮的增殖苗转入生根培养基中进行培养；6)移栽：待根系发育完成并炼苗后，洗去基部培养基，移栽入轻基质中。本专利技术步骤1)所述的采集幼嫩的茎段，是指选取生长健壮、无病虫害的优良植株，剪取木质化程度较轻的当年生嫩枝为外植体。步骤2)所述的外植体消毒，优选将步骤1)得到的外植体截成长1.2-1.5cm的带节小段，剪去叶片，只保留叶柄基部(长约0.5cm)，流水冲洗20min备用；在超净工作台上，用75％(v/v)酒精浸泡10s，0.1％升汞溶液振荡消毒8min，再用无菌水冲洗5次洗去残留药液，用无菌滤纸吸干水分后，切去茎段两端和叶柄上部少许(保留长度约0.2cm)，备用。步骤3)所述的初代培养，即诱导无菌芽，在超净工作台上将步骤2)得到的外植体茎段接种于诱导培养基上，诱导培养基为MS基本培养基附加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L和萘乙酸(NAA)0.05mg/L，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，蔗糖和琼脂粉添加量分别为每L培养基30g、6g，灭菌前培养基pH调整为6.0，培养室温度为(23±2)℃，光照强度1500-2500lx，光照时间为12h/d。在诱导培养基中，侧芽易于诱导且生长迅速，诱导率可达70％，以春夏季消毒效果更佳；初代培养3周时，侧芽可高达3-4cm，具3张以上叶片，可转入继代培养基进行继代培养。步骤4)所述的继代培养，待无菌芽生长至3-4cm时，将其分段切割，逐段转入继代培养基进行培养，每3周左右继代转接一次；培养室光照时间为16h/d，其他培养条件同初代培养；继代培养基为MS-z+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+PP333(多效唑)0.05mg/L，所述的MS-z培养基每升中所含的组分及浓度(mg/L)如下：大量元素：硝酸钾1900、硝酸铵412.5、二水氯化钙880、七水硫酸镁370、磷酸二氢钾170、七水硫酸亚铁27.8、乙二胺四乙酸二钠37.3；微量元素：四水硫酸锰22.3、七水硫酸锌8.6、硼酸3.1、二水钼酸钠0.25、碘化钾0.83、五水硫酸铜0.025、六水氯化钴0.025；有机物：肌醇100.0、甘氨酸2.0、盐酸吡哆醇(VB6)0.5、烟酸0.5、盐酸硫胺素(VB1)0.1；其它：琼脂8000、蔗糖40000、pH6.0；扁桃斑鸠菊每个继代周期增殖系数可达4.0，且试管苗生长较快，培养时间超过4周即易出现黄叶和小芽死亡的情况，影响增殖效率。试管苗对激素较为敏感，6-BA浓度超过0.3mg/L时容易出现玻璃化现象，当浓度达到0.5mg/L时，玻璃化现象尤为严重，因此培养过程中需严格控制激素浓度。光照强度为1500-2500lx时，光照时间优选16h。步骤5)所述的生根培养，优选选取叶片数4片以上、高度2cm以上的增殖苗转入生根培养基进行培养，生根培养基选用1/2MS作为基本培养基(仅大量元素减半)，附加吲哚丁酸IBA0.1mg/L，即1/2MS+IBA0.1mg/L，光照时间为每天16h，以促使植株健壮；生根培养2周时，生根率可达100％，株高5cm左右，植株生长健壮，根系发达；培养基中附加激素浓度IBA超过0.15mg/L，会造成植株徒长，节间过长；NAA浓度超过0.05mg/L极易出现愈伤组织，影响生根质量和移栽成活率。步骤6)所述的移栽，优选生根培养2周并在炼苗棚炼苗10天后，移栽入轻基质容器中，轻基质为泥炭土和珍珠岩的混合基质(泥炭土：珍珠岩＝3:1)，移栽前一天先用0.5％(w/w)高锰酸钾溶液消毒备用，移栽后加强管理，待苗高30cm时即可供大田栽培或山坡造林，移栽成活率可达95％以上。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、首次采用组织培养技术进行扁桃斑鸠菊的种苗繁殖，建立了一套高效的组培快繁技术体系，该方法能快速大量繁殖试管种苗，不受季节限制，也有利于种质资源的保存。2、本专利技术中的技术工艺体系完全适合扁桃斑鸠菊的试管苗繁殖。扁桃斑鸠菊试管苗对激素较为敏感，对6-BA和NAA浓度非常敏感，在继代培养中易发生玻璃化，6-BA浓度超过0.3mg/L时容易出现玻璃化现象，当浓度达到0.5mg/L时，玻璃化现象尤为严重，因此培养过程中需严格控制激素浓度。生根培养基中附加激素浓度IBA超过0.15mg/L，会造成植株徒长，节间过长，NAA浓度超过0.05mg/L极易出现愈伤，影响生根质量和移栽成活率。本专利技术在大量试验摸索的基础上，对继代培养基配方、生根培养基配方和各环节培养条件均做了大量的试验，得到本专利技术的方法。3、通过本专利技术中的技术流程，得到的扁桃斑鸠菊组培瓶苗和移栽袋苗植株健壮、成活率高、一致性好，便于进行标准化生产，便于实现产业化。生根培养2周时，生根率可达100％，株高5cm左右，植株生本文档来自技高网...

【技术保护点】
扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：1)外植体采集：采集幼嫩的茎段，去除叶片，清水冲洗后作为外植体备用；2)外植体消毒：对步骤1)得到的外植体进行浸泡消毒，并用无菌水冲洗；3)初代培养：将步骤2)得到的消毒处理好的外植体接种于诱导培养基中进行培养；4)继代培养：将步骤3)诱导培养基中形成的不定芽分离切割，转接入继代培养基中进行培养；5)生根培养：选取步骤4)得到的生长健壮的增殖苗转入生根培养基中进行培养；6)移栽：待根系发育完成并炼苗后，洗去基部培养基，移栽入轻基质中；步骤3)所述的诱导培养基为MS+6‑BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L；步骤4)所述的继代培养基为MS‑z+6‑BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+PP3330.05mg/L，所述的MS‑z培养基每升中所含的组分及浓度(mg/L)如下：大量元素：硝酸钾1900、硝酸铵412.5、二水氯化钙880、七水硫酸镁370、磷酸二氢钾170、七水硫酸亚铁27.8、乙二胺四乙酸二钠37.3；微量元素：四水硫酸锰22.3、七水硫酸锌8.6、硼酸3.1、二水钼酸钠0.25、碘化钾0.83、五水硫酸铜0.025、六水氯化钴0.025；有机物：肌醇100.0、甘氨酸2.0、盐酸吡哆醇(VB6)0.5、烟酸0.5、盐酸硫胺素(VB1)0.1；其它：琼脂8000、蔗糖40000、pH 6.0；步骤5)所述的生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L。...

【技术特征摘要】
1.扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)外植体采集：采集幼嫩的茎段，去除叶片，清水冲洗后作为外植
体备用；
2)外植体消毒：对步骤1)得到的外植体进行浸泡消毒，并用无菌水
冲洗；
3)初代培养：将步骤2)得到的消毒处理好的外植体接种于诱导培养
基中进行培养；
4)继代培养：将步骤3)诱导培养基中形成的不定芽分离切割，转接
入继代培养基中进行培养；
5)生根培养：选取步骤4)得到的生长健壮的增殖苗转入生根培养基
中进行培养；
6)移栽：待根系发育完成并炼苗后，洗去基部培养基，移栽入轻基
质中；
步骤3)所述的诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L；
步骤4)所述的继代培养基为MS-z+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+PP333
0.05mg/L，所述的MS-z培养基每升中所含的组分及浓度(mg/L)如下：
大量元素：硝酸钾1900、硝酸铵412.5、二水氯化钙880、七水硫酸
镁370、磷酸二氢钾170、七水硫酸亚铁27.8、乙二胺四乙酸二钠37.3；
微量元素：四水硫酸锰22.3、七水硫酸锌8.6、硼酸3.1、二水钼酸

【专利技术属性】
技术研发人员：王华宇，陈乃明，杨利平，陈丽文，何贵整，时群，梁刚，蔡林，陈乃健，吴红英，吕月保，
申请(专利权)人：钦州市林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45