一种获得邳半夏转基因愈伤组织的遗传转化方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体为一种获得邳半夏转基因愈伤组织的遗传方法。本发明专利技术包括邳半夏愈伤组织的诱导培养，带有GUS基因的植物高效表达载体转入根癌农杆菌，农杆菌遗传转化愈伤，转化受体材料的继代增殖培养及抗性胚性愈伤组织的筛选，抗性愈伤组织的继代增殖培养，PCR检测和GUS基因的检测等。本方法在邳半夏愈伤组织中表达GUS基因，成功地得到邳半夏愈伤组织遗传转化方法。本发明专利技术方法获得的邳半夏转基因愈伤组织可在邳半夏基因工程，细胞工程，代谢工程及邳半夏遗传转化体系的建立中具有广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种获得邳半夏转基因愈伤组织的遗传转化方法，其特征在于利用邳半夏叶柄作为外植体诱导愈伤组织，并经过培养获得愈伤，用根癌农杆菌介导，将带有GUS基因的pCAMBIA1301质粒导入邳半夏愈伤组织，PCR检测外缘潮霉素磷酸转移酶基因的整合情况，用组织化学方法检测GUS基因在组织中的表达情况，获得邳半夏的转基因愈伤组织；具体步骤为：  （1）邳半夏愈伤组织的诱导培养：选择幼嫩的叶柄为愈伤组织诱导用外植体，在愈伤组织诱导培养基上进行培养，在叶柄被切开的部位逐渐产生白色的愈伤组织，叶柄不断膨大；上述愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础，再添加激素6‑BA和NAA而组成；  （2）邳半夏愈伤组织的诱导培养：将叶柄诱导的白色愈伤转接入胚性愈伤诱导培养基上，获得致密的、硬度增加的胚性愈伤组织；该胚性愈伤诱导培养基是以MS培养基为基础，再添加激素2，4‑D、6‑BA和KT而组成；  （3）遗传转化：利用根癌农杆菌介导法，将含GUS基因的植物表达载体pCAMBIA1301转化根癌农杆菌，以邳半夏胚性愈伤组织为受体进行遗传转化；  （4）抗性胚性愈伤组织的脱菌、筛选和增殖培养：经过遗传转化，然后在恢复培养基上进行脱菌培养，在筛选培养基上进行筛选培养，获得具有潮霉素抗性的愈伤组织；将抗性愈伤组织接入胚性愈伤组织继代培养基进行增殖培养，增加抗性愈伤组织的数量；  （5）PCR检测和GUS组织化学染色方法检测转基因愈伤：PCR法扩增转基因愈伤总DNA获得pCAMBIA1301质粒上带有的潮霉素磷酸转移酶基因；GUS组织化学染色，将愈伤组织浸入配制好的GUS染色液中，37oC染色过夜，愈伤组织中的蓝色为报告基因GUS组织化学染色，表明外源基因已经整合到受体细胞的染色体中并表达。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹小迎，蒋继宏，张文娟，张盼盼，陈集双，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32