定量检测CCL17基因表达的引物和探针及其应用制造技术

本发明专利技术公开了定量检测CCL17基因表达的引物和探针及其应用。本发明专利技术提供了试剂盒，包括DNA分子甲，所述DNA分子甲由引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；所述探针甲为序列表中序列3所示的单链DNA分子。本发明专利技术提供的引物对和探针，可以用于定量检测CCL17基因表达水平，从而用于肿瘤细胞系的辅助鉴定或肿瘤患者的辅助诊断，将在医学检测领域发挥重要的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种定量检测CCL17基因表达的引物和探针及其应用。
技术介绍
rCCL17【chemokine(C-C motif)ligand 17】基因是位于16号染色体q臂的Cys-Cys(CC)基因簇中的一种。CC细胞因子的特点是两个毗邻的半胱氨酸，可以分泌蛋白参与免疫调节和炎性过程。该基因编码的趋化因子对T淋巴细胞有趋化作用，而非单核细胞或粒细胞。该基因的产物的受体是CCR4和CCR8，这一趋化因子对T细胞在胸腺的发育、成熟T细胞的活化有重要作用。已发现恶性霍奇金淋巴瘤的特征性细胞高表达CCL17，且分泌到血清中。CCL17与恶性细胞、调节性T细胞和Th2细胞表达的趋化因子受体CCR4相结合。高CCL17水平与免疫调节细胞因子和趋化因子共同作用于炎性的霍奇金淋巴瘤微环境，促进肿瘤的发生、维持和进展。血清CCL17水平可预测霍奇金淋巴瘤的治疗结局；CCL17水平与经典霍奇金淋巴瘤的肿瘤负荷有关，而且治疗后的CCL17的变化与患者的治疗反应相关。欧洲霍奇金研究组的大型霍奇金淋巴瘤临床试验研究发现治疗前CCL17(TARC)水平与已有的临床危险因素有关，而且可以预测治疗反应。此外，CCL17(TARC)水平也参与了一个新的预测治疗反应的多变量模型。这些数据显示该趋化因子可作为霍奇金淋巴瘤的生物标记物。该研究中血清CCL17的水平采用双抗夹心ELISA(R&D systems)。这些结果显示，血清CCL17可作为经典霍奇金淋巴瘤的生物标记物。此外，血清CCL17水平升高也与进展性黑色素瘤患者树突状细胞免疫治疗后的无进展生存期相关。也有报道，CCL17与过敏性皮炎，哮喘、荨麻疹，系统性红斑狼疮等过敏及免疫性疾病相关。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种试剂盒。本专利技术提供的试剂盒，包括DNA分子甲，所述DNA分子甲由引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；所述探针甲为序列表中序列3所示的单链DNA分子。上述试剂盒的功能为如下1)-3)中任一种：1)辅助诊断肿瘤患者；2)辅助鉴定肿瘤细胞系；3)定量检测CCL17基因的表达量。上述试剂盒中，所述试剂盒还包括含有CCL17基因或其片段的阳性对照质粒。上述试剂盒中，所述阳性对照质粒为含有序列表中序列7所示的CCL17基因片段的重组质粒。上述试剂盒中，所述阳性对照质粒为将pMD18-T载体与序列表中序列7所示的CCL17基因片段连接得到的重组质粒。上述试剂盒中，所述序列表中序列1所示的单链DNA分子、所述序列表中序列2所示的单链DNA分子、所述探针甲的摩尔比为40:40:25。上述试剂盒中，所述肿瘤为淋巴肿瘤或白血病；所述肿瘤患者为淋巴肿瘤患者或白血病患者；所述白血病患者具体为急性淋巴细胞白血病患者，为急性淋巴细胞白血病初诊患者或难治复发患者。所述淋巴肿瘤具体为伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤；伯基特淋巴瘤细胞系为Raji；套细胞淋巴瘤细胞系为Marver；组织细胞淋巴瘤细胞系为U937；人淋巴瘤细胞系为Romas；所述白血病为急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病急变或急性髓性白血病(AML)；急性淋巴细胞白血病细胞系为BV173、NALM-6、Romas、SUP-B15、Molt4、Jurkat或6T-CEM；慢性粒细胞白血病急变细胞系为MEG-1或K562；急性髓性白血病细胞系为HL60或NB4。上述试剂盒还包括DNA分子乙，所述DNA分子乙由引物对乙和探针乙组成，所述引物对乙由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成；所述探针乙为序列表中序列6所示的单链DNA分子。上述试剂盒还包括内参对照质粒，所述内参对照质粒为含有序列表中序列8所示的ABL1基因片段的重组质粒。上述试剂盒中，所述阳性对照质粒为将pMD18-T载体与序列表中序列8所示的ABL1基因片段连接得到的重组质粒。上述试剂盒中，所述DNA分子乙中，所述序列表中序列4所示的单链DNA分子、所述序列表中序列5所示的单链DNA分子、所述探针乙的摩尔比为40:40:25。上述DNA分子甲在制备试剂盒中的应用也是本专利技术保护的范围。上述DNA分子甲和上述阳性对照质粒在制备试剂盒中的应用也是本专利技术保护的范围。上述试剂盒的功能为如下1)-3)中任一种：1)辅助诊断肿瘤患者；2)辅助鉴定肿瘤细胞系；3)定量检测CCL17基因的表达量；所述肿瘤患者为淋巴肿瘤患者或白血病患者；所述白血病患者具体为急性淋巴细胞白血病患者，为急性淋巴细胞白血病初诊患者或难治复发患者。所述淋巴肿瘤具体为伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤；伯基特淋巴瘤细胞系为Raji；套细胞淋巴瘤细胞系为Marver；组织细胞淋巴瘤细胞系为U937；人淋巴瘤细胞系为Romas；所述白血病为急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病急变或急性髓性白血病(AML)；急性淋巴细胞白血病细胞系为BV173、NALM-6、Romas、SUP-B15、Molt4、Jurkat或6T-CEM；慢性粒细胞白血病急变细胞系为MEG-1或K562；急性髓性白血病细胞系为HL60或NB4。检测CCL17基因的表达的物质在制备检测辅助诊断肿瘤患者试剂盒或辅助鉴定肿瘤细胞系试剂盒中的应用也是本专利技术保护的范围；所述肿瘤具体为淋巴肿瘤或白血病。上述检测CCL17基因表达的物质为第一个目的提供的试剂盒。本专利技术设计了定量检测CCL17基因表达的引物和探针，建立了实时荧光定量检测CCL17的方法，可以用于定量检测CCL17基因表达水平，并发现定量检测CCL17在ALL患者中的表达水平具有临床意义，从而用于肿瘤细胞系的辅助鉴定或肿瘤患者的辅助诊断，将在医学检测领域发挥重要的作用。附图说明图1为阳性对照质粒的RQ-PCR荧光标准曲线。图2为引物和探针检测细胞系的结果。图3为引物和探针检测急性淋巴细胞白血病患者的结果。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、检测CCL17表达的特异引物和探针设计针对CCL17基因(NCBI基因库序列号：NM_002987.2，提交时间是2013.12.15，序列7)的设计特异性引物对甲(由上游引物CCL17-FP和下游引物CCL17-RP组成，扩增产物为82bp)和探针甲(探针CCL17-probe)：上游引物CCL17-FP(序列1):5’-CAGGGATGCCATCGTTTTTG-3’；下游引物CCL17-RP(序列2):5’-AACTGCATTCTTCACTCTCTTGTTGT-3’；探针CCL17-probe:FAM-CAGGGCCATCTGTTCGGACCCC-BHQ(序列3)。针对ABL1基因(内参基因；NCBI基因库序列号：NM_005157)设计的特异性引物对乙(由上游引物ABL1-F和下游引物ABL1-R组成，扩增产物为124bp)和探针乙(探针ABL1-T-probe)：上游引物ABL1-F(序列表的序列4)：5’-TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3’本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，包括DNA分子甲，所述DNA分子甲由引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；所述探针甲为序列表中序列3所示的单链DNA分子。

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，包括DNA分子甲，所述DNA分子甲由引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；所述探针甲为序列表中序列3所示的单链DNA分子。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的功能为如下1)-3)中任一种：1)辅助诊断肿瘤患者；2)辅助鉴定肿瘤细胞系；3)定量检测CCL17基因的表达量。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有CCL17基因或其片段的阳性对照质粒。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照质粒为含有序列表中序列7所示的CCL17基因片段的重组质粒。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照质粒为将pMD18-T载体与序列表中序列7所示的CCL17基因片段连接得到的重组质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，刘开彦，黄晓军，冯永怀，王卫敏，王树娟，姚秋妹，周娇，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京;11