抗KRS单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种选择性地与KRS(Lysyl‑tRNA synthetase，赖氨酰‑tRNA合成酶)结合的抗KRS抗体及其用途，具体而言，本发明专利技术涉及与人KRS结合的抗体或其片段、该抗体或其片段的生产方法、以及包含该抗体或其片段的癌或自身免疫性疾病和炎性疾病诊断用组合物。本发明专利技术的抗体或其片段与人KRS特异性结合，与包含相同的ARS家族的其它蛋白质无交叉反应性，能够进行KRS检测和抑制，因而能够用于KRS检测和KRS相关疾病的癌或自身免疫性疾病和炎性疾病诊断目的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请要求2013年12月30日提交的韩国专利申请第10-2013-0166791号的优先权，上述说明书整体为本申请的参考文献。本专利技术涉及选择性地与KRS(Lysyl-tRNA synthetase，赖氨酰-tRNA合成酶)结合的抗KRS抗体及其用途，更具体而言，本专利技术涉及与人KRS结合的抗体或其片段、该抗体或其片段的生产方法、以及包含该抗体或其片段的癌或自身免疫性疾病和炎性疾病诊断用组合物。
技术介绍
氨酰-tRNA合成酶(ARS)是发挥使特定氨基酸与其对应的tRNA结合的作用的酶，在高等生物的情况下，由包括基于氨基酸种类的20种酶、以及AIMP1(p43)、AIMP2(p38)、AIMP3(p18)等与多合成酶复合物形成有关的3种酶在内的23种酶构成，除了参与多合成酶复合物的酶以外，还有若干种也以自由形态存在。但是，近来，据报道，这些酶除了基本的功能以外，在特定环境下还具有多种多样不同的活性功能，KRS(赖氨酰-tRNA合成酶)就是其中之一。已经明确KRS通过活化巨噬细胞而诱导免疫反应，据报道，由TNF-α促进分泌到细胞外的KRS通过基于p38丝裂原活化蛋白激酶等的信号转导而使巨噬细胞的基于TNF-α的活性增加，或者促进细胞的迁移。另外，近来还明确了KRS与各种各样的疾病有关。基于炎性肌肉疾病患者报道了存在针对KRS的自身抗体；基于作为卢伽雷氏(Lou Gehrig)病的原因的SOD1基因突变患者报道了KRS与该酶结合而参与该疾病；近来，基于癌细胞报道了磷酸化的KRS有助于层粘连蛋白受体的稳定化，因而促进癌细胞的转移。由这样的结果表明，KRS可以存在于自身免疫性疾病和癌患者的血清内，能够用作重要的生物诊断标记物。但是，尽管作为针对以KRS为代表的ARS等的生物标记物具有重要性，但由于ARS等在蛋白结构上有许多类似之处，通过免疫反应由动物得到的抗体显示出与其它ARS也发生结合的交叉反应，很多情况下无法生成高强度的抗体。从具有优异的灵敏度以及无ARS间交叉反应的方面出发，预测本专利技术的抗体是不仅可用于研究、而且可用于诊断并且工业实用性也高的抗体。
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术人在对与KRS特异性结合的抗体进行研究的过程中，从利用噬菌体展示方法制造的文库中找出了与KRS特异性结合的片段，并明确了其序列和结合特异性，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于提供一种与人KRS结合的抗体或其片段。本专利技术的另一目的在于提供一种多核苷酸，其编码上述抗体或其片段。本专利技术的又一目的在于提供一种载体，其包含上述多核苷酸。本专利技术的又一目的在于提供一种细胞，其包含上述载体。本专利技术的又一目的在于提供一种与人KRS结合的抗体或其片段的生产方法。本专利技术的又一目的在于提供一种KRS特异性检测方法，其包括：使抗体或其片段与试样接触的步骤；和对上述抗体或其片段进行检测的步骤。本专利技术的又一目的在于提供一种癌诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。本专利技术的又一目的在于提供一种自身免疫性疾病诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。本专利技术的又一目的在于提供一种炎性疾病诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。用于解决课题的手段为了达到上述目的，本专利技术提供一种与人KRS结合的抗体或其片段，其包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，该抗体轻链可变区(VL)包含：包含序列号1所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L1、包含序列号2所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L2、和包含序列号3所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L3，该抗体重链可变区(VH)包含：包含序列号4所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H1、包含序列号5所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H2、和包含序列号6所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H3。为了达到本专利技术的另一目的，本专利技术提供一种多核苷酸，其编码上述抗体或其片段。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种载体，其包含上述多核苷酸。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种细胞，其包含上述载体。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种与人KRS结合的抗体或其片段的生产方法，该生产方法包括：在多核苷酸进行表达的条件下培养上述细胞、生产包含轻链和重链可变区的多肽的步骤；和由上述细胞或培养上述细胞的培养基回收上述多肽的步骤。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种KRS特异性检测方法，其包括：使抗体或其片段与试样接触的步骤；和对上述抗体或其片段进行检测的步骤。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种癌诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供上述抗体或其片段在癌诊断用制剂制造中的用途。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种个体的癌诊断方法，其通过下述步骤来进行：(a)由个体获得生物学试样的步骤；(b)利用第1项的抗体或其片段测定上述生物学试样内的KRS蛋白质水平的步骤；和(c)将上述KRS蛋白质水平与正常个体的KRS蛋白质水平进行比较的步骤。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种自身免疫性疾病诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供上述抗体或其片段在自身免疫性疾病诊断用制剂制造中的用途。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种个体的自身免疫性疾病诊断方法，其通过下述步骤来进行：(a)由个体获得生物学试样的步骤；(b)利用第1项的抗体或其片段测定上述生物学试样内的KRS蛋白质水平的步骤；和(c)将上述KRS蛋白质水平与正常个体的KRS蛋白质水平进行比较的步骤。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种炎性疾病诊断用组合物，其包含上述抗体或其片段作为有效成分。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供上述抗体或其片段在炎性疾病诊断用制剂制造中的用途。为了达到本专利技术的又一目的，本专利技术提供一种个体的炎性疾病诊断方法，其通过下述步骤来进行：(a)由个体获得生物学试样的步骤；(b)利用第1项的抗体或其片段测定上述生物学试样内的KRS蛋白质水平的步骤；和(c)将上述KRS蛋白质水平与正常个体的KRS蛋白质水平进行比较的步骤。下面，详细说明本专利技术。本专利技术提供一种与人KRS结合的抗体或其片段，其包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，该抗体轻链可变区(VL)包含：包含序列号1所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L1、包含序列号2所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L2、和包含序列号3所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L3，该抗体重链可变区(VH)包含：包含序列号4所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H1、包含序列号5所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H2、和包含序列号6所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H3。赖氨酰-tRNA合成酶(KRS，Lysyl-tRNA synthetase)是促进赖氨酸(Lys)与tRNA的结合的酶，是ARS(氨酰-tRNA合成酶，aminoacyl tRNA synthetase)的一种。本专利技术的KRS通常表示天然型或重组人KRS和人KRS的非人源同族体。在本说明书中，“抗体”、“抗KRS抗体”、“人源化抗KRS抗体”本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与人KRS结合的抗体或其片段，其包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，该抗体轻链可变区(VL)包含：包含序列号1所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L1、包含序列号2所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L2、和包含序列号3所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L3，该抗体重链可变区(VH)包含：包含序列号4所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H1、包含序列号5所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H2、和包含序列号6所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.30 KR 10-2013-01667911.一种与人KRS结合的抗体或其片段，其包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，该抗体轻链可变区(VL)包含：包含序列号1所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L1、包含序列号2所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L2、和包含序列号3所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)L3，该抗体重链可变区(VH)包含：包含序列号4所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H1、包含序列号5所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H2、和包含序列号6所表示的氨基酸序列的互补决定区(CDR)H3。2.如权利要求1所述的抗体或其片段，其与人KRS结合，其特征在于，所述抗体是在轻链可变区包含序列号13的第137位至第246位氨基酸序列、在重链可变区包含序列号13的第1位至第121位氨基酸序列的抗体。3.如权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含序列号13所表示的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述片段为选自由双链抗体、Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、Fv和scFv组成的组中的片段。5.一种多核苷酸，其编码权利要求1的抗体或其片段。6.如权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包含序列号7至12所表示的多核苷酸。7.一种载体，其包含权利要求5所述的多核苷酸。8.一种细胞，其包含权利要求7所述的载体。9.一种与人KRS结合的抗体或其片段的生产方法，该生产方法包括：在多核苷酸进行表达的条件下培养权利要求所述8的细胞、...

【专利技术属性】
技术研发人员：金圣勋，崔渊植，沈炫辅，李南周，朴民花，
申请(专利权)人：医药生命融合研究团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR