抑制AIMP2-DX2和HSP70结合的抗癌剂的筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种抑制AIMP2‑DX2和HSP70结合的抗癌剂的筛选方法。具体而言，这种抗癌剂筛选方法包括在存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2‑DX2或其片段和HSP70或其片段接触的步骤；在存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平的步骤；比较受试物存在情况下的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平的变化的步骤；筛选降低AIMP2‑DX2和HSP70结合水平的受试物的步骤；和确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性的步骤，以及含有用所述方法筛选的抗癌剂这一有效成分的一种抗癌用组合物。HSP70是一种能与在癌的发生和发展中具有关键作用的AIMP2‑DX3直接结合并使其稳定的调节剂，基于这一发现，本发明专利技术可以有效地用于开发具有全新作用机制的抗癌剂。此外，含有根据本发明专利技术方法筛选的抗癌剂这一有效成分的一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，可有效抑制HSP70的表达或抑制HSP70和AIMP2‑DX2的结合，从而降低AIMP2‑DX2的水平且有效预防癌症的发展，因此可有效地应用于癌症治疗剂的研发。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制AIMP2-DX2和HSP70结合的抗癌剂的筛选方法
本申请主张2016年3月7日提交的大韩民国专利申请第10-2016-0027077号的优先权，该说明书的全部内容作为本申请的参考文献。本专利技术涉及一种抑制AIMP2-DX2和HSP70结合的抗癌剂的筛选方法，具体来说，本专利技术涉及一种抗癌剂的筛选方法以及含有使用该方法筛选的抗癌剂作为有效成分的抗癌用组合物，包括以下步骤：(a)存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2-DX2或其片段与HSP70或其片段接触；(b)存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2-DX2和HSP70的结合水平；(c)比较受试物存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2-DX2和HSP70结合水平的变化；(d)筛选降低AIMP2-DX2和HSP70结合水平的受试物；以及(e)确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性。
技术介绍
癌症特异性标志物的开发不仅需要用于癌症诊断，也需要用于癌症特异性治疗。自从细胞毒性疗法(Cytotoxictherapies)最初被用作抗癌剂以来，已在癌症治疗中广泛使用了50多年，然而，除了癌细胞以外它们对其他分裂速度相对较快的器官细胞也起到非特异性的作用，表现出强烈的毒性，并带来严重的副作用。为了克服这种传统抗癌药物的副作用和耐受性，已有研究如何利用正常细胞癌变过程中出现的癌症特异性标记(cancerspecificmarkers)来开发对肿瘤细胞有特异性作用的治疗药物。为了最大程度地降低抗癌药物的毒性，新兴的癌症靶向治疗(cancertargetedtherapies)的关键就是寻找癌细胞特异性基因。同时，热休克蛋白质(HeatShockProtein,HSP)是一种对维持蛋白质稳态起到关键作用的分子伴侣。HSP对于细胞在诸如缺氧等应激状态下的存活至关重要。HSP，尤其是HSP90和HSP70在多种肿瘤中高度表达[MoranoKA,AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,1113:1-14,2007；CalderwoodSKetal,Trendsinbiochemicalsciences,31:164-72,2006]。一些HSP的表达已经被证明与一些癌症中肿瘤细胞的增生、分化和凋亡(apoptosis)有关，表明HSP由于其自身的细胞保护作用而在癌症细胞的存活中发挥着重要作用。据报道，HSP70的过表达诱发小鼠纤维肉瘤细胞中形成肿瘤，而转基因小鼠T-细胞内HSP70的过表达导致小鼠的T细胞淋巴瘤增加[贾亚特拉·M，国际癌症杂志，国际癌症杂志，60:689-93，1995；JS徐等人，《生物化学和生物物理研究通讯》，218:582-7，1996年；VollochVZ等人，癌基因，18:3648-51，1999；墨菲·梅，《致癌作用》，34:1181-8，2013年]。尤其是已知HSP70在保护细胞免于凋亡方面发挥着重要作用。不仅如此，还已知HSP的表达增加与血管的生成、侵袭、转移等有关。[卡尔德伍德·斯克等人，《生化科学的趋势》，31:164-72。2006年；周J等人，《生物化学杂志》，279:13506-13，2004；BrunsAF等人，《PloSone》，7:e48539，2012；孙J等人，《动脉硬化，血栓形成和血管生物学》。24:2238-44，2004年；龚W等人，《肿瘤学报告》，2013年；EustaceBK等人，《细胞周期》，3:1098-100，2004年；尤斯塔斯·贝克等人，《自然细胞生物学》，6:507-14，2004年]。AIMP2(氨酰-tRNA合成酶复合物相互作用多功能蛋白质2，ARS-interactingmulti-functionalprotein2)是参与氨酰-tRNA合成酶复合物(Aminoacyl-tRNAsynthetase：ARSs)形成的蛋白质之一，也被称为p38/JTV-1或p38。有报告称AIMP2作为一种新型的肿瘤抑制剂(tumorsuppressor)，具有通过与Smad2/3直接的相互作用增强TGF-β信号传输的功能，已知AIMP2-DX2是AIMP2的外显子2缺失状态下的变异体，在癌细胞株和组织中特异性表达(韩国注册专利第10-0762995)。如上所述，虽然已知AIMP2-DX2和HSP70分别与肿瘤细胞的分化或存活有关，但不知道它们的相互关系与癌症有着何种相关性。
技术实现思路
【技术课题】因此，本专利技术的专利技术人研究了AIMP2-DX2和HSP70之间的相互作用，结果确认HSP70直接与AIMP2-DX2结合后可使AIMP2-DX2蛋白质稳定，在癌细胞的存活和分化中发挥决定性的作用。因此，鉴于对抑制AIMP2-DX2和HSP70的结合可以抑制细胞分裂和增生的发现，完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的是提供一种抗癌剂的筛选方法，该方法包括以下步骤:(a)在存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2-DX2或其片段和HSP70或其片段接触；(b)在存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2-DX2和HSP70的结合水平；(c)比较受试物存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平的变化；(d)筛选降低AIMP2-DX2和HSP70结合水平的受试物；和(e)确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性。本专利技术的另一目的是提供一种含有用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂这一活性成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物。此外，本专利技术的另一目的是提供一种由用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂这一活性成分构成的用于预防或治疗癌症的药物组合物。本专利技术的另一目的是提供一种须由用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂这一活性成分构成的用于预防或治疗癌症的药物组合物。本专利技术的另一目的是提供用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂在制备预防或治疗癌症的试剂时的用途。本专利技术的另一个目的是提供一种预防或治疗癌症的方法，其特征是向有需要的个体施用有效量的用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂。【技术解决方案】为了达到上述目的，本专利技术提供一种抗癌剂的筛选方法，包括以下步骤:(a)在存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2-DX2或其片段和HSP70或其片段接触；(b)在存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2-DX2和HSP70的结合水平；(c)比较受试物存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平的变化；(d)筛选降低AIMP2-DX2和HSP70结合水平的受试物；和(e)确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性。为了达到本专利技术的另一目的，本专利技术提供一种含有用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂这一活性成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物。此外，为了达到本专利技术的另一目的，本专利技术提供一种由用所述抗癌剂筛选方法筛选的抗癌剂这一活性成分构成的用于预防或治疗癌症的药物组合物。此外本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗癌剂筛选方法，包括以下步骤：(a)在存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2‑DX2或其片段和HSP70或其片段接触；(b)在存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平；(c)比较受试物存在情况下的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2‑DX2和HSP70的结合水平的变化；(d)筛选降低AIMP2‑DX2和HSP70结合水平的受试物；和(e)确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.07 KR 10-2016-00270771.一种抗癌剂筛选方法，包括以下步骤：(a)在存在或不存在受试物的情况下，使AIMP2-DX2或其片段和HSP70或其片段接触；(b)在存在或不存在受试物的情况下，测定AIMP2-DX2和HSP70的结合水平；(c)比较受试物存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平与受试物不存在情况下的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平，以判断受试物引起的AIMP2-DX2和HSP70的结合水平的变化；(d)筛选降低AIMP2-DX2和HSP70结合水平的受试物；和(e)确认所选受试物在细胞或动物中的抗癌活性。2.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征在于，在所述(d)和(e)步骤之间还包括以下步骤：(1)使受试物与表达AIMP2-DX2的细胞接触；(2)测定所述细胞和受试物未接触的对照组细胞中的AIMP2-DX2的蛋白质水平；以及(3)筛选与对照组细胞相比更能降低AIMP2-DX2蛋白质水平的受试物。3.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征在于：所述AIMP2-DX2包括以序列号1表示的氨基酸序列。4.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征在于：所述AIMP2-DX2的片段包括以序列号2表示的氨基酸序列。5.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征在于：所述HSP70包括以序列号3表示的氨基酸序列。6.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征在于：所述HSP70的片段包括以序列号4表示的氨基酸序列。7.根据权利请求项1所述的抗癌剂筛选方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：金圣勋，金旲圭，任世美，
申请(专利权)人：医药生命融合研究团，
类型：发明
国别省市：韩国,KR