本发明专利技术涉及一种猪转录因子coup-tf1及其重组载体和应用，猪转录因子coup-tf1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示，过量表达猪转录因子coup-tf1能够降低CYP11A1、CYP17A1和StAR等基因的表达，并降低猪肉中雄烯酮含量，抑制膻味物质在猪肉中的积累，最终改良猪肉的品质。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种猪转录因子coup-tf1及其重组载体和应用，猪转录因子coup-tf1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示，过量表达猪转录因子coup-tf1能够降低CYP11A1、CYP17A1和StAR等基因的表达，并降低猪肉中雄烯酮含量，抑制膻味物质在猪肉中的积累，最终改良猪肉的品质。【专利说明】猪转录因子coup-tf1及其重组载体和应用
本专利技术属于基因工程领域，特别涉及ー种猪转录因子coup-tfl，还涉及含有猪转录因子coup-tfl的重组载体和应用。
技术介绍
养猪业是我国畜牧业的主体产业，而猪肉则是我国人群主要的动物性食品。与去势公猪相比，全公猪即未去势公猪综合生产效益将提高30%，具有显著的社会与经济价值，但公猪膻味的存在使其难以被消费者接受，消除或降低公猪膻味是推广全公猪饲养必须解决的问题。研究表明，公猪膻味主要来源于沉积于猪肉脂肪组织中的两种物质:粪臭素和雄烯酮(5 a -留-16-稀-3 a -酮)，其中雄烯酮是睾丸组织间质细胞合成的留体化合物，具有尿臊味，雄烯酮通过精索静脉释放到血液中而后进人唾液腺和脂肪组织，并在肝脏中代谢，经尿液排泄；粪臭素是日粮和内源蛋白质分解产生的色氨酸在大肠厌氧微生物作用下降解而产生的芳香族物质，具有粪臭味；粪臭素经肠壁吸收入血，主要经肝脏代谢由尿排出，另一部分则贮存于脂肪组织。因此，降低雄烯酮和粪臭素的浓度可以达到消除膻味的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的之ー在于提供ー种猪转录因子coup-tfl ;本专利技术的目的之二在于提供含有猪转录因子coup-tfl的重组载体；本专利技术的目的之三在于提供猪转录因子coup-tfl在降低猪肉膻味中的应用；本专利技术的目的之四在于提供猪转录因子coup-tfl在抑制CYPl IAl基因表达中的应用；本专利技术的目的之五在于提供猪转录因子C0Up-tfl在抑制CYP17A1基因表达中的应用；本专利技术的目的之六在于提供猪转录因子coup-tfl在抑制StAR基因表达中的应用；本专利技术的目的之七在于提供猪转录因子coup-tfl在降低雄烯酮含量中的应用。 1.猪转录因子coup-tfl,其特征在于,所述猪转录因子coup-tfl的核苷酸序列如SEQ ID N0.19 所示。2.含有权利要求1所述猪转录因子coup-tfl的重组载体。优选的，所述重组载体含有细胞筛选基因neo。3.所述猪转录因子coup-tfl在降低猪肉膻味中的应用。4.所述猪转录因子coup-tfl在抑制CYP11A1基因表达中的应用。5.所述猪转录因子coup-tfl在抑制CYP17A1基因表达中的应用。6.所述猪转录因子coup-tfl在抑制StAR基因表达中的应用。7.所述猪转录因子coup-tf l在抑制雄烯酮含量中的应用。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了猪转录因子coup-tfl，通过过量表达猪转录因子coup-tfl，调控CYP17和STAR基因表达，从而直接或间接负调控猪体内雄烯酮合成；同时还能调节粪臭素主要代谢酶CYP450，调控粪臭素的降解；同时由于COUP-TF的表达对雄烯酮的代谢起到负调控作用，进ー步减弱了雄烯酮对粪臭素代谢的抑制作用，而协同降低粪臭素在猪体中的浓度；利用本专利技术公开的猪转录因子coup-tfl能够降低猪肉膻味，能用于选育或者调节COUP-TF I获得低膻味的猪遗传品系，具有很好的应用前景。【专利附图】【附图说明】图1为巴马香猪组织总RNA (1、2为巴马睾丸RNA ;3、4为肝脏RNA)。图2为主要膻味基因在不同猪种肝脏中的表达情況。图3为主要膻味基因在不同猪种睾丸中的表达情況。图4为100ng/mL粪臭素的色谱图。图5为粪臭素标准曲线。图6为4月龄巴马猪肌肉和血浆粪臭素色谱图(A:4月龄巴马猪肌肉粪臭素色谱图；B:4月龄巴马猪血浆粪臭素色谱图)。图7为雄烯酮测定的标准曲线。图8为I月龄和6月龄不过筛培养法所培养的细胞经3 P -HSD染色后的状态(放大倍数:400 X，A:6月龄不过筛培养法；B:1月龄不过筛培养法) 图9为猪肝脏总RNA琼脂糖凝胶电泳图。图10为COUP-TF I `PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。图 11 为 pEGFP-Cl 酶切电泳图(M2:入-Hind III digest I =Vector DNA)。图12为以COUP-TF 1-pMD19_T为模板进行的PCR扩增结果图(Ml:DL2000 DNAMarker 1:PCR 扩增产物)。图13为瞬时转染I月龄猪睾丸间质细胞质粒裂解鉴定(M:DL1, 000DNA Marker ；1:空白对照；2:转染pEGFP-Cl质粒；3:转染COUP-TF 1-neo重组质粒)。图14为瞬时转染6月龄猪睾丸间质细胞质粒裂解鉴定(M:DL1000 DNA Marker ；1:空白对照；2:转染pEGFP-Cl质粒；3:转染COUP-TF 1-neo重组质粒)。图15为细胞总RNA电泳图细胞总RNA电泳图(A:1月龄睾丸间质细胞总RNA电泳图；B:6月龄睾丸间质细胞总RNA电泳图；1:转染COUP-TF 1-neo重组质粒；2:转染pEGFP-Cl质粒；3:空白对照)。图16为瞬时转染I月龄猪睾丸间质细胞基因相对表达量分析結果。图17为瞬时转染6月龄猪睾丸间质细胞的基因相对表达量分析結果。图18为I月龄和6月龄转染COUP-TF 1-neo后基因相对表达量分析結果。图19为转染COUP-TF 1-neo重组质粒的I月龄和6月龄睾丸间质细胞的基因相对表达量分析結果。【具体实施方式】以下将參照实施例，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。本专利技术所用的实验材料如无特别说明均为市售产品。目前，改善公猪膻味的研究主要是针对雄烯酮和粪臭素的脂肪沉积水平开展标记辅助选择研究，ー是数量性状位点(quantitative trait locus, QTL)定位研究；二是侯选基因研究。雄烯酮和粪臭素是引起猪肉膻味的化合物，两者在脂肪组织中的沉积取决于其在猪体内的合成和降解代谢水平。研究已发现CYP11A1，CYB5A, CYP17，StAR和3P-HSD、SULT2A1等分别雄烯酮合成和代谢的主要基因；粪臭素的合成仅依赖于营养因素，代谢主要由CYP2E1、CYP2A6、SULT1A1等完成。同时雄烯酮抑制了粪臭素的代谢，使两者产生了协同效应。COUP-TF I，又名EAR-3或NR2F1，是COUP-TFs基因的ー个亚型，即鸡卵清蛋白基因上游启动子转录因子，是核受体超家族的孤核受体。目前，对COUP-TF的研究主要集中在人和鼠上，在家畜中该基因的研究相对较少。一.不同猪种中COUP-TF I与膻味相关基因和膻味物质的关系StAR, CYP17A1、CYPlIAl主要存在于人及动物的睾丸中，參与雄烯酮的合成；CYP2C34、CYP2A19、CYP2E1主要存在于人及动物的肝脏中，是粪臭素代谢的主要代谢酶。研究长白猪、约克猪、太湖猪、荣昌猪和巴马猪肝脏和睾丸中COUP-TFl影响膻味表达的主要基因的表达水平及特性对控制公猪膻味具有重要意义。1.以P-actin为内參基因，本文档来自技高网...
【技术保护点】
猪转录因子coup?tf1，其特征在于，所述猪转录因子coup?tf1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘宇，魏泓，商海涛，郭科男，郑小波，吴群，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：
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