一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法技术

本发明专利技术提出一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法，不仅节省了耗材，同时具有高灵敏度，高特异性的特点，检测结果更可靠。该方法包括以下步骤：（1）分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成，其中设计的上游引物(22nt)为5’-CAGACTGTGTTTCTCCCTTCTC-3’，延伸阻滞引物(36nt)为5’-taAGGTCAAGAGGACTCATGTACTGGTCCCTCATTG-3’，分子信标探针(34nt)为FAM-acgcATTGTACTCCTCTTGACCTGCTGTatgcgt-BHQ2；（2）提取被测样本的基因组DNA；（3）配制反应体系；（4）PCR反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用探针熔解技术检测KRAS基因突变的方法。
技术介绍
基因突变是指基因组DNA分子在结构功能上发生碱基组成或排列顺序的改变，主要包括碱基的替代和片段的插入缺失，是导致基因型疾病的重要原因之一。基因突变分析在生物医学研究中，尤其是在基因型疾病诊断及病理研究中有着非常重要的作用。KRAS基因编码的蛋白参与由表皮生长因子受体(EGFR)介导的细胞信号转导通路，影响细胞的增殖、生长和转移；正常的KRAS基因编码的蛋白在接受上游信号活化后被激活，并将在信号传递给下游细胞因子后恢复非激活状态；而突变的KRAS基因所编码的蛋白无需上游信号活化便始终处于激活状态，导致细胞的非正常增殖和生长，引起恶性肿瘤。抗EGFR类肿瘤药物通过特异性阻滞EGFR与受体结合，阻断细胞转导通路，从而达到抑制癌细胞增殖的目的；多项研究发现，接受抗EGFR药物治疗的结直肠癌患者中，KRAS基因野生型的病人较KRAS基因突变型病人更能从治疗中受益:具有更高的药物客观反应率和较长的生存时间。因此，能够准确检测KRAS突变状态对指导结直肠癌患者临床用药有重要意义。传统检测KRAS基因突变的方法多种多样，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法，包括以下步骤：（1）分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成上游引物(22nt):5’?CAGACTGTGTTTCTCCCTTCTC?3’延伸阻滞引物(36nt):5’?taAGGTCAAGAGGACTCATGTACTGGTCCCTCATTG?3’分子信标探针(34nt):FAM?acgcATTGTACTCCTCTTGACCTGCTGTatgcgt?BHQ2（2）提取被测样本的基因组DNA；（3）配制反应体系在反应管中加入被测样本的基因组DNA、上游引物、延伸阻滞引物、UNG酶(尿嘧啶?N?糖基化酶)、5’→3’外切酶活性缺失聚合酶(TIANN...

【技术特征摘要】
1.一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法，包括以下步骤: (O分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成 上游引物(22nt):5’ -CAGACTGTGTTTCTCCCTTCTC-3’ 延伸阻滞引物(36nt):5，-taAGGTCAAGAGGACTCATGTACTGGTCCCTCATTG-3， 分子信标探针(34nt):FAM-acgcATTGTACTCCTCTTGACCTGCTGTatgcgt-BHQ2 (2)提取被测样本的基因组DNA； (3)配制反应体系 在反应管中加入被测样本的基因组DNA、上游引物、延伸阻滞引物、UNG酶(尿嘧啶-N-糖基化酶)、5’ 一3’外 切酶活性缺失聚合酶(TIANNIUM Taq DNA Polymerase),dNTPs(脱氧核糖核苷三磷酸)、dUTP(脱氧尿苷三磷酸)、分子信标探针、IOXPCRBuffer(TIANNIUM Taq PCR Buffer)； (4)PCR反应 将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增和熔解，PCR反应完成后进行熔解曲线分析，通过熔解峰的Tm值判断...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈超，戴鹏高，刘金辉，宿志瑞，邹晖，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：