基于转座子的分子引物对家蚕微孢子虫的分型检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于转座子的分子引物对家蚕微孢子虫的分型检测方法，按照如下步骤完成：（1）用CTAB方法提取家蚕样本微孢子虫的基因组DNA；（2）用MseI完全消化步骤（1）所得的家蚕样本微孢子虫的基因组DNA，然后与接头引物等混合形成20μl的反应体系；（3）连接有接头的家蚕样本微孢子虫的基因组DNA使用的接头引物和MITE特异性引物在25μl反应体系中进行扩增；（4）预扩增产物稀释20倍在第二轮PCR使用；（5）最终产物在1％琼脂糖凝胶上进行电泳。本检测技术对家蚕微孢子虫的检测具有有效性强、特异性高、灵敏性高等特点，并且适用于小量样品操作，操作流程巧妙。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，具体地说，涉及一种。
技术介绍
转座元件(transposable element),是广泛分布于真核生物中的一类可移动的DNA片段，最早由美国冷泉港生物实验室著名遗传学家B.Mc Clintock在玉米中发现。MITE(miniature inverted repeat transposable element),即为转座子，是 Bureau 等新近发现的一类转座元件，其结构 与非自主元件相似，具有TIR或TSD结构，但又具有反转录转座元件的高拷贝性。MITE广泛分布在植物和动物的基因组中，并且多存在于基因富集区，推测其对基因组进化和基因表达等具有较大的影响。目前，MITEs已在许多生物体中发现，如水稻、秀丽隐杆线虫、蚊子、人、真菌。MITE的长度较短，一般为100 700bp，不能编码转座酶。它具有末端倒转重复序列(terminal inverted repeats,TIRs)和祀位点重复(target siteduplication,TSD)，并且能形成稳定的发夹式的二级结构。它倾向于插入到基因的内含子区或基因的5'和3'末端，但很少插入基因编码区，有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于转座子的分子引物对家蚕微孢子虫的分型检测方法，其特征在于，按照如下步骤完成：（1）、用CTAB方法提取家蚕样本微孢子虫的基因组DNA；（2）、用MseI酶完全消化步骤（1）所得的家蚕样本微孢子虫的基因组DNA，并与接头引物混合连接，形成连接混液，具体反应为0.5ml离心管中加入下列反应物并且混合均匀：接头引物：5′?CAGGGTGGGCAAA?3′??????????????SEQ?NO?1；（3）、将步骤（2）所得的连接混液取1μl，在以下25μl反应体系中进行预扩增：A.在0.5ml离心管中加入以下反应物并且混合均匀：PCR反应扩增的引物：NbME5特异引物：5′?AAAGTTTG...

【技术特征摘要】
1.种基于转座子的分子引物对家蚕微孢子虫的分型检测方法，其特征在于，按照如下步骤完成: (1)、用CTAB方法提取家蚕样本微孢子虫的基因组DNA； (2)、用MseI酶完全消化步骤(1)所得的家蚕样本微孢子虫的基因组DNA，并与接头引物混合连接，形成连接混液，具体反应为0.5ml离心管中加入下列反应物并且混合均匀:2.据权利要求1所述的基于转座子的分子引物对家蚕微孢子虫的分型检测方法，其特征在于:所述微孢子虫特异性MITE分型法检测引物核苷酸序列: NbME5 特异引物:5' -AAAGTTTGCCCACCCCTG-3'SEQ N02 ； NbMEl 特异性引物:5' -CCCTTGGGAAACACTG-3'SEQ N03 ； 接头引物:5' -CAGGGTGGGCAAA-3'SEQ NOl ； 锚定引物 1:5'...

【专利技术属性】
技术研发人员：许金山，周泽扬，潘国庆，王林玲，李治，党晓群，
申请(专利权)人：重庆师范大学，
类型：发明
国别省市：