一种检测 TYMS mRNA 基因表达量的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测TYMS?mRNA基因表达量的试剂盒及方法。该试剂盒包括用于制作标准曲线的标准品、内参基因实时定量PCR体系。通过该方法能准确、快速、定量地确定TYMS基因表达量。本发明专利技术所述方法和试剂盒应用在临床中，有利于医生合理化选择氟类药物进行治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测TYMS mRNA基因表达量的试剂盒及方法。
技术介绍
氟尿嘧啶(Fluorouraci 1，5_FU)是第一个抗代谢药物，也是目前临床上应用最广泛的抗嘧啶类药物。它对消化道肿瘤及其他实体瘤均有良好疗效，在肿瘤内科治疗中占有重要地位。5-FU本身没有抗肿瘤活性，当其进入人体后，可被转化为活性代谢产物:一磷酸氟尿嘧啶脱氧核苷(FdUMP)、三磷酸氟尿嘧啶脱氧核苷(FdUTP)和三磷酸氟尿嘧啶(FUTP)，进而产生抗肿瘤活性。除5-FU，氟类药物还包括替加氟、卡莫氟、氟尿苷、脱氧氟尿苷以及卡培他滨等。TYMS (Thymidylate Synthetase，TS)基因编码的胸苷酸合成酶，是嘧啶核苷酸合成的限速酶，是肿瘤生长的重要因子，也是5-FU发挥细胞毒作用的目标酶。5-FU转化为FdUMP后，与TS、5，10-亚甲基四氢叶酸结合形成三联复合物，dUMP与TS结合后转化为脱氧胸腺嘧啶核苷dTMP，使DNA合成受限。多种肿瘤的临床研究均显示TYMS mRNA表达水平与5-FU疗效密切相关，例如:结直肠癌、肺癌、乳腺癌、头颈鳞状细胞癌等。临床研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测?TYMS?mRNA?基因表达量的试剂盒，其特征在于：包括以下组成部分：（1）TYMS基因标准品：含有TYMS基因编码序列的重组载体，所述TYMS基因编码序列如SEQ?ID?NO.1所示；（2）检测TYMS基因的上、下游引物：TYMS?上游引物：5’??CAACCCTGACGACAGAAGAATCA??3’；TYMS?下游引物：5’??ATGGCATGGAGGCAGCG??3’。

【技术特征摘要】
1.一种检测TYMS mRNA基因表达量的试剂盒，其特征在于:包括以下组成部分: (I )TYMS基因标准品:含有TYMS基因编码序列的重组载体，所述TYMS基因编码序列如SEQ ID N0.1 所示； (2)检测TYMS基因的上、下游引物: TYMS-上游引物:5’ - CAACCCTGACGACAGAAGAATCA -3’ ； TYMS-下游引物:5，- ATGGCATGGAGGCAGCG -3，。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述重组载体的空载体为PUC57载体。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括逆转录缓冲液、逆转录引物Oligo-(dT)、dNTPs溶液、M-MLV逆转录酶、定量PCR缓冲液和TaqDNA聚合酶。4.一种基于权利要求1至3任一项所述试剂盒检测TYMS mRNA基因表达量的方法，包括如下步骤: (O从待测标本中提取总RNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭成贤，张伟，陈小平，刘昭前，周宏灏，
申请(专利权)人：周宏灏，
类型：发明
国别省市：