一种检测 RRM1 mRNA 基因表达量的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测RRM1?mRNA基因表达量的试剂盒及方法。该试剂盒包括用于制作标准曲线的标准品、内参基因实时定量PCR体系。通过该方法能准确、快速、定量地确定RRM1基因表达量。本发明专利技术所述方法和试剂盒应用在临床中，有利于医生合理化选择吉西他滨进行治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测RRMl mRNA基因表达量的试剂盒及方法。
技术介绍
吉西他滨(Gemcitabine)为脱氧胞嘧啶核苷的类似物，为核苷酸还原酶抑制剂。属细胞周期特异性抗代谢类化疗药，主要作用于S期(DNA合成期)的肿瘤细胞，同时也阻断细胞周期由Gl期(DNA合成前期)向S期过渡。吉西他滨作为一种前体药在细胞内是脱氧胸苷激酶磷酸化的底物，在酶的作用下转化成活性代谢物dFdCDP (吉西他滨二磷酸盐)和dFdCTP (吉西他滨三磷酸盐)。dFdCDP可抑制核糖核苷酸还原酶(ribonucleotidereductase, RR),导致dFdCTP大量积聚。dFdCTP则与dCTP竞争结合进入DNA链，插入至DNA链中脱氧胞苷的位点，并允许鸟苷与其配对，使其免受核糖核酸外切酶的移除修复，造成DNA链合成停止，进而导致DNA断裂、细胞死亡，达到治疗肿瘤的目的。临床上主要用于治疗非小细胞肺癌、胰腺癌·、膀胱癌、乳腺癌和其他实体肿瘤。RRMl基因(定位于I号染色体短臂)编码核糖核苷酸还原酶Ml亚单位(RRMl)。核糖核苷酸还原酶(RR)参与核糖核苷酸还原成脱氧核本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测?RRM1?mRNA?基因表达量的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以下组成部分：（1）RRM1基因标准品：含有RRM1基因编码序列的重组载体，所述RRM1基因编码序列如SEQ?ID?NO.1所示；（2）内对照β?actin基因标准品：含有β?actin基因编码序列的重组载体，所述β?actin基因编码序列如SEQ?ID?NO.2所示；（3）检测RRM1基因的上、下游引物：RRM1?上游引物：5’??CTGGAAGCAGGGTTTGAAGAC??3’；RRM1?下游引物：5’??GATTGGATTAGCCGCTGGTC??3’；（4）检测β?actin基因的上、下游引物：β?actin...

【技术特征摘要】
1.一种检测RRMl mRNA基因表达量的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括以下组成部分: (1)RRMl基因标准品:含有RRMl基因编码序列的重组载体，所述RRMl基因编码序列如SEQ ID N0.1 所示； (2)内对照P-actin基因标准品:含有P-actin基因编码序列的重组载体，所述3 -actin基因编码序列如SEQ ID N0.2所不； (3)检测RRMl基因的上、下游引物: RRMl-上游引物:5’ - CTGGAAGCAGGGTTTGAAGAC -3’ ；RRMl-下游引物:5’ - GATTGGATTAGCCGCTGGTC -3’ ； (4)检测P-actin基因的上、下游引物: 3-actin-上游引物:5，- CTCGCCTTTGCCGATCC -3，； 3-actin-下游引物:5，- CATGCCGGAGCCGTTG -3，。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述含有RRMl基因编码序列的重组载体和含有0 -actin基因编码序列的重组载体中的空载体均为pUC57载体。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括逆转录缓冲液、逆转录引物Oligo-(dT)、dNTPs溶液、M-MLV逆转录酶、定量PCR缓冲液和TaqDNA聚合酶。4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭成贤，张伟，陈小平，刘昭前，周宏灏，
申请(专利权)人：周宏灏，
类型：发明
国别省市：